本文關(guān)鍵詞：拉帕替尼通過影響PKM2表達(dá)進(jìn)而對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖的影響

  更多相關(guān)文章： 乳腺癌 丙酮酸激酶 同工酶 拉帕替尼 細(xì)胞增殖

【摘要】：目的:探討乳腺癌細(xì)胞M2型丙酮酸激酶(PKM2)與表皮生長(zhǎng)因子受體表達(dá)的相關(guān)性;探討拉帕替尼作為表皮生長(zhǎng)因子酪氨酸激酶抑制劑對(duì)PKM2表達(dá)的影響;探討拉帕替尼通過抑制PKM2表達(dá)對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖的影響;探討拉帕替尼通過抑制乳腺癌細(xì)胞PKM2表達(dá)對(duì)轉(zhuǎn)錄因子Stat3表達(dá)和磷酸化的影響。方法:1.選取了來自天津醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院2013-2014年間乳腺腫瘤科82例乳腺癌病人的癌和癌旁組織,通過免疫組化和組織蛋白Western blot分析乳腺癌的癌組織和癌旁組織中PKM2表達(dá)情況。并通過乳腺病理資料的分析研究乳腺癌組織PKM2與EGFR和HER2表達(dá)的相關(guān)性。2.選取MDA-MB-231和SK-BR-3乳腺癌細(xì)胞系,通過Western blot分析乳腺癌細(xì)胞系中PKM2表達(dá)情況,以及EGFR和HER2表達(dá)情況。選取高表達(dá)EGFR的乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231,利用si RNA對(duì)MDA-MB-231進(jìn)行EGFR基因沉默,通過Western blot檢測(cè)EGFR基因沉默對(duì)MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞系PKM2表達(dá)的影響。選取高表達(dá)HER2的乳腺癌細(xì)胞系SK-BR-3,利用si RNA對(duì)SK-BR-3進(jìn)行HER2基因沉默,通過Western blot檢測(cè)HER2基因沉默對(duì)SK-BR-3乳腺癌細(xì)胞系中PKM2表達(dá)的影響。3.選取高表達(dá)EGFR的MDA-MB-231和高表達(dá)HER2的SK-BR-3乳腺癌細(xì)胞系。通過Western blot和RT-PCR分析拉帕替尼對(duì)PKM2表達(dá)的影響。選取MDA-MB-231和SK-BR-3兩個(gè)乳腺癌細(xì)胞系,每個(gè)細(xì)胞系均分成兩組:拉帕替尼處理組和DMSO處理組。對(duì)每組細(xì)胞進(jìn)行EGF刺激,通過Western blot檢測(cè)EGF刺激24h和48h對(duì)各組細(xì)胞PKM2表達(dá)和Tyr-105磷酸化的影響;通過RT-PCR檢測(cè)EGF刺激24h對(duì)各組細(xì)胞PKM2表達(dá)的影響。選取120例經(jīng)免疫組化分析HER2(+++)或者經(jīng)FISH檢測(cè)提示HER2基因擴(kuò)增的晚期轉(zhuǎn)移性乳腺癌病人。將120乳腺癌病人分成兩組:放化療加拉帕替尼治療組和單純放化療的對(duì)照組。通過ELISA法分析這些病人經(jīng)拉帕替尼治療后血清中PKM2水平變化。4.選取MDA-MB-231和SK-BR-3乳腺癌細(xì)胞系,每個(gè)細(xì)胞系分成三組:拉帕替尼處理組,DMSO處理組,未處理組,用CCK8實(shí)驗(yàn)測(cè)定每個(gè)細(xì)胞系中各組細(xì)胞的增殖曲線,來觀察拉帕替尼對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖作用的影響。建立PKM2過表達(dá)的乳腺癌穩(wěn)定細(xì)胞系,經(jīng)拉帕替尼處理后通過CCK8實(shí)驗(yàn)測(cè)定過表達(dá)PKM2的乳腺癌細(xì)胞系細(xì)胞增殖曲線較比對(duì)照組有無變化。5.用si RNA對(duì)MDA-MB-231和SK-BR-3乳腺癌細(xì)胞系進(jìn)行PKM2的基因沉默,利用Western blot分析PKM2基因沉默的細(xì)胞系中與細(xì)胞增殖有關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子Stat3和Tyr-705磷酸化Stat3表達(dá)量較比對(duì)照組的變化。