本文關(guān)鍵詞：HER2蛋白在上皮性卵巢癌中的表達及曲妥珠單抗對卵巢癌SKOV3細胞的影響

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【摘要】：目的:檢測HER2蛋白在上皮性卵巢癌組織中的表達及基因擴增情況,初步探討HER2與年齡,病理分期,組織分級,病理類型及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系;初步研究新型HER2靶向治療藥物曲妥珠單抗(赫賽汀,Herceptin)對HER2蛋白過表達的卵巢癌SKOV3細胞增殖的作用,對SKOV3細胞凋亡、周期及早期凋亡蛋白caspase-3表達的影響,分析曲妥珠單抗的抗腫瘤機制,進一步探討HER2蛋白在上皮性卵巢癌發(fā)生發(fā)展中的作用,為上皮性卵巢癌的靶向治療提供實驗依據(jù)。方法:1收集河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院婦產(chǎn)科2013年2月~2014年2月期間手術(shù)切除并經(jīng)病理證實的上皮性卵巢癌56例(其中漿液性乳狀頭囊腺癌40例,黏液性乳頭狀囊腺癌16例),術(shù)前均未接受過激素治療或放化療,患者的年齡為35~75歲,平均58.2歲。選取上皮性卵巢良性腫瘤20例(漿液性乳頭狀囊腺瘤13例,黏液性乳頭狀囊腺瘤7例),正常卵巢組織15例。根據(jù)FIGO標(biāo)準(zhǔn),在56例上皮性卵巢癌中,I~II期21例,III~IV期35例。高分化(G1)13例,中分化(G2)21例,低分化(G3)22例。淋巴轉(zhuǎn)移陽性者40例,淋巴轉(zhuǎn)移陰性者16例。采用免疫組化(IHC)SP方法檢測HER2蛋白在上皮性卵巢癌、上皮性卵巢良性腫瘤及正常卵巢組織中的表達情況。采用q RT-PCR法檢測HER2基因在上皮性卵巢癌及正常卵巢組織中的相對擴增情況。實驗所得數(shù)據(jù)應(yīng)用統(tǒng)計軟件SPSS13.0處理,以P0.05為差異具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義。2體外培養(yǎng)人上皮性卵巢癌SKOV3細胞,37℃,5%CO2的恒溫培養(yǎng)箱中傳代培養(yǎng)并凍存。3本實驗分為對照組(藥物濃度為0μg/l)及不同濃度曲妥珠單抗(赫賽汀,Herceptin)藥物組,采用MTS方法檢測SKOV3細胞加不同濃度赫賽汀(5、10、20、40和80μg/l)繼續(xù)培養(yǎng)48h后,藥物對細胞增殖活力的影響,計算相應(yīng)濃度抑制率及IC50。4本實驗分為對照組(藥物濃度為0μg/l)及不同濃度曲妥珠單抗(赫賽汀,Herceptin)藥物組。SKOV3細胞加不同濃度的赫賽汀(0、10、20、40μg/l)繼續(xù)培養(yǎng)48h后,采用PI染色法利用流式細胞儀對其進行細胞周期的分析;采用Annexin V/PI染色法利用流式細胞儀對其進行細胞凋亡分析;采用Western blot法檢測細胞內(nèi)早期凋亡蛋白caspase-3的相對表達情況。實驗所得數(shù)據(jù)應(yīng)用統(tǒng)計軟件SPSS13.0處理,以P0.05為差異具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果:1 HER2蛋白在卵巢惡性組、良性組、正常組織組中陽性表達率分別是42.9%、15.0%、6.7%,惡性組HER2表達率顯著高于良性組及正常組(P0.05),且隨FIGO分期及腫瘤組織學(xué)分級的升高,HER2表達率相應(yīng)增加(P0.05),淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性者HER2表達率顯著高于陰性者(P0.05)。HER2蛋白與年齡及病理類型不相關(guān)(P0.05)。2 q RT-PCR結(jié)果進一步顯示,上皮性卵巢癌組織中HER2表達顯著高于卵巢正常組織組,2-ΔΔCт值為55.26±2.00,惡性組與正常組比較,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。在上皮性卵巢癌中,病理分期越晚、腫瘤組織學(xué)分級越高,HER2基因的相對表達越高(P0.05)。另外在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性的上皮性卵巢癌組織中HER2的相對表達量顯著高于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性者(P0.05)。