本文關(guān)鍵詞：貴州及周邊地區(qū)斑蝥體內(nèi)結(jié)合斑蝥素抗肝癌活性及對肝癌細(xì)胞生物學(xué)行為影響的研究

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【摘要】：目的:初步分析貴州及周邊不同地理種群斑蝥體內(nèi)結(jié)合斑蝥素的含量,篩選出抗肝癌活性顯著的地理種群,并進(jìn)行對肝癌細(xì)胞生物學(xué)行為影響的研究,為后續(xù)優(yōu)良地理種群斑蝥體內(nèi)結(jié)合斑蝥素的開發(fā)利用提供科研基礎(chǔ)。方法:1、水提法提取的斑蝥體內(nèi)結(jié)合斑蝥素,運(yùn)用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(GC-MS)分析結(jié)合斑蝥素含量;2、采用磺酰羅丹明染色法(SRB法)檢測結(jié)合斑蝥素對肝癌Hep G2細(xì)胞的體外抗腫瘤活性,篩選出抗肝癌活性較高3-4種優(yōu)良地理種群;3、應(yīng)用倒置相差顯微鏡觀察結(jié)合斑蝥素對人肝癌Hep G2細(xì)胞形態(tài)的影響;4、Annexin V-FITC/PI雙染法檢測結(jié)合斑蝥素對人肝癌Hep G2細(xì)胞凋亡的影響;5、采用PI標(biāo)記結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期的變化;6、透射電子顯微鏡觀察結(jié)合斑蝥素作用人肝癌Hep G2細(xì)胞后超微結(jié)構(gòu)的變化;7、Western blotting法檢測結(jié)合斑蝥素對Hep G2細(xì)胞中Bax、Bcl-2蛋白表達(dá)水平的影響。結(jié)果:1、貴州省羅甸縣城區(qū)南方大斑蝥結(jié)合斑蝥素(BCMP)與黃黑小斑蝥結(jié)合斑蝥素(BCML)含量高于其它地理種群同種斑蝥,分別為375 mg·L㧟1和290 mg·L㧟1,茂N<鎮(zhèn)境內(nèi)的BCMP和BCML含量其次,分別為262mg·L㧟1和199 mg·L㧟1;2、不同地理種群的斑蝥體內(nèi)結(jié)合斑蝥素對人肝癌Hep G2細(xì)胞的增殖均有抑制作用,其中茂N<鎮(zhèn)境內(nèi)的BCMP和BCML對肝癌Hep G2細(xì)胞的抑制活性明顯優(yōu)于其它地理種群同種斑蝥,其半數(shù)抑制濃度(IC50)分別為0.78 mg·L㧟1和0.65mg·L㧟1,羅甸縣城區(qū)境內(nèi)的BCMP和BCML對Hep G2細(xì)胞的抑制活性其次,其半數(shù)抑制濃度分別為0.88mg·L㧟1和0.86mg·L㧟1;3、倒置相差顯微鏡觀察結(jié)果,羅甸城區(qū)和茂N<鎮(zhèn)兩地理種群斑蝥結(jié)合斑蝥素均可造成癌細(xì)胞數(shù)目的逐漸減少,細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則,并出現(xiàn)固縮、體積變小現(xiàn)象;4、流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示,與對照組比較,茂N<鎮(zhèn)BCMP和BCML對Hep G2細(xì)胞的凋亡率從24h的9.77±1.33%和10.27±1.44%分別增加到48h的22.16±1.35%和22.33±1.11%(P0.05);羅甸城區(qū)BCMP和BCML對細(xì)胞的凋亡率從24h的7.60±1.05%和8.17±0.50%分別增加到48h的18.70±2.26和18.87±2.50(P0.05);5、細(xì)胞周期結(jié)果示,與對照組比較,茂N<鎮(zhèn)BCMP和BCML可使S期細(xì)胞比率下降,G2/M期細(xì)胞比率明顯增加,出現(xiàn)G2/M期阻滯;羅甸城區(qū)BCMP和BCML可使S期細(xì)胞比率下降,G0/G1期細(xì)胞比率明顯增加,G2/M期細(xì)胞比率亦有增加,主要出現(xiàn)G0/G1期阻滯。6、透射電鏡觀察示,羅甸城區(qū)和茂N<鎮(zhèn)兩地理種群斑蝥結(jié)合斑蝥素可致Hep G2細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和線粒體的腫脹,隨著作用時間的延長,超微結(jié)構(gòu)變化更明顯。7、Western blotting結(jié)果示,與對照組相比,茂N<鎮(zhèn)兩種斑蝥結(jié)合斑蝥素組均可造成Bax蛋白表達(dá)水平的升高,Bcl-2蛋白表達(dá)水平下降。結(jié)論:1、斑蝥體內(nèi)結(jié)合斑蝥素的含量存在地理和種群的差異;2、茂N<鎮(zhèn)BCMP和BCML對人肝癌細(xì)胞的抑制活性優(yōu)于其它地理種群,羅甸縣城區(qū)BCMP和BCML的抑制活性其次。3、斑蝥體內(nèi)結(jié)合斑蝥素可對肝癌Hep G2細(xì)胞的增殖和凋亡等生物學(xué)行為產(chǎn)生影響,主要表現(xiàn)為抑制其增殖和誘導(dǎo)其凋亡,其原因可能與癌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的改變和癌細(xì)胞周期阻滯以及Bax蛋白表達(dá)的上調(diào),Bcl-2蛋白表達(dá)的下調(diào)和Bcl-2/Bax比值失衡有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：斑蝥 地理種群 結(jié)合斑蝥素 肝癌HepG2細(xì)胞 生物學(xué)行為
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 中英縮略詞對照表4-5
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 前言10-12
• 材料與方法12-21
• 結(jié)果21-48
• 討論48-51
• 結(jié)論51-52
• 參考文獻(xiàn)52-56
• 綜述:斑蝥素及其衍生物的抗腫瘤機(jī)制研究進(jìn)展56-65
• 參考文獻(xiàn)62-65
• 致謝65-66
• 作者簡介66

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李曉飛;曹嵩;婁方明;晏容;侯曉暉;張恒;劉云;;芫菁體內(nèi)結(jié)合斑蝥素對胃癌SGC-7901細(xì)胞增殖的抑制作用[J];天然產(chǎn)物研究與開發(fā);2013年07期

2 李曉飛;婁方明;晏容;侯曉暉;張恒;劉云;;三種斑蝥素鹽類物質(zhì)對肝癌QGY-7703細(xì)胞生長的抑制作用[J];中國老年學(xué)雜志;2013年09期

3 李曉飛;;芫菁體內(nèi)結(jié)合斑蝥素與金屬元素含量的比較[J];湖北農(nóng)業(yè)科學(xué);2011年13期

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7 王衛(wèi)東;陳正堂;;Bcl-2/Bax比率與細(xì)胞“命運(yùn)”[J];中國腫瘤生物治療雜志;2007年04期

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9 李曉飛;陳祥盛;王雪梅;侯曉暉;;芫菁體內(nèi)斑蝥素的含量及存在形式[J];昆蟲學(xué)報(bào);2007年07期

10 范躍祖;陳春球;趙澤明;孫偉;;去甲斑蝥素對膽囊癌腫瘤血管生成的作用及機(jī)制研究[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2006年10期

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本文編號：684583