發(fā)布時間：2017-08-17 09:20

  本文關(guān)鍵詞：RACK1對肝細胞基本功能以及肝細胞氧化應激損傷的影響

  更多相關(guān)文章： RACK1 條件性基因敲除 活性氧簇 TNF-α誘導的細胞死亡

【摘要】：背景:支架蛋白RACK1(Receptor for activated C kinase 1,活化的C激酶受體1),是WD重復序列家族成員,由7個Trp-Asp(WD40)高度保守的序列組成,分子量約為36KD,因與G蛋白β2亞基同源也被稱為GNB2L1(Guanine nucleotide-binding protein subunit beta-2-like 1,鳥苷酸結(jié)合蛋白亞基beta2樣)。RACK1可以依靠其表面形成的豐富的蛋白-大分子相互作用表位與多種胞漿蛋白及細胞亞結(jié)構(gòu)結(jié)合,參與多條胞內(nèi)信號通路以及細胞生命活動的調(diào)節(jié)。多項研究表明,RACK1在肝細胞癌中存在高表達,通過不同機制促進肝細胞癌發(fā)展。然而RACK1在正常肝組織中發(fā)揮怎樣的作用卻尚屬未知。本研究主要利用RACK1在肝細胞內(nèi)條件性基因敲除小鼠,對RACK1在正常肝細胞中發(fā)揮怎樣的作用進行研究;進一步對RACK1在氧化應激相關(guān)的肝損傷動物模型以及細胞模型中發(fā)揮的作用進行探討。目的:探討RACK1在肝細胞內(nèi)缺失對小鼠存活率的影響;探討RACK1在肝細胞內(nèi)缺失對肝功能及肝組織代謝的影響;探討RACK1在肝細胞內(nèi)缺失對肝細胞氧化應激損傷的影響;探討RACK1在肝癌細胞應對氧化應激損傷中的作用和機制。方法:我們利用課題組已經(jīng)建立的RACK1肝細胞內(nèi)特異性敲除小鼠模型進行相關(guān)課題的研究。基因型為RACK1 loxp+/+,Alb+/-的稱為KO小鼠;相應的,基因型為RACK1 loxp+/+,Alb-/-的小鼠為對照小鼠(WT),對同窩同性別的WT和KO小鼠進行體重檢測、鼠尾血的采集,探討了RACK1在肝實質(zhì)細胞內(nèi)的缺失對小鼠生存率及肝功能的影響;通過對小鼠肝組織的免疫組化檢測及油紅O檢測,探討了RACK1在肝細胞增殖及代謝中的作用;利用肝臟缺血再灌注的病理模型,觀察RACK1在肝細胞氧化應激損傷中的作用;利用原代肝細胞分離方法從體外方面驗證了RACK1在肝細胞中對TNF-α誘導的細胞死亡的作用;課題組其他成員利用免疫共沉淀結(jié)合質(zhì)譜鑒定的方法發(fā)現(xiàn)了RACK1潛在結(jié)合蛋白氧化還原酶CBR1,我們利用免疫共沉淀的方法驗其相互作用;利用流式檢測方法驗證了RACK1與CBR1在肝細胞系細胞氧化應激損傷中的作用,并對機制進行探討。結(jié)果:通過對WT和KO小鼠中的多項平行實驗的觀察,未發(fā)現(xiàn)RACK1缺失對小鼠的生存率及體重有顯著性影響;發(fā)現(xiàn)RACK1缺失能夠造成一定程度的肝細胞本底增殖,發(fā)現(xiàn)RACK1缺失導致脂肪堆積并一定程度的加重肝缺血再灌注損傷。在分離的WT和KO小鼠的原代肝細胞中,發(fā)現(xiàn)RACK1的缺失顯著增強了TNF-α和CHX誘導的肝細胞死亡。在肝癌細胞系中,發(fā)現(xiàn)敲低RACK1會促進細胞ROS(Reactive Oxygen Species,活性氧簇)產(chǎn)生,發(fā)現(xiàn)RACK1能夠促進CBR1表達上調(diào),進而發(fā)現(xiàn)RACK1能夠通過CBR1抑制肝癌細胞ROS產(chǎn)生。結(jié)論:RACK1在正常肝細胞中的缺失對肝組織代謝造成一定影響并一定程度的增加肝缺血再灌注損傷;在肝癌細胞系中,RACK1通過CBR1抑制ROS產(chǎn)生,拮抗TNF-α和過氧化氫誘導的細胞死亡。
【關(guān)鍵詞】：RACK1 條件性基因敲除 活性氧簇 TNF-α誘導的細胞死亡
【學位授予單位】：河南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-8
• 縮略詞表8-13
• 前言13-15
• 第一章 RACK1基因在肝細胞內(nèi)的缺失對小鼠生長發(fā)育的影響15-29
• 第一節(jié) RACK1在肝細胞內(nèi)特異性缺失對小鼠生長發(fā)育及肝功能影響17-21
• 1 材料和方法17-18
• 1.1 實驗動物17
• 1.2 主要的材料和儀器17
• 1.3 小鼠出生率統(tǒng)計17
• 1.4 不同周齡KO、WT小鼠體重統(tǒng)計17
• 1.5 鼠尾靜脈采血17-18
• 1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計學分析18
• 2 結(jié)果18-21
• 2.1 RACK1在肝細胞內(nèi)特異性缺失對小鼠出生率的影響18
• 2.2 RACK1在肝細胞內(nèi)特異性缺失對小鼠體重的影響18-20
