本文關(guān)鍵詞：氯化兩面針堿對乳腺癌抑制作用及與阿霉素協(xié)同作用的研究

  更多相關(guān)文章： 氯化兩面針堿 細胞凋亡 細胞周期阻滯 阿霉素聯(lián)合 乳腺癌

【摘要】：目的乳腺癌是全世界范圍內(nèi)常見的惡性腫瘤之一,在我國它也是臨床中的常見病、多發(fā)病。圍繞其治療,臨床上提出了多種研究方向,其中藥用植物提取物的應(yīng)用為重要的研究策略之一,且其成果目前已廣泛應(yīng)用于臨床。兩面針堿來源廣泛,可自蕓香科花椒屬植物兩面針的干燥根中提取。氯化兩面針堿(Nitidine chloride)是兩面針堿經(jīng)氯化作用形成的一種特殊類型的生物堿,有實驗研究表明其具有抗真菌,抗炎,抗氧化的功能,更有研究提示其有抗艾滋病的潛在功能。同時早期研究發(fā)現(xiàn),氯化兩面針堿能夠抑制肝癌細胞、骨肉瘤細胞和胃癌細胞的增殖,還能夠通過抑制c-Src/focal adhesionkinase (FAK)有關(guān)的信號通路抑制乳腺癌的轉(zhuǎn)移。我們建立乳腺癌細胞株MCF-7和MDA-MB-231兩種模型,探討氯化兩面針堿及聯(lián)合化療藥物阿霉素后對以上兩種乳腺癌細胞株細胞毒性的影響。方法我們通過細胞活力試驗(MTT assay)檢測細胞活力�？寺⌒纬稍囼�(Colony formation assay)檢測單個細胞增殖能力。流式細胞分析儀檢測細胞周期(Cell cycle analysis),分析氯化兩面針堿對乳腺癌細胞周期分布之影響。TUNEL試驗(Terminal deoxynucleotidyl transferased UTP nick endlabeling assays)和凋亡檢測試驗(Flow cytometric apoptosis assays)檢測氯化兩面針堿誘導(dǎo)的乳腺癌細胞凋亡作用的影響。線粒體膜電位分析(Measurement of the mitochondrial membrane potential assays)檢測氯化兩面針堿誘導(dǎo)細胞凋亡的途徑。蛋白免疫印跡試驗(Weston blot)檢測使用氯化兩面針堿后對乳腺癌經(jīng)典P53和AKT通路,及對細胞增殖和凋亡相關(guān)蛋白表達的影響。通過計算兩種藥物的聯(lián)合抑制率(CDI),分析驗證氯化兩面針堿與阿霉素在乳腺癌細胞株MCF-7和MDA-MB-231中的協(xié)同促進細胞毒性的作用。結(jié)果我們通過細胞活力檢測試驗(MTT assay)發(fā)現(xiàn)氯化兩面針堿可以抑制乳腺癌細胞的增殖(P0.05)。流式細胞凋亡檢測試驗(Flow cytometric apoptosis assay)表明氯化兩面針堿可明顯誘導(dǎo)乳腺癌細胞的早期凋亡,同時發(fā)現(xiàn)其可以引起G2/M期細胞周期阻滯(P0.05)。結(jié)合Annexin V/PI雙染色、TUNEL染色分析和JC-1線粒體膜電位分析的實驗結(jié)果,證實氯化兩面針堿可誘導(dǎo)乳腺癌細胞的凋亡,并發(fā)現(xiàn)是通過細胞線粒體膜電位途徑發(fā)揮作用,同時具有時間和劑量依賴性(P0.05)。在分子機制方面,我們發(fā)現(xiàn)癌細胞增殖的抑制作用同p53和p21蛋白的增加相關(guān)聯(lián),并且具有時間和濃度依賴性。通過蛋白免疫印跡方法(western blot analysis),發(fā)現(xiàn)氯化兩面針堿在乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231細胞中可以上調(diào)促進凋亡的蛋白Bax, cleavage-caspase-3,9和cleavage-PARP的表達,并且下調(diào)抗凋亡的蛋白Bcl-2, caspase-3和PARP的表達。應(yīng)用PI3K/Akt特異性抑制劑LY294002,我們發(fā)現(xiàn)抑制AKT的表達可以促進氯化兩面針堿對乳腺癌細胞活力的影響,同時增強氯化兩面針堿對乳腺癌細胞凋亡的誘導(dǎo),進一步的證實氯化兩面針堿可以通過抑制磷酸化的AKT而起到抑制乳腺癌細胞增殖同時誘導(dǎo)乳腺癌細胞凋亡的作用。最后通過MTT試驗檢測細胞活性,統(tǒng)計分析證實阿霉素和氯化兩面針堿聯(lián)合應(yīng)用具有協(xié)同抑制乳腺癌細胞增殖的作用。結(jié)論我們研究表明氯化兩面針堿在雌激素受體陽性和雌激素受體陰性的乳腺癌細胞中,均具有抗癌的作用。這種抗癌的作用是通過介導(dǎo)G2/M期細胞周期阻滯,并可誘導(dǎo)細胞早期凋亡。氯化兩面針堿誘導(dǎo)細胞凋亡是通過上調(diào)促進凋亡蛋白的表達,同時下調(diào)抑制凋亡蛋白的表達而發(fā)揮作用。最重要的是,研究發(fā)現(xiàn)氯化兩面針堿與阿霉素聯(lián)合應(yīng)用可以增強阿霉素對乳腺癌細胞的毒性作用同時能減少阿霉素的使用劑量,從而證實了氯化兩面針堿在乳腺癌的治療中具有潛在臨床應(yīng)用價值。
【關(guān)鍵詞】：氯化兩面針堿 細胞凋亡 細胞周期阻滯 阿霉素聯(lián)合 乳腺癌
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.9
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-11
• 符號說明11-13
• 前言13-15
• 材料與方法15-31
• 結(jié)果31-36
• 討論36-39
• 結(jié)論39
• 本研究創(chuàng)新點39-40
• 附圖表40-47
• 參考文獻47-52
• 致謝52-54
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄54-55
• 學(xué)位論文評閱及答辯情況表55