3 MTS結(jié)果顯示,赫賽汀對人上皮性卵巢癌SKOV3細胞具有增殖抑制作用,實驗組(赫賽汀濃度為5、10、20、40、80μg/l),培養(yǎng)48h后,OD值分別為0.622±0.019、0.547±0.023、0.410±0.020、0.350±0.016、0.322±0.021,而對照組(赫賽汀為0μg/l)OD值為0.806±0.020,實驗組與對照組及各實驗組間相比,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。統(tǒng)計學(xué)Logit法計算IC50為29.224μg/l。4 PI染色法(FCM)結(jié)果顯示,實驗組SKOV3細胞加藥(赫賽汀濃度10、20、40μg/l)培養(yǎng)48h后,G0/G1期細胞比例明顯增高(54.300±1.776、63.150±1.792、68.800±1.120),與對照組(47.967±1.983)比較,組內(nèi)及組間差異均具有顯著性(P0.05),而G2/M期(13.150±0.903、10.835±0.776、8.797±0.680)和S期(32.417±1.745、26.017±1.429、22.483±1.402)細胞比例相應(yīng)減少,與對照組G2/M期(15.167±1.242)和S期(37.067±1.772)相比較,組內(nèi)及組間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。5 Annexin V/PI染色法(FCM)結(jié)果顯示,SKOV3細胞加藥(赫賽汀濃度10、20、40μg/l)培養(yǎng)48小時后,總凋亡率隨藥物濃度的增加而顯著升高,實驗組SKOV3細胞總凋亡率分別為11.745±1.346、19.905±1.793、24.830±2.120,對照組凋亡率為6.397±1.598,實驗組與對照組及各實驗組間相比,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。6蛋白質(zhì)印跡(Western blot)結(jié)果顯示,實驗組SKOV3細胞加藥(赫賽汀濃度10、20、40μg/l)培養(yǎng)48小時后,caspase-3蛋白隨藥物濃度的增加而相應(yīng)增加,SKOV3細胞內(nèi)caspase-3蛋白相對表達量依次為0.432±0.023,0.639±0.026,0.683±0.019,對照組為0.348±0.020。實驗組與對照組及各實驗組間相比,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:HER2蛋白在上皮性卵巢癌中高度表達,基因相對擴增率較高,且HER2表達與病理分期、腫瘤組織學(xué)分級及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān),說明HER2蛋白在上皮性卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用,并可能成為卵巢惡性上皮腫瘤預(yù)后不良的指標(biāo)。赫賽汀對體外培養(yǎng)的卵巢癌SKOV3細胞具有明顯的增殖抑制作用,使細胞周期阻滯于G0/G1期。同時赫賽汀使SKOV3細胞的總凋亡率增加及上調(diào)SKOV3細胞內(nèi)caspase-3蛋白,說明周期阻滯,誘導(dǎo)凋亡可能是赫賽汀抗腫瘤機制之一。本研究為HER2基因靶向治療應(yīng)用于上皮性卵巢癌提供了基礎(chǔ)實驗依據(jù),為上皮性卵巢癌的治療提供了新靶點。
【關(guān)鍵詞】：HER2 上皮性卵巢癌 赫賽汀 卵巢癌SKOV3細胞 細胞周期 凋亡 caspase-3
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.31
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-11
• 英文縮寫11-12
• 前言12
• 材料與方法12-20
• 結(jié)果20-23
• 附圖23-28
• 附表28-32
• 討論32-35
• 結(jié)論35-36
• 參考文獻36-40
• 綜述40-53
• 參考文獻46-53
• 致謝53-54
• 個人簡歷54

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