本文關(guān)鍵詞：TCF21對(duì)卵巢癌細(xì)胞增殖和凋亡的作用

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【摘要】：卵巢癌的致死率居?jì)D科惡性腫瘤的首位。卵巢癌起病隱匿,70%發(fā)現(xiàn)時(shí)已為晚期,晚期卵巢癌的生存率不到30%,而早期發(fā)現(xiàn)的卵巢癌經(jīng)過(guò)手術(shù)和化療,大部分可以達(dá)到治愈或完全緩解,其5年生存率可達(dá)90%。據(jù)美國(guó)卵巢癌治療研究報(bào)道,卵巢癌在美國(guó)女性惡性腫瘤的死亡原因中位于第五。因此早診斷、早治療對(duì)于提高卵巢癌患者的生存率非常重要。診治卵巢癌的一大難點(diǎn)是其早期缺乏特異的臨床表現(xiàn)和靈敏的篩查方法,因此研究卵巢癌發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制,為早期診治卵巢癌尋找新的靶點(diǎn)是非常必要的。近來(lái)研究表明,TCF21是一種抑癌基因,在頭頸癌、肺癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、胃癌和黑色素瘤等多種腫瘤中呈低表達(dá)狀態(tài)。關(guān)于TCF21在腫瘤中的作用機(jī)制有兩個(gè)方面:一是啟動(dòng)子甲基化導(dǎo)致其表達(dá)下調(diào),從而導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生發(fā)展,這種下調(diào)機(jī)制已得到了較多研究的證實(shí);另一方面是Zhang等人在腎癌中發(fā)現(xiàn)mi R-21通過(guò)下調(diào)TCF21,從而抑制Kiss-1基因的表達(dá),增加腎癌的侵襲能力,表明TCF21上游調(diào)控基因可能是mi R-21,其下游調(diào)控基因可能是Kiss-1基因。在惡性黑色素瘤、腎癌和結(jié)直腸癌均發(fā)現(xiàn)TCF21的下游調(diào)控基因可能是Kiss-1基因,那么在TCF21下游,是否只調(diào)控Kiss-1使其表達(dá)增高,從而抑制腫瘤的轉(zhuǎn)移?在腫瘤的增殖和凋亡方面是否同樣存在TCF21的下游調(diào)控基因?有待進(jìn)一步證實(shí)。研究發(fā)現(xiàn)惡性黑色素瘤、肺癌、頭頸癌、乳腺和卵巢癌的發(fā)生可能與6號(hào)染色體區(qū)域6q22和6q23-q24的雜合型缺失相關(guān),而TCF21基因就位于6號(hào)染色體區(qū)域6q23-q24,且已有研究報(bào)道TCF21在惡性黑色素瘤、肺癌、頭頸癌、乳腺呈低表達(dá)狀態(tài),但對(duì)于TCF21在卵巢癌的表達(dá)情況及作用機(jī)制目前尚無(wú)文獻(xiàn)報(bào)道。目的:本研究探討TCF21對(duì)卵巢癌細(xì)胞增殖和凋亡的作用及其可能的作用調(diào)控機(jī)制。方法:1分別采用熒光實(shí)時(shí)定量PCR和Western-blot方法檢測(cè)卵巢癌組織和正常卵巢組織的TCF21m RNA和蛋白水平。2利用Gateway克隆技術(shù)把目的基因TCF21克隆到目的載體上,并對(duì)目的載體進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳和DNA序列檢測(cè)檢測(cè)。3利用慢病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)在卵巢癌Ovcar8細(xì)胞中高表達(dá)TCF21基因,并用抗生素對(duì)轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞進(jìn)行篩選。4將細(xì)胞分為空白對(duì)照組(Ovcar8)和實(shí)驗(yàn)組(Ovcar8-TCF21),以熒光實(shí)時(shí)定量PCR和Western-blot方法檢驗(yàn)TCF21基因在實(shí)驗(yàn)組第1、3、5代和空白對(duì)照組的表達(dá)水平。5采用MTT法檢測(cè)TCF21高表達(dá)對(duì)Ovcar8增殖的影響。6采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)TCF21高表達(dá)對(duì)Ovcar8凋亡的影響。7運(yùn)用熒光實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)Cyclin A、B、C、D和CKD2、3、4、6在實(shí)驗(yàn)組和空白對(duì)照組的表達(dá)水平。結(jié)果:1卵巢癌組織中的TCF21的表達(dá):熒光實(shí)時(shí)定量PCR和Western-blot均顯示,卵巢癌組織中的TCF21m RNA和蛋白表達(dá)水平較正常卵巢組織低;2目的載體檢測(cè):電泳條帶顯示兩條帶,DNA序列檢測(cè)顯示目的載體的序列與TCF21基因的69-1028bp重合;3轉(zhuǎn)染效果的觀察:利用抗生素篩選,空白對(duì)照組細(xì)胞全部死亡,實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞90%存活;4目的基因的表達(dá):熒光實(shí)時(shí)定量PCR和Western-blot檢測(cè)均顯示實(shí)驗(yàn)組的第1、3、5代細(xì)胞組較空白對(duì)照組TCF21m RNA和蛋白表達(dá)水平明顯上升;5 MTT法檢測(cè)TCF21高表達(dá)對(duì)Ovcar8增殖能力的影響:結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組與空白對(duì)照組比較在24h的OD值無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),在48h、72h、96h的OD值降低,且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);6流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)TCF21高表達(dá)對(duì)Ovcar8凋亡的影響:結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組較空白對(duì)照組細(xì)胞凋亡率明顯上升,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);7 Cyclin A、B、C、D和CKD2、3、4、6在實(shí)驗(yàn)組和空白對(duì)照組的表達(dá)水平:熒光實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)顯示,實(shí)驗(yàn)組與空白對(duì)照組比較,Cyclin C和CKD2表達(dá)水平明顯降低,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),其余基因表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)論:1卵巢癌組織中的TCF21基因的表達(dá)下降。2高表達(dá)TCF21后Ovcar8的細(xì)胞生長(zhǎng)受抑制,凋亡率增高。
【關(guān)鍵詞】：TCF21 卵巢癌 增殖 凋亡 細(xì)胞周期蛋白
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.31
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 英文縮寫10-11
• 前言11-12
• 材料與方法12-28
• 結(jié)果28-29
• 附圖29-34
• 附表34-35
• 討論35-39
• 結(jié)論39-40
• 參考文獻(xiàn)40-42
• 綜述 TCF21在腫瘤中的研究進(jìn)展42-48
• 參考文獻(xiàn)45-48
• 致謝48-49
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷49

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 Fabio Coppedè;Angela Lopomo;Roberto Spisni;Lucia Migliore;;Genetic and epigenetic biomarkers for diagnosis, prognosis and treatment of colorectal cancer[J];World Journal of Gastroenterology;2014年04期

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本文編號(hào)：695930