發(fā)布時間：2017-08-16 17:10

  本文關(guān)鍵詞：糖皮質(zhì)激素受體對膀胱癌干細(xì)胞的作用機制研究

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【摘要】：研究背景糖皮質(zhì)激素(glucocorticoid, GC)是由腎上腺皮質(zhì)中束狀帶分泌的一類甾體激素,主要為皮質(zhì)醇(cortisol),具有調(diào)節(jié)糖、脂肪、和蛋白質(zhì)的生物合成和代謝的作用,還具有抑制免疫應(yīng)答、抗炎、抗毒、抗休克作用。除此之外,糖皮質(zhì)激素對細(xì)胞的一系列生物學(xué)過程,如增殖、分化、凋亡等,都有重要的調(diào)節(jié)作用,這是糖皮質(zhì)激素應(yīng)用于惡性腫瘤臨床治療的分子基礎(chǔ)。目前有研究表明,糖皮質(zhì)激素主要通過影響某些細(xì)胞通路中的細(xì)胞因子或相關(guān)蛋白,在膀胱癌腫瘤細(xì)胞中導(dǎo)致不同程度的雙向調(diào)節(jié)作用,即一方面誘導(dǎo)細(xì)胞生長G1期停滯,另一方面抑制細(xì)胞凋亡,但此雙向調(diào)節(jié)作用具體與哪些細(xì)胞通路、細(xì)胞因子、關(guān)鍵蛋白相關(guān),我們?nèi)圆坏枚�。研究目�?biāo)從標(biāo)志性蛋白表達(dá)方面探討糖皮質(zhì)激素受體雙向調(diào)節(jié)膀胱癌腫瘤細(xì)胞的相關(guān)原因,為膀胱癌的靶向治療提供新的可能。第一部分GR和CD133/CD44與膀胱癌的臨床病理聯(lián)系1.1研究內(nèi)容通過對臨床標(biāo)本與已有膀胱癌細(xì)胞株的檢測,了解膀胱癌中GR的表達(dá)、及其與腫瘤分級、分期、轉(zhuǎn)移、預(yù)后的相關(guān)性,同時檢測干細(xì)胞相關(guān)蛋白CD133/CD44表達(dá),及其與腫瘤的上述相關(guān)性。并對兩種相關(guān)性進(jìn)行對比,探討其中有無關(guān)聯(lián)。1.2實驗方法(1)人膀胱癌組織中GR表達(dá)及臨床病理關(guān)系組織檢測：在組織芯片中對膀胱癌癌組織、癌旁組織、轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)行免疫組織化學(xué)染色,分析上述組織中GR表達(dá)的陽性率、陽性強度的差異,探討GR變化與膀胱癌TNM分期、分級、術(shù)后復(fù)發(fā)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、及預(yù)后的關(guān)系。(2)人膀胱癌組織中CD133/CD44表達(dá)及臨床病理關(guān)系組織檢測：在組織芯片中對膀胱癌癌組織、癌旁組織、轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)行免疫組織化學(xué)染色,分析上述組織中CD133/CD44表達(dá)的陽性率、陽性強度的差異,探討此兩種干細(xì)胞相關(guān)蛋白標(biāo)志物的變化與膀胱癌TNM分期、分級、術(shù)后復(fù)發(fā)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、及預(yù)后的關(guān)系。(3)人膀胱癌組織中GR表達(dá)與CD133/CD44的關(guān)系統(tǒng)計學(xué)檢驗：將兩次組織檢測的結(jié)果進(jìn)行對照分析,初步探討GR表達(dá)與干細(xì)胞相關(guān)蛋白表達(dá)有無可能關(guān)聯(lián)。1.3實驗結(jié)果免疫組織化學(xué)檢測提示,在膀胱組織芯片中,所有的正常膀胱尿路上皮、尿路上皮癌、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌均100%表達(dá)GR、CD133/CD44。1.4小結(jié)(1)GR在膀胱癌與正常膀胱尿路上皮中均有100%陽性表達(dá)；GR高表達(dá)可能提示膀胱癌預(yù)后良好。(2) CD133/CD44在膀胱癌與正常膀胱尿路上皮中均有100%陽性表達(dá)。第二部分GC/GR通路與膀胱癌于細(xì)胞相關(guān)蛋白標(biāo)志物的關(guān)系2.1研究內(nèi)容利用shRNA (short hairpin RNA)基因封閉技術(shù)研究GR低表達(dá)膀胱癌細(xì)胞株與其父系GR高表達(dá)膀胱癌細(xì)胞株之間在體外培養(yǎng)條件下及其在GC與GR拮抗劑作用后,腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志蛋白CD133/CD44的表達(dá)差異,探討GR與干細(xì)胞標(biāo)志蛋白的關(guān)系。