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉紹華,覃青云,唐獻蘭,方X,楊衛(wèi)豪,張祥民;兩面針的藥學(xué)研究與開發(fā)利用[J];廣西科學(xué)院學(xué)報;2005年02期

2 梁廣華,張建浩;兩面針中乙氧基白屈菜紅堿和氯化兩面針堿的測定[J];中藥材;2005年10期

3 劉紹華;覃青云;方X;唐獻蘭;楊衛(wèi)豪;張祥民;;廣西十個不同產(chǎn)地的兩面針中活性成分的分析[J];廣西植物;2005年06期

4 劉麗敏;劉華鋼;;氯化兩面針堿的研究近況[J];時珍國醫(yī)國藥;2007年01期

5 孫培文;劉海濤;雷鵬;李新中;黃琪;李觀勇;;反相高效液相色譜法同時測定毛兩面針中氯化兩面針堿、乙氧基白屈菜紅堿和毛兩面針素的含量[J];中南藥學(xué);2011年03期

6 談英;仰鐵錘;韓正洲;嚴萍;陳蔚文;;高效液相色譜法測定兩面針不同藥用部位氯化兩面針堿的含量[J];廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報;2011年02期

7 黃曉燕;黃光偉;覃青云;王韌;;兩面針兩種不同提取工藝方法氯化兩面針堿含量的比較[J];口腔護理用品工業(yè);2011年05期

8 黃艷;劉布鳴;賴茂祥;楊剛勁;蔣秀珍;文建文;;兩面針中氯化兩面針堿對照品的制備[J];廣西科學(xué);2013年03期

9 賴茂祥,劉布鳴,蔣瑾華,饒偉源,楊敏;薄層-紫外分光光度法測定兩面針中氯化兩面針堿的含量[J];中國中藥雜志;1992年09期

10 謝培德,張華,張治軍;復(fù)方兩面針含片的質(zhì)量標準研究[J];中成藥;2000年05期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 林楠;陳華師;;中藥兩面針研究進展[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會中藥炮制分會2009年學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2009年

2 武文英;張利兵;張慧敏;秦艷芳;吳昊;杜黎明;;熒光光譜法研究氯化兩面針堿與葫蘆脲[7]之間的相互作用[A];中國化學(xué)會第28屆學(xué)術(shù)年會第9分會場摘要集[C];2012年

3 劉華鋼;葉冬梅;黃慧學(xué);;氯化兩面針堿在兔體內(nèi)的藥代動力學(xué)研究[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會第九屆制劑學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2008年

