本文關(guān)鍵詞：胞內(nèi)ROS水平的波動(dòng)影響癌細(xì)胞增殖并通過DLC1和CAV-1調(diào)控遷移的機(jī)理分析

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【摘要】：細(xì)胞癌變的發(fā)生以及癌癥的發(fā)展是一個(gè)非常復(fù)雜的生命過程,胞內(nèi)生命活動(dòng)是由細(xì)胞內(nèi)部復(fù)雜而龐大的信號(hào)通路網(wǎng)絡(luò)來調(diào)控的。這些信號(hào)通路中很多潛在的分子機(jī)制尚未明確,還需要進(jìn)一步的研究使其日益完善。近年的研究顯示,活性氧(ROS)與細(xì)胞的癌變以及后續(xù)的癌癥發(fā)展密切相關(guān)。ROS在體內(nèi)發(fā)揮雙重作用,有時(shí)發(fā)揮有益的作用,有時(shí)又會(huì)發(fā)揮有害的作用。ROS雖然可以維持癌細(xì)胞的表型,但是ROS也可以誘導(dǎo)細(xì)胞衰老以及細(xì)胞凋亡。其作為抗癌因子發(fā)揮作用與胞內(nèi)氧化應(yīng)激的誘發(fā)密切相關(guān)。無論對于體內(nèi)細(xì)胞還是體外培養(yǎng)的細(xì)胞,維持細(xì)胞內(nèi)部生理水平ROS的穩(wěn)定都是正常代謝所必須的。ROS濃度過高會(huì)誘發(fā)DNA損傷,含量過低也會(huì)誘發(fā)代謝異常。這兩種狀況都會(huì)影響相關(guān)蛋白的表達(dá)并作用于與這些蛋白相關(guān)的信號(hào)通路,影響細(xì)胞生命活動(dòng)。此外,ROS還可以作為第二信使參與信號(hào)通路對細(xì)胞代謝的調(diào)控。細(xì)胞內(nèi)部的活性氧的平衡主要受抗氧化酶的調(diào)控,其中包括SOD、CAT和GSH。本實(shí)驗(yàn)中我們使用外源性的過氧化氫(H_2O_2)和過氧化氫酶(CAT)誘導(dǎo)胞內(nèi)ROS的改變。p53是一種在多種人類癌變細(xì)胞中發(fā)生突變或者缺失的抑癌基因,該基因?qū)?xì)胞增殖和細(xì)胞凋亡有重要的調(diào)控作用。p53通過激活CDK激酶抑制劑CKI抑制細(xì)胞周期轉(zhuǎn)換,進(jìn)而誘導(dǎo)周期阻滯或者凋亡。ROS上調(diào)會(huì)促進(jìn)p53的表達(dá),但是ROS波動(dòng)對細(xì)胞增殖和遷移的影響尚未明確。本實(shí)驗(yàn)探究了ROS波動(dòng)對細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期分布的影響及其相關(guān)的信號(hào)分子通路。腫瘤抑制基因DLC1(Deleted in liver cancer 1)是一種在癌細(xì)胞中發(fā)揮重要作用的RhoGAP,它通過調(diào)節(jié)RhoA蛋白的活性發(fā)揮抑制細(xì)胞遷移的作用。CAV-1(Caveolin-1)是小窩蛋白家族的成員,是細(xì)胞小窩的主要結(jié)構(gòu)蛋白。近年的研究顯示CAV-1在多種癌細(xì)胞中均與細(xì)胞遷移和侵襲密切相關(guān),但是其對細(xì)胞遷移的影響尚存較大的爭議。有報(bào)道顯示,DLC1和CAV-1發(fā)揮作用時(shí)均與ROS相關(guān),而且DLC1和CAV-1之間存在相互作用,這種相互作用與細(xì)胞遷移相關(guān),但是其具體作用機(jī)制尚未明確。因此本實(shí)驗(yàn)探究了ROS對DLC1和CAV-1表達(dá)以及對兩種蛋白相互作用的影響,并進(jìn)一步探究了這種相互作用與乳腺癌細(xì)胞遷移之間的作用機(jī)制。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:1.外源性CAT和H_2O_2處理24h,誘導(dǎo)人類乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231和MCF-7胞內(nèi)ROS水平的改變。