2.2實驗方法(1) GC/GR通路對CD133/CD44表達(dá)的影響MACS法純化收集CD133+/CD44+膀胱癌細(xì)胞,流式細(xì)胞術(shù)檢測原始膀胱癌細(xì)胞株與GR knock-down細(xì)胞株中腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物CD133/CD44表達(dá)的差異。(2)GR對Wnt/β-Catenin信號通路的調(diào)控功能GR對Wnt/β-Catenin信號通路關(guān)鍵分子表達(dá)的影響：westem-blot檢測原始膀胱癌細(xì)胞株與GR knock-down細(xì)胞株中地塞米松(Dexamethasone, DXM)和GR拮抗劑RU486對Wnt/β-Catenin主要成員CD44和其主要下游蛋白AP-1表達(dá)的影響。2.3實驗結(jié)果(1) GC/GR通路影響CD133/CD44表達(dá)流式細(xì)胞術(shù)發(fā)現(xiàn)TCC5-SUP細(xì)胞株中,原始細(xì)胞株與GR knock-down細(xì)胞株腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物CD133/CD44表達(dá)有明顯差異,GR活性與干細(xì)胞標(biāo)志物表達(dá)成正相關(guān),但UMUC3細(xì)胞株中未能收集到CD133+/CD44+陽性細(xì)胞群。(2) GC/GR通路正向調(diào)控Wnt/β-Catenin信號通路western-blot發(fā)現(xiàn)TCC5-SUP細(xì)胞株中,原始膀胱癌細(xì)胞株與GR knock-down細(xì)胞株中地塞米松(Dexamethasone, DXM)和GR拮抗劑RU486對Wnt/β-Catenin主要成員CD44和其主要下游蛋白AP-1表達(dá)的影響無明顯差異,但UMUC3細(xì)胞株中,原始膀胱癌細(xì)胞株與GR knock-down細(xì)胞株中地塞米松(Dexamethasone, DXM)和GR拮抗劑RU486對Wnt/β-Catenin主要成員CD44和其主要下游蛋白AP-1表達(dá)的影響具有顯著差異。2.4小結(jié)(1)GC/GR通路激活在體外正向調(diào)控腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志蛋白CD133/CD44表達(dá)；(2) western-blot實驗提示DXM可激活Wnt/β-Catenin通路,導(dǎo)致關(guān)鍵蛋白CD44/AP-1表達(dá)提高；(3)不同膀胱癌細(xì)胞株中GC/GR通路的激活對CD133/CD44/AP-1的表達(dá)作用不同,其原因有待于進(jìn)一步討論。上述研究結(jié)果表明膀胱癌中GC/GR通路激活可正向調(diào)控腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志蛋白CD133/CD44的表達(dá),其中CD44表達(dá)的提高引發(fā)其位于Wnt/β-Catenin通路的下游蛋白AP-1表達(dá)提高,進(jìn)而導(dǎo)致Wnt/β-Catenin通路活性提高。
【關(guān)鍵詞】：膀胱癌 糖皮質(zhì)激素受體 腫瘤干細(xì)胞 分子機制
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.14
【目錄】：

• 致謝4-5
• 研究背景5-8
• 中文摘要8-12
• 英文摘要12-15
• 第一部分 GR和CD133/CD44與膀胱癌的臨床病理聯(lián)系15-21
• 1.1 前言15
• 1.2 材料和方法15-17
• 1.3 實驗結(jié)果17-19
• 1.4 討論19-20
• 1.5 結(jié)論20-21
• 第二部分 GC/GR通路與膀胱癌干細(xì)胞相關(guān)蛋白標(biāo)志物的關(guān)系21-32
• 2.1 前言21
• 2.2 材料和方法21-23
• 2.3 實驗結(jié)果23-30
• 2.4 討論30-31
• 2.5 結(jié)論31-32
• 參考文獻(xiàn)32-38
• 綜述38-60
• 參考文獻(xiàn)49-60
• 作者簡歷及在學(xué)期間所取得的科研成果60

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本文編號：684476