發(fā)布時間：2017-08-16 16:15

  本文關(guān)鍵詞：OSTP-DDP靶向抑制卵巢癌A2780細(xì)胞生長的研究

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【摘要】：目的:在前期實驗研究中,本課題組的研究人員利用體內(nèi)噬菌體展示技術(shù)首次篩選得到了卵巢癌特異性結(jié)合肽(ovarian cancer specific targeting peptide,OSTP),并對其性質(zhì)進(jìn)行了驗證。本實驗進(jìn)一步將OSTP與順鉑(cis-Dichlorodiamineplatinum,DDP)進(jìn)行耦聯(lián),研究該耦聯(lián)物(OSTP-DDP)對卵巢癌A2780細(xì)胞的靶向抑制作用。為探索和研究新的腫瘤分子靶向藥物奠定基礎(chǔ)。方法:OSTP-DDP化學(xué)合成;體外培養(yǎng)卵巢癌A2780細(xì)胞;CCK-8法(Cell Counting Kit-8)檢測OSTP-DDP對卵巢癌A2780細(xì)胞的生長抑制作用,并計算其IC50值;平板克隆形成實驗檢測OSTP-DDP對卵巢癌A2780細(xì)胞的生長抑制作用;流式細(xì)胞術(shù)檢測OSTP-DDP對卵巢癌A2780細(xì)胞的周期和凋亡的影響;高效液相色譜分析(HPLC)檢測OSTP-DDP進(jìn)入卵巢癌A2780細(xì)胞的量;建立卵巢癌A2780細(xì)胞的裸鼠移植瘤模型,隨機(jī)分成4組(空白組、DMSO組、DDP組和OSTP-DDP組),驗證OSTP-DDP的體內(nèi)靶向抑瘤作用;檢測裸鼠血常規(guī)和生化常規(guī),觀察OSTP-DDP的全身毒副作用。結(jié)果:1、從質(zhì)譜分析(MS)和高效液相色譜(HPLC)分析中得出,OSTP-DDP合成成功。2、體外CCK-8法表明分別用不同濃度的OSTP-DDP與DDP(10、20、40、80、160、320μmol?L-1)處理A2780細(xì)胞24h、48h、72h后均可抑制A2780細(xì)胞的生長,并且該抑制作用隨著時間和濃度逐漸增強(qiáng)。OSTP-DDP的作用強(qiáng)于DDP(P0.05),提示OSTP-DDP具有對卵巢癌a2780細(xì)胞生長的靶向抑制作用。3、通過平板克隆形成實驗結(jié)果顯示ostp-ddp和ddp均可抑制腫瘤生長,但兩者的差異無明顯的統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。4、通過流式細(xì)胞術(shù)檢測表明:經(jīng)ostp-ddp和ddp作用后,a2780細(xì)胞的生長周期均被阻滯于g1期,作用72h后,ostp-ddp組細(xì)胞周期被阻滯在g1期為77.41±1.36,ddp組細(xì)胞周期被阻滯在g1期為71.11±0.86,說明ostp-ddp對卵巢癌a2780細(xì)胞的周期阻滯作用強(qiáng)于ddp,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。作用24h、48h、72h后,ostp-ddp組的凋亡率分別為:7.51%、44.46%、52.73%,ddp組的凋亡率分別為:4.44%、13.66%、15.67%。ostp-ddp對卵巢癌a2780細(xì)胞凋亡的作用強(qiáng)于ddp組(p0.01),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義,提示ostp-ddp具有較強(qiáng)的誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的靶向作用。5、通過高效液相色譜分析,結(jié)果顯示:ostp-ddp液體樣品中殘留的ddp含量分別為12.7696%(20μmol?l-1)、0.8162%(40μmol?l-1)、0.5406%(80μmol?l-1)、0.0800%(160μmol?l-1)、0.0700%(320μmol?l-1)。ddp液體樣品中殘留的ddp含量分別為17.1123%(20μmol?l-1)、1.2643%(40μmol?l-1)1.1500%(80μmol?l-1)、1.1191%(160μmol?l-1)、0.1091%(320μmol?l-1)。顯示ostp-ddp組中ddp進(jìn)入細(xì)胞的量要多于ddp組進(jìn)入細(xì)胞的量。6、卵巢癌裸鼠移植瘤模型構(gòu)建成功,體內(nèi)實驗表明3mg·kg-1ostp-ddp與ddp均對卵巢癌a2780細(xì)胞移植瘤具有一定的抑制作用,且ostp-ddp的抑制作用明顯強(qiáng)于ddp的作用(p0.05),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。裸鼠血常規(guī)和生化常規(guī)顯示OSTP-DDP能減少DDP所帶來的骨髓抑制、腎毒性和肝臟毒性等全身毒副作用,且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:通過體內(nèi)外實驗證實OSTP-DDP對卵巢癌A2780細(xì)胞具有靶向抑制作用,且其能夠減少DDP所帶來的全身毒副作用。
【關(guān)鍵詞】：卵巢癌A2780細(xì)胞 OSTP-DDP 靶向治療 DDP 細(xì)胞生長抑制
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.31
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-12
• 主要中英文縮略詞表12-13
• 第1章 緒論13-17
• 第2章 技術(shù)路線17-19
• 第3章 材料和方法19-29
• 3.1 實驗材料和主要試劑19-21
• 3.2 實驗方法21-29
• 第4章 實驗結(jié)果29-39
• 4.1 耦聯(lián)物的分析結(jié)果提示已成功合成OSTP-DDP29-30
• 4.2 OSTP-DDP對卵巢癌A2780細(xì)胞生長的抑制作用30
• 4.3 平板克隆形成實驗結(jié)果30-31
• 4.4 應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)分別檢測卵巢癌A2780細(xì)胞的周期和凋亡31-34
• 4.5 通過高效液相色譜分析直觀檢測進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)DDP的含量34
• 4.6 OSTP-DDP對體內(nèi)卵巢癌A2780細(xì)胞具有靶向抑制作用34-39
• 第5章 討論39-49
• 第6章 結(jié)論49-51
• 參考文獻(xiàn)51-59
• 文獻(xiàn)綜述 卵巢癌的免疫靶向治療59-68
• 參考文獻(xiàn)65-68
• 本研究課題資助項目68-69
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文69-70
• 致謝70

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

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2 Wanqing Chen;Rongshou Zheng;Siwei Zhang;Ping Zhao;Guanglin Li;Lingyou Wu;Jie He;;Report of incidence and mortality in China cancer registries, 2009[J];Chinese Journal of Cancer Research;2013年01期

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本文編號：684242