選取MDA-MB-231和SK-BR-3乳腺癌細(xì)胞系進(jìn)行了拉帕替尼處理實(shí)驗(yàn)。每個(gè)細(xì)胞系設(shè)置三個(gè)組:拉帕替尼處理組、DMSO處理組、未處理組。通過Western blot分析拉帕替尼處理組Stat3和Stat3(Tyr(P)-705)的表達(dá)量較比對(duì)照組的變化。結(jié)果:1.乳腺癌免疫組化分析和乳腺癌組織蛋白Western blot測(cè)定,以及對(duì)乳腺癌病理資料的分析結(jié)果表明:PKM2在乳腺癌組織中表達(dá)量比正常癌旁組織有顯著增加;乳腺癌組織病理資料通過卡方檢驗(yàn)進(jìn)行分析,結(jié)果顯示在乳腺癌組織中PKM2與HER2之間存在著正向的相關(guān)性,PKM2與EGFR之間存在著正向的相關(guān)性;利用si RNA對(duì)乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231的EGFR進(jìn)行基因沉默,結(jié)果顯示:MDA-MB-231細(xì)胞基因沉默后PKM2表達(dá)量較比對(duì)照組顯著降低;利用si RNA對(duì)乳腺癌細(xì)胞系SK-BR-3的HER2進(jìn)行基因沉默,結(jié)果顯示:SK-BR-3細(xì)胞基因沉默后PKM2表達(dá)量較比對(duì)照組顯著降低。2.EGF刺激相同時(shí)間時(shí),經(jīng)拉帕替尼處理的細(xì)胞系中PKM2的表達(dá)量比DMSO處理組顯著降低。在拉帕替尼處理組中,EGF刺激對(duì)PKM2表達(dá)量的影響不大;而在DMSO處理組,EGF刺激后PKM2表達(dá)量較比未經(jīng)EGF刺激組有顯著增高。3.通過ELISA法測(cè)定病人血清PKM2的水平,結(jié)果說明放化療加拉帕替尼治療的乳腺癌患者血清中PKM2的水平比單純放化療的乳腺癌患者血清PKM2的水平有顯著的降低。4.將經(jīng)拉帕替尼處理的MDA-MB-231和SK-BR-3乳腺癌細(xì)胞系通過CCK8實(shí)驗(yàn)繪制細(xì)胞增殖曲線,結(jié)果顯示經(jīng)拉帕替尼處理的MDA-MB-231和SK-BR-3乳腺癌細(xì)胞較比DMSO處理組和未處理組增殖顯著減慢;PKM2過表達(dá)的MDA-MB-231和SK-BR-3乳腺癌穩(wěn)定細(xì)胞系經(jīng)拉帕替尼處理后,細(xì)胞增殖較比陰性對(duì)照組和野生型組明顯加快。5.經(jīng)轉(zhuǎn)染PKM2 siRNA的MDA-MB-231和SK-BR-3乳腺癌細(xì)胞系中Stat3和pStat3的表達(dá)量較比陰性對(duì)照組顯著降低;經(jīng)拉帕替尼處理的MDA-MB-231和SK-BR-3乳腺癌細(xì)胞系中PKM2的表達(dá)量較比對(duì)照組有顯著的降低;而且經(jīng)拉帕替尼處理的乳腺癌細(xì)胞系Stat3和p Stat3的水平較比對(duì)照組也有顯著的降低。結(jié)論:1.乳腺癌中EGFR與PKM2,HER2與PKM2之間存在著正向的相關(guān)性。2.拉帕替尼抑制乳腺癌中PKM2表達(dá)。3.拉帕替尼通過影響PKM2表達(dá)抑制乳腺癌細(xì)胞增殖。4.拉帕替尼通過影響PKM2的表達(dá)導(dǎo)致了細(xì)胞增殖相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子Stat3和p Stat3水平的降低從而抑制了細(xì)胞增殖。
【關(guān)鍵詞】：乳腺癌 丙酮酸激酶 同工酶 拉帕替尼 細(xì)胞增殖
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.9
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-12
• 縮略語(yǔ)/符號(hào)說明12-14
• 前言14-19
• 研究現(xiàn)狀、成果14-17
• 研究目的、方法17-19
• 一、PKM2在乳腺癌中的表達(dá)及與EGFR和HER2表達(dá)的相關(guān)性19-38
• 1.1 對(duì)象和方法19-30
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)標(biāo)本19
• 1.1.2 細(xì)胞株19
• 1.1.3 主要試劑19-21
• 1.1.4 主要試劑配制21-22
• 1.1.5 主要儀器22-23
• 1.1.6 方法23-30