2.H_2O_2誘導(dǎo)的胞內(nèi)ROS上調(diào)以劑量依賴的方式抑制乳腺癌細(xì)胞的增殖,并誘導(dǎo)凋亡。CAT誘導(dǎo)的胞內(nèi)ROS下調(diào)并未顯著影響癌細(xì)胞的增殖和凋亡。3.胞內(nèi)ROS上調(diào)促進(jìn)了p53的表達(dá)并誘發(fā)細(xì)胞周期G1期阻滯。胞內(nèi)ROS下調(diào)并未顯著改變p53的表達(dá)和細(xì)胞周期分布。4.ROS波動(dòng)通過影響DLC1和CAV-1的表達(dá)和抑制二者的相互作用顯著抑制乳腺癌細(xì)胞的遷移。結(jié)果表明,ROS上調(diào)抑制了p53的表達(dá),并誘導(dǎo)細(xì)胞周期停滯于G1期,進(jìn)而抑制乳腺癌細(xì)胞增殖,而ROS下調(diào)沒有顯著影響癌細(xì)胞的增殖。ROS的上調(diào)和下調(diào)通過影響DLC1和CAV-1的表達(dá)和抑制二者的相互作用抑制了乳腺癌細(xì)胞的遷移。
【關(guān)鍵詞】：ROS DLC1 CAV-1 增殖 遷移
【學(xué)位授予單位】：山東師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.9
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• ABSTRACT7-10
• 第一章 文獻(xiàn)綜述10-20
• 1. 乳腺癌現(xiàn)狀10
• 2. 活性氧和氧化應(yīng)激10-14
• 3. GAP家族成員DLC1在癌細(xì)胞增殖和遷移中的作用14-17
• 4. 小窩蛋白CAV1在腫瘤細(xì)胞中的作用17-19
• 5．論文選題的依據(jù)及意義19-20
• 第二章 外源CAT和H_2O_2可以誘發(fā)胞內(nèi)ROS的波動(dòng)20-29
• 1．材料與試劑20-22
• 2．實(shí)驗(yàn)儀器22-23
• 3．實(shí)驗(yàn)方法與步驟23-25
• 4．實(shí)驗(yàn)結(jié)果25-27
• 5．分析與討論27-29
• 第三章 胞內(nèi)ROS水平波動(dòng)對乳腺癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響29-40
• 1．材料與試劑29-31
• 2．實(shí)驗(yàn)儀器31
• 3．實(shí)驗(yàn)方法與步驟31-33
• 4．實(shí)驗(yàn)結(jié)果33-37
• 5．分析與討論37-40
• 第四章 胞內(nèi)ROS水平波動(dòng)對P53表達(dá)及細(xì)胞周期分布的影響40-51
• 1．材料與試劑40-44
• 2．實(shí)驗(yàn)儀器44
• 3．實(shí)驗(yàn)方法與步驟44-47
• 4．實(shí)驗(yàn)結(jié)果47-49
• 5．分析與討論49-51
• 第五章 胞內(nèi)ROS的波動(dòng)抑制乳腺癌細(xì)胞遷移51-56
• 1．材料與試劑51-52
• 2．實(shí)驗(yàn)儀器52
• 3．實(shí)驗(yàn)方法與步驟52-53
• 4．實(shí)驗(yàn)結(jié)果53-54
• 5．分析與討論54-56
• 第六章 胞內(nèi)ROS波動(dòng)抑制DLC1和CAV-1 的相互作用56-62
• 1．材料與試劑56-57
• 2．實(shí)驗(yàn)儀器57
• 3．實(shí)驗(yàn)方法與步驟57-58
• 4．實(shí)驗(yàn)結(jié)果58-60
• 5．分析與討論60-62
• 結(jié)論62-63
• 參考文獻(xiàn)63-71
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文71-72
• 致謝72

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：676301