4 何瑞;陳培玲;仰鐵錘;韓正洲;張曉麗;;兩面針種子檢驗規(guī)程初步研究[A];第十屆全國藥用植物及植物藥學(xué)術(shù)研討會論文摘要集[C];2011年

5 賴茂祥;;兩面針生態(tài)特征與資源開發(fā)現(xiàn)狀[A];2004年中國西部藥學(xué)論壇論文匯編（上冊）[C];2004年

6 江菊;毛曉健;趙杰;;傣藥嘿喃活的臨床應(yīng)用和研究概況[A];《中國民族醫(yī)藥雜志》傣醫(yī)傣藥專輯（二）[C];2008年

7 葉玉珊;丘俊鑫;劉嘉煒;張卿;閔歡;俞強;詹若挺;陳蔚文;;來源于兩面針的STAT3小分子抑制劑[A];2011年全國藥物化學(xué)學(xué)術(shù)會議——藥物的源頭創(chuàng)新論文摘要集[C];2011年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 本報記者 陳榕;兩面針收購芳草 意在渠道整合[N];第一財經(jīng)日報;2005年

2 本報記者 古亦忠 鄭盛豐;創(chuàng)新·創(chuàng)業(yè)·創(chuàng)牌[N];人民日報;2000年

3 本報記者 李運濤 張文德　通訊員 楊志剛;“兩面針”實施品牌戰(zhàn)略[N];中華工商時報;2005年

4 郝倩;兩面針去年利潤狂降81%[N];第一財經(jīng)日報;2006年

5 蔣飛邋王斌 王艷偉;兩面針轉(zhuǎn)讓4000萬股中信證券股權(quán)幕后[N];第一財經(jīng)日報;2007年

6 諶貽照;兩面針：喜獲總理夸“三好”[N];廣西日報;2007年

7 諶貽照;兩面針：商標價值飆至24億元[N];廣西日報;2007年

8 劉興標;兩面針產(chǎn)品飲譽國際市場[N];廣西日報;2007年

9 張昀;兩面針稱未隱瞞揚州項目[N];廣州日報;2007年

10 何曉晴;兩面針：利益輸出者[N];中國經(jīng)濟時報;2007年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 談英;三九胃泰主要原料“兩面針”資源的科學(xué)合理開發(fā)利用研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2011年

2 王博龍;氯化兩面針堿體外抗腫瘤效應(yīng)及其分子機制研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2007年

3 劉志千;天然產(chǎn)物5，，6-裂環(huán)環(huán)烯醚萜和兩面針堿的全合成[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2014年

4 秦三海;中藥兩面針、白花丹提取物體外抗腫瘤活性篩選及其分子機制研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2007年

5 劉麗敏;氯化兩面針堿抗腫瘤效應(yīng)及其分子機制初步研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2009年

6 房志卿;辛伐他汀與氯化兩面針堿對腎癌抑制作用及其機制的研究[D];山東大學(xué);2014年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 余麗瑩;中藥材兩面針種質(zhì)資源的研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2007年

2 孫明娟;氯化兩面針堿對乳腺癌抑制作用及與阿霉素協(xié)同作用的研究[D];山東大學(xué);2015年

3 程翔宇;氯化兩面針堿對前列腺癌細胞抑制增殖、侵襲與誘發(fā)凋亡的研究[D];山東大學(xué);2015年

4 李濤;氯化兩面針堿對垂體腺瘤GH3細胞的抑制作用及機制研究[D];山東大學(xué);2015年

5 楊衛(wèi)豪;中藥兩面針有效成分的研究及在口腔清潔護理用品中的應(yīng)用[D];江南大學(xué);2008年

6 趙森;兩面針鎮(zhèn)痛緩釋片的研究[D];遼寧中醫(yī)藥大學(xué);2009年

7 盧凌春;氯化兩面針堿化學(xué)對照品的制備研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2010年

8 申慶榮;兩面針對腫瘤細胞7404和7901“譜—效”關(guān)系的研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2010年

9 方琳喬;兩面針中兩種生物堿的含量測定方法及離子樹脂提取分離工藝研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2011年

10 歐尚瑤;廣西兩面針植物化學(xué)成分研究[D];廣西師范大學(xué);2005年

本文編號：668379