• 1.1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析30
• 1.2 結(jié)果30-36
• 1.2.1 乳腺癌組織PKM2的表達(dá)30-32
• 1.2.2 乳腺癌細(xì)胞系PKM2蛋白的表達(dá)32-34
• 1.2.3 乳腺癌組織PKM2表達(dá)及與EGFR和HER2表達(dá)的相關(guān)性34-35
• 1.2.4 EGFR基因沉默對(duì)乳腺癌細(xì)胞系PKM2表達(dá)的影響35
• 1.2.5 HER2基因沉默對(duì)乳腺癌細(xì)胞系PKM2表達(dá)的影響35-36
• 1.3 討論36-37
• 1.4 小結(jié)37-38
• 二、拉帕替尼對(duì)乳腺癌PKM2表達(dá)的影響38-53
• 2.1 對(duì)象和方法38-47
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象38
• 2.1.2 主要試劑38-40
• 2.1.3 細(xì)胞株40
• 2.1.4 主要試劑配制40-41
• 2.1.5 引物設(shè)計(jì)41
• 2.1.6 主要儀器設(shè)備41-42
• 2.1.7 方法42-47
• 2.1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析47
• 2.2 結(jié)果47-51
• 2.2.1 拉帕替尼和EGF工作濃度的確定47-48
• 2.2.2 拉帕替尼對(duì)乳腺癌細(xì)胞系PKM2表達(dá)的影響48-50
• 2.2.3 拉帕替尼對(duì)乳腺癌病人血清中PKM2水平的影響50-51
• 2.3 討論51-52
• 2.4 小結(jié)52-53
• 三、拉帕替尼通過影響PKM2表達(dá)對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖的作用53-64
• 3.1 對(duì)象和方法53-60
• 3.1.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象53
• 3.1.2 主要試劑53
• 3.1.3 細(xì)胞株53
• 3.1.4 培養(yǎng)基的制備53-54
• 3.1.5 PCR引物54
• 3.1.6 主要儀器設(shè)備54-55
• 3.1.7 方法55-59
• 3.1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析59-60
• 3.2 結(jié)果60-62
• 3.2.1 拉帕替尼對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖的影響60
• 3.2.2 穩(wěn)定過表達(dá)PKM2的MDA-MB-231和SK-BR-3 細(xì)胞的Western blot鑒定60
• 3.2.3 過表達(dá)PKM2的乳腺癌細(xì)胞系在拉帕替尼作用下增殖曲線的測(cè)定60-62
• 3.3 討論62-63
• 3.4 小結(jié)63-64
• 四、拉帕替尼影響PKM2表達(dá)對(duì)Stat3表達(dá)和磷酸化的作用64-73
• 4.1 對(duì)象和方法64-69
• 4.1.1 主要試劑64-65
• 4.1.2 細(xì)胞株65
• 4.1.3 主要試劑配制65-66
• 4.1.4 主要儀器設(shè)備66-67
• 4.1.5 方法67-69
• 4.2 結(jié)果69-71
• 4.2.1 MDA-MB-231和SK-BR-3 乳腺癌細(xì)胞系中下調(diào)PKM2蛋白表達(dá)后對(duì)與細(xì)胞增殖有關(guān)的信號(hào)通路因子Stat3的影響69
• 4.2.2 拉帕替尼通過影響PKM2的表達(dá)對(duì)與乳腺癌細(xì)胞增殖有關(guān)的信號(hào)通路因子Stat3的影響69-71
• 4.3 討論71-72
• 4.4 小結(jié)72-73
• 結(jié)論73-74
• 參考文獻(xiàn)74-78
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明78-79
• 綜述 M2型丙酮酸激酶在腫瘤細(xì)胞中的多面性79-87
• 綜述參考文獻(xiàn)83-87
• 致謝87-88
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷88