• 2.3 RACK1在肝細胞內(nèi)特異性缺失對小鼠肝功能的影響20-21
• 第二節(jié) RACK1在肝細胞內(nèi)特異性缺失對肝細胞增殖及代謝的影響21-27
• 1 材料和方法21-23
• 1.1 實驗動物21
• 1.2 主要試劑21
• 1.3 主要儀器設備21
• 1.4 小鼠肝組織的摘取及組織切片的制備21
• 1.5 小鼠肝組織的免疫組化21-23
• 1.6 油紅O染色23
• 2 結(jié)果23-25
• 2.1 RACK1在肝細胞內(nèi)特異性缺失對肝組織表型的影響23-24
• 2.2 RACK1基因在肝細胞內(nèi)特異性缺失對肝細胞增殖的影響24
• 2.3 RACK1基因在肝實質(zhì)細胞內(nèi)的缺失對肝組織內(nèi)的脂肪代謝影響24-25
• 3 討論25-27
• 本章小結(jié)27-29
• 第二章 RACK1在肝細胞內(nèi)的缺失對肝細胞應對氧化應激的影響29-43
• 第一節(jié) RACK1在肝細胞內(nèi)的缺失對小鼠肝組織缺血再灌注的影響31-35
• 1 材料和方法31-32
• 1.1 實驗動物31
• 1.2 主要的材料和儀器31
• 1.3 主要試劑31
• 1.4 小鼠肝缺血再灌注模型建立31-32
• 1.5 小鼠轉(zhuǎn)氨酶檢測32
• 1.6 TUNEL免疫組化32
• 2 結(jié)果32-35
• 2.1 小鼠肝缺血再灌注后RACK1對轉(zhuǎn)氨酶的影響32-34
• 2.2 RACK1在肝細胞內(nèi)的特異性缺失對IR術(shù)后肝細胞凋亡的影響34-35
• 第二節(jié) RACK1對由TNF-Α 誘導的小鼠肝細胞氧化應激的影響35-41
• 1 材料和方法35-37
• 1.1 實驗動物35
• 1.2 細胞株35
• 1.3 主要試劑35-36
• 1.4 主要的儀器設備36
• 1.5 主要試劑配制36
• 1.6 小鼠肝實質(zhì)細胞分離方法36-37
• 1.7 Hoechst染色37
• 1.8 慢病毒感染細胞后凋亡檢測37
• 2 結(jié)果37-39
• 2.1 RACK1對由TNF-α加CHX所誘導的小鼠原代肝細胞的凋亡的影響37-38
• 2.2 RACK1基因在BNLCL.2 細胞內(nèi)敲低后對TNF-α誘導的細胞凋亡檢測38-39
• 3 討論39-41
• 本章小結(jié)41-43
• 第三章 RACK1通過抑制ROS產(chǎn)生，拮抗氧化應激損傷43-55
• 1 材料和方法43-46
• 1.1 細胞株43
• 1.2 主要試劑43
• 1.3 主要儀器設備43-44
• 1.4 常用試劑配備44
• 1.5 細胞轉(zhuǎn)染44
• 1.6 蛋白內(nèi)源性結(jié)合檢測44-45
• 1.7 ROS測定45
• 1.8 蛋白免疫印跡45-46
• 1.9 細胞凋亡的流式檢測46
• 2 結(jié)果46-52
• 2.1 肝癌細胞內(nèi)敲低RACK1對細胞凋亡的影響46-47
• 2.2 肝癌細胞內(nèi)敲低RACK1基因?qū)OS的影響47-48
• 2.3 肝癌細胞內(nèi)敲低CBR1對細胞凋亡的影響48-50
• 2.4 RACK1與CBR1存在相互作用50
• 2.5 細胞的RACK1蛋白與CBR1蛋白表達量的相關(guān)性檢測50-51
• 2.6 CBR1 在肝癌細胞20#敲低克隆中對凋亡的逆轉(zhuǎn)51-52
• 3 討論52-53
• 本章小結(jié)53-55
• 全文總結(jié)55-57
• 參考文獻57-59
• 綜述59-67
• 參考文獻65-67
• 攻讀學位期間所投出的文章及參加的會議67-68
• 致謝68-69

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8 王艷霞;劉儀;張偉;韓東寧;張源淑;;血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2(ACE2)對大鼠腎氧化應激損傷的保護作用及其機制[A];中國生理學會消化內(nèi)分泌生殖代謝生理專業(yè)委員會2011年消化內(nèi)分泌生殖學術(shù)會議論文摘要匯編[C];2011年

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1 周浩;Exendin-4減輕脂肪來源間充質(zhì)干細胞氧化應激損傷的機制研究[D];中國人民解放軍醫(yī)學院;2015年

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8 鄒玉凌;綠原酸對氧化應激損傷人視網(wǎng)膜色素上皮細胞保護作用的分子機制[D];南昌大學;2014年

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