本文關(guān)鍵詞：肝素酶參與肝癌微血管捕獲機(jī)制探究

  更多相關(guān)文章： 肝細(xì)胞癌 硫酸乙酰肝素蛋白多糖 粘附 Syndecan-1 Syndecan-3

【摘要】：目的:探究肝素酶(heparanase,HPSE)參與肝癌細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附的相關(guān)機(jī)制,以確定參與粘附過(guò)程的關(guān)鍵硫酸乙酰肝素蛋白多糖(heparin sulfate proglycan HSPG),并獲得其細(xì)胞定位。方法:1)選取si HPSE-3158基因干擾序列構(gòu)建質(zhì)粒,以脂質(zhì)體法瞬時(shí)轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞(Hep G-2),抑制HPSE的表達(dá),同時(shí)設(shè)置陰性對(duì)照組和空白組。在六孔板中將各組細(xì)胞與人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC-C)行粘附實(shí)驗(yàn),通過(guò)Western-Blot法檢測(cè)各組中Syndecan-1、Syndecan-3表達(dá)量的變化。2)選取上述表達(dá)量變化較為明顯的HSPG亞型,通過(guò)免疫細(xì)胞化學(xué)觀察其細(xì)胞定位。結(jié)果:1)Western-Blot結(jié)果:Hep G-2細(xì)胞和HUVEC-C粘附后,干擾組、陰性對(duì)照組和空白組中Syndecan-1的表達(dá)水平用相對(duì)灰度值表示分別為1.885?0.113、1.870?0.087、1.837?0.116,可見(jiàn)干擾組、陰性對(duì)照組和空白組中Syndecan-1的表達(dá)量無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。三組中Syndecan-3的表達(dá)水平用相對(duì)灰度值表示為1.452?0.093、1.079?0.134、1.019?0.105,可見(jiàn)干擾組中Syndecan-3的表達(dá)量明顯高于陰性對(duì)照組和空白組(P0.05),陰性對(duì)照組和空白組中Syndecan-3的表達(dá)量無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);2)免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果:血管內(nèi)皮細(xì)胞中Syndecan-3在胞漿和胞膜均有表達(dá)。結(jié)論:肝素酶對(duì)肝癌細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附過(guò)程中硫酸肝素蛋白多糖表達(dá)有一定的影響,Syndecan-3可能參與肝素酶介導(dǎo)的肝癌細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附過(guò)程,并驗(yàn)證了其在血管內(nèi)皮細(xì)胞的胞漿和胞膜中均有表達(dá)。
【關(guān)鍵詞】：肝細(xì)胞癌 硫酸乙酰肝素蛋白多糖 粘附 Syndecan-1 Syndecan-3
【學(xué)位授予單位】：皖南醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R735.7
【目錄】：

• 中英文縮略詞對(duì)照表5-7
• 摘要7-8
• Abstract8-10
• 前言10-13
• 材料13-20
• 研究?jī)?nèi)容與方法20-32
• 0 研究?jī)?nèi)容20
• 1 實(shí)驗(yàn)方法20-30
• 1.1 細(xì)胞的復(fù)蘇、換液、傳代及凍存20-21
• 1.2 搖菌及質(zhì)粒的提取21-23
• 1.3 脂質(zhì)體法瞬時(shí)轉(zhuǎn)染HepG-2細(xì)胞23-25
• 1.4 HepG-2細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的粘附25-26
• 1.5 Western-Blot檢查HSPG含量變化26-30
• 2 免疫化學(xué)方法觀察HSPG細(xì)胞定位30-31
• 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法31-32
• 結(jié)果32-36
• 討論36-42
• 結(jié)論42-43
• 參考文獻(xiàn)43-49
• 綜述 肝素酶在惡性腫瘤侵襲中的研究49-63
• 參考文獻(xiàn)57-63
• 作者簡(jiǎn)介及讀研期間主要科研成果63-64
• 致謝64

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