本文關鍵詞：糖皮質激素受體對膀胱癌干細胞的作用機制研究

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【摘要】：研究背景糖皮質激素(glucocorticoid, GC)是由腎上腺皮質中束狀帶分泌的一類甾體激素,主要為皮質醇(cortisol),具有調節(jié)糖、脂肪、和蛋白質的生物合成和代謝的作用,還具有抑制免疫應答、抗炎、抗毒、抗休克作用。除此之外,糖皮質激素對細胞的一系列生物學過程,如增殖、分化、凋亡等,都有重要的調節(jié)作用,這是糖皮質激素應用于惡性腫瘤臨床治療的分子基礎。目前有研究表明,糖皮質激素主要通過影響某些細胞通路中的細胞因子或相關蛋白,在膀胱癌腫瘤細胞中導致不同程度的雙向調節(jié)作用,即一方面誘導細胞生長G1期停滯,另一方面抑制細胞凋亡,但此雙向調節(jié)作用具體與哪些細胞通路、細胞因子、關鍵蛋白相關,我們仍不得而知。研究目標從標志性蛋白表達方面探討糖皮質激素受體雙向調節(jié)膀胱癌腫瘤細胞的相關原因,為膀胱癌的靶向治療提供新的可能。第一部分GR和CD133/CD44與膀胱癌的臨床病理聯(lián)系1.1研究內容通過對臨床標本與已有膀胱癌細胞株的檢測,了解膀胱癌中GR的表達、及其與腫瘤分級、分期、轉移、預后的相關性,同時檢測干細胞相關蛋白CD133/CD44表達,及其與腫瘤的上述相關性。并對兩種相關性進行對比,探討其中有無關聯(lián)。1.2實驗方法(1)人膀胱癌組織中GR表達及臨床病理關系組織檢測：在組織芯片中對膀胱癌癌組織、癌旁組織、轉移淋巴結行免疫組織化學染色,分析上述組織中GR表達的陽性率、陽性強度的差異,探討GR變化與膀胱癌TNM分期、分級、術后復發(fā)、淋巴結轉移、及預后的關系。(2)人膀胱癌組織中CD133/CD44表達及臨床病理關系組織檢測：在組織芯片中對膀胱癌癌組織、癌旁組織、轉移淋巴結行免疫組織化學染色,分析上述組織中CD133/CD44表達的陽性率、陽性強度的差異,探討此兩種干細胞相關蛋白標志物的變化與膀胱癌TNM分期、分級、術后復發(fā)、淋巴結轉移、及預后的關系。(3)人膀胱癌組織中GR表達與CD133/CD44的關系統(tǒng)計學檢驗：將兩次組織檢測的結果進行對照分析,初步探討GR表達與干細胞相關蛋白表達有無可能關聯(lián)。1.3實驗結果免疫組織化學檢測提示,在膀胱組織芯片中,所有的正常膀胱尿路上皮、尿路上皮癌、淋巴結轉移癌均100%表達GR、CD133/CD44。1.4小結(1)GR在膀胱癌與正常膀胱尿路上皮中均有100%陽性表達；GR高表達可能提示膀胱癌預后良好。(2) CD133/CD44在膀胱癌與正常膀胱尿路上皮中均有100%陽性表達。第二部分GC/GR通路與膀胱癌于細胞相關蛋白標志物的關系2.1研究內容利用shRNA (short hairpin RNA)基因封閉技術研究GR低表達膀胱癌細胞株與其父系GR高表達膀胱癌細胞株之間在體外培養(yǎng)條件下及其在GC與GR拮抗劑作用后,腫瘤干細胞標志蛋白CD133/CD44的表達差異,探討GR與干細胞標志蛋白的關系。2.2實驗方法(1) GC/GR通路對CD133/CD44表達的影響MACS法純化收集CD133+/CD44+膀胱癌細胞,流式細胞術檢測原始膀胱癌細胞株與GR knock-down細胞株中腫瘤干細胞標志物CD133/CD44表達的差異。(2)GR對Wnt/β-Catenin信號通路的調控功能GR對Wnt/β-Catenin信號通路關鍵分子表達的影響：westem-blot檢測原始膀胱癌細胞株與GR knock-down細胞株中地塞米松(Dexamethasone, DXM)和GR拮抗劑RU486對Wnt/β-Catenin主要成員CD44和其主要下游蛋白AP-1表達的影響。2.3實驗結果(1) GC/GR通路影響CD133/CD44表達流式細胞術發(fā)現(xiàn)TCC5-SUP細胞株中,原始細胞株與GR knock-down細胞株腫瘤干細胞標志物CD133/CD44表達有明顯差異,GR活性與干細胞標志物表達成正相關,但UMUC3細胞株中未能收集到CD133+/CD44+陽性細胞群。(2) GC/GR通路正向調控Wnt/β-Catenin信號通路western-blot發(fā)現(xiàn)TCC5-SUP細胞株中,原始膀胱癌細胞株與GR knock-down細胞株中地塞米松(Dexamethasone, DXM)和GR拮抗劑RU486對Wnt/β-Catenin主要成員CD44和其主要下游蛋白AP-1表達的影響無明顯差異,但UMUC3細胞株中,原始膀胱癌細胞株與GR knock-down細胞株中地塞米松(Dexamethasone, DXM)和GR拮抗劑RU486對Wnt/β-Catenin主要成員CD44和其主要下游蛋白AP-1表達的影響具有顯著差異。2.4小結(1)GC/GR通路激活在體外正向調控腫瘤干細胞標志蛋白CD133/CD44表達；(2) western-blot實驗提示DXM可激活Wnt/β-Catenin通路,導致關鍵蛋白CD44/AP-1表達提高；(3)不同膀胱癌細胞株中GC/GR通路的激活對CD133/CD44/AP-1的表達作用不同,其原因有待于進一步討論。上述研究結果表明膀胱癌中GC/GR通路激活可正向調控腫瘤干細胞標志蛋白CD133/CD44的表達,其中CD44表達的提高引發(fā)其位于Wnt/β-Catenin通路的下游蛋白AP-1表達提高,進而導致Wnt/β-Catenin通路活性提高。
【關鍵詞】：膀胱癌 糖皮質激素受體 腫瘤干細胞 分子機制
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.14
【目錄】：

• 致謝4-5
• 研究背景5-8
• 中文摘要8-12
• 英文摘要12-15
• 第一部分 GR和CD133/CD44與膀胱癌的臨床病理聯(lián)系15-21
• 1.1 前言15
• 1.2 材料和方法15-17
• 1.3 實驗結果17-19
• 1.4 討論19-20
• 1.5 結論20-21
• 第二部分 GC/GR通路與膀胱癌干細胞相關蛋白標志物的關系21-32
• 2.1 前言21
• 2.2 材料和方法21-23
• 2.3 實驗結果23-30
• 2.4 討論30-31
• 2.5 結論31-32
• 參考文獻32-38
• 綜述38-60
• 參考文獻49-60
• 作者簡歷及在學期間所取得的科研成果60

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