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 李巖峰;白秋江;趙軍;;小分子受體酪氨酸激酶抑制劑—拉帕替尼[J];河北醫(yī)藥;2008年03期

2 趙勝軍;朱珠;;新型雙向酪氨酸激酶抑制劑——拉帕替尼[J];中國(guó)藥學(xué)雜志;2008年13期

3 黃素培;王來海;張瑞嶺;;抗癲癇新藥哌拉帕納的藥理作用與臨床評(píng)價(jià)[J];中國(guó)新藥雜志;2013年15期

4 王蕾蕾;張朝蓬;王興武;魏玲;馬傳棟;;拉帕替尼耐藥乳腺癌細(xì)胞株的建立及耐藥機(jī)制的研究[J];腫瘤;2014年06期

5 馬培奇;;新型抗腫瘤藥二對(duì)甲苯磺酸拉帕替尼及其臨床特點(diǎn)和市場(chǎng)潛力[J];上海醫(yī)藥;2008年03期

6 邵衛(wèi)國(guó);合成免疫抑制劑——拉帕霉素成功[J];開卷有益(求醫(yī)問藥);1996年05期

7 乙蘇北;王巖;康娜;盧燕;張賀;李陽(yáng);白麗曉;趙熙;;拉帕替尼治療乳腺癌不良反應(yīng)的觀察與護(hù)理[J];軍事醫(yī)學(xué);2011年08期

8 劉斯婕;胡春;;拉帕替尼(lapatinb)[J];中國(guó)藥物化學(xué)雜志;2007年05期

9 徐家根;趙春才;陸超;陳麗;;HPLC法測(cè)定二甲苯磺酸拉帕替尼片中拉帕替尼的含量[J];中國(guó)藥房;2012年37期

10 潘君娥;謝淑萍;江子芳;;拉帕替尼治療HER2過度表達(dá)晚期胃癌并發(fā)癥的護(hù)理[J];湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào);2012年12期

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前9條

1 菊輝;寶格麗如何百年不虧[N];中國(guó)現(xiàn)代企業(yè)報(bào);2006年

2 王文婷;從未虧損過的“三不主義”[N];中國(guó)礦業(yè)報(bào);2006年

3 郎楷淳譯;波蘭商界女杰 溫達(dá)·拉帕辛斯基[N];廠長(zhǎng)經(jīng)理日?qǐng)?bào);2001年

4 本報(bào)專稿 石江月;“亞洲北約”虎視中國(guó)[N];世界報(bào);2006年

5 劉儒庭;馬拉帕特別墅[N];光明日?qǐng)?bào);2011年

6 記者 連小芳;王正偉會(huì)見春蓬·西拉帕差[N];寧夏日?qǐng)?bào);2012年

7 李興;乳腺癌新藥拉帕替尼在歐洲上市[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2008年

8 德米泰里·謝爾科夫（俄）;復(fù)活節(jié)島文明毀于巨人石像[N];北京科技報(bào);2006年

9 閆鶴;開飯店也怕大肚漢[N];中國(guó)食品質(zhì)量報(bào);2002年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前6條

1 周憲春;β-拉帕醌通過EMT抑制乳腺癌侵襲轉(zhuǎn)移的機(jī)制研究[D];延邊大學(xué);2016年

2 呂愛鋒;吡啶并[2,3-d]嘧啶類化合物及拉帕替尼衍生物的設(shè)計(jì)、合成及抗腫瘤活性研究[D];東南大學(xué);2015年

3 劉戀;胰島素受體/胰島素樣生長(zhǎng)因子受體激活誘導(dǎo)HER-2陽(yáng)性胃癌細(xì)胞對(duì)拉帕替尼的耐藥[D];復(fù)旦大學(xué);2013年

4 聶秀青;拉帕替尼誘導(dǎo)HER2陽(yáng)性乳腺癌細(xì)胞凋亡機(jī)制及其與ABT-737的協(xié)同抗腫瘤作用[D];復(fù)旦大學(xué);2010年

5 朱星枚;細(xì)胞自噬促進(jìn)拉帕替尼抗HER2陽(yáng)性乳腺癌的機(jī)制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2013年

6 侯雯e，

本文編號(hào)：687441