本文關鍵詞：Galectin-3通過EGFR介導調(diào)控腫瘤細胞E-cadherin表達的機制研究

  更多相關文章： 半乳糖凝集素-3 E-鈣粘蛋白 β-連環(huán)蛋白 表皮生長因子受體

【摘要】：半乳糖凝集素(galectin)家族是哺乳動物p-半乳糖苷連接蛋白,與p-半乳糖苷有很強的親和力,并且都含有一段保守的糖識別結(jié)構(gòu)域(carbohydrate recognition domain, CRD)。半乳糖凝集素-3(galectin-3)是galectin家族中唯一的嵌合型代表,含有1個CRD和12個氨基酸殘基組成的N端結(jié)構(gòu)域。Galectin-3蛋白含251個氨基酸殘基,相對分子質(zhì)量為31,000 Da,調(diào)節(jié)腫瘤細胞的凋亡、粘附、增殖和血管形成。Galectin-3具有各種各樣的生物功能是因為其復雜的細胞亞結(jié)構(gòu)分布,使它能與各種不同的配體結(jié)合產(chǎn)生生物效應。細胞粘附分子(cell adhesion molecules, CAMs),通過調(diào)節(jié)細胞與細胞之間和細胞與細胞外基質(zhì)之間的反應參與腫瘤細胞轉(zhuǎn)移過程�；谛蛄型葱院徒Y(jié)構(gòu)不同,CAMs家族分成以下幾類：鈣粘蛋白(cadherin),選擇素(selectin),整合素(integrin),免疫球蛋白超家族,淋巴細胞尋靶受體,如CD44。E-鈣粘蛋白(E-cadherin)是經(jīng)典鈣粘蛋白中的原型成員,在保持上皮細胞極性和完整性方面發(fā)揮特別重要的作用。在細胞外,毗鄰細胞的兩個E-cadherin分子通過其細胞外部分含有鈣離子的五個重復序列片段結(jié)合,形成黏著斑。在細胞內(nèi),E-cadherin通過α,β-,和p-120 catenin與細胞骨架連接。本論文研究galectin-3和E-cadherin這兩個腫瘤因子的內(nèi)在聯(lián)系及其調(diào)節(jié)腫瘤發(fā)生的機制,而EGFR通路與galectin-3和E-cadherin都有緊密的聯(lián)系,所以我們首先探討了EGF誘導對二者聯(lián)系的必要性。MTT實驗顯示,無論EGF的刺激與否,galectin-3抑制劑β-Lactose都能抑制腫瘤細胞A549的增殖,所以,EGF刺激對于galectin-3的抗凋亡是無關緊要的。但劃痕實驗顯示,EGF可以誘導A549的遷移,western blotting實驗結(jié)果也顯示只有在EGF存在時,galectin-3對E-cadherin的表達才有影響,我們研究的E-cadherin主要參與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移,所以我們選擇EGF誘導進行后續(xù)實驗。采用western blotting摸索EGF誘導EGFR磷酸化的時間相關性,結(jié)果顯示,在15min時,p-EGFR表達最高,為使實驗結(jié)果更明顯,后續(xù)都采用EGF誘導15min進行實驗。Western blotting結(jié)果顯示在EGF誘導下,在高表達galectin-3的人乳腺癌細胞MCF-7和人結(jié)腸癌細胞HCT-116中,β-Lactose下調(diào)E-cadherin和β-catenin的表達,而在低表達galectin-3的A549細胞中,β-Lactose對E-cadherin和β-catenin的表達無影響。結(jié)果表明,細胞表面的galectin-3上調(diào)腫瘤細胞內(nèi)E-cadherin和β-catenin的表達。Western blotting結(jié)果顯示在EGF誘導下,外源性的人重組galectin-3下調(diào)A549中E-cadherin的表達,上調(diào)β-catenin的表達。為了進一步證明galectin-3調(diào)節(jié)β-catenin的具體機制,分別提取A549細胞中胞漿和胞核蛋白后進行western blotting實驗,結(jié)果顯示galectin-3可促使β-catenin進入細胞核。另外,免疫共沉淀實驗顯示,外源性galectin-3對E-cadherin/ β-catenin復合體沒有顯著影響。這些結(jié)果表明,外源性galectin-3下調(diào)腫瘤細胞內(nèi)E-cadherin的表達,上調(diào)β-catenin的表達,促進β-catenin入核,但不影響E-cadherin/β-catenin復合體。綜上所述,galectin-3和E-cadherin這兩個腫瘤因子有著重要的內(nèi)在聯(lián)系,并且細胞不同亞結(jié)構(gòu)分布的galectin-3對E-cadherin的調(diào)控作用不同。
【關鍵詞】：半乳糖凝集素-3 E-鈣粘蛋白 β-連環(huán)蛋白 表皮生長因子受體
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R730.2
【目錄】：

• 中文摘要8-10
• ABSTRACT10-12
• 符號說明12-14
• 前言14-27
• 1. Galectin-3簡介14-16
• 2. Galectin-3的生物學功能16-19
• 3. 以Galectin-3為靶點的抑制劑研究19-21
• 4. Galectin-3腫瘤臨床診斷和預后的應用21
• 5. E-cadherin21-24
• 6. E-cadherin的功能24-25
• 7. EGFR25-26
• 8. 本課題研究的主要方向26-27
• 實驗部分27-46
• 1. 實驗材料27-29
• 1.1 化合物27
• 1.2 細胞株及其培養(yǎng)27
• 1.3 試劑27-28
• 1.4 試劑配制28-29
• 1.5 儀器設備29
• 2. 實驗方法29-34
• 2.1 腫瘤細胞生長抑制試驗29-30
• 2.2 Western blotting法檢測相關蛋白表達實驗30-33
• 2.3 劃痕實驗33
• 2.4 亞細胞結(jié)構(gòu)胞漿和胞核蛋白提取實驗33-34
• 2.5 免疫共沉淀實驗34
• 2.6 統(tǒng)計學方法34
• 3. 實驗結(jié)果34-42
• 3.1 EGF誘導A549細胞的遷移34-35
• 3.2 EGF誘導EGFR的磷酸化活化35
• 3.3 β-Lactose抑制腫瘤細胞生長35-37
• 3.4 β-Lactose誘導E-cadherin和β-catenin下調(diào)37-40
• 3.5 細胞外galectin-3誘導E-cadherin下調(diào)和β-catenin上調(diào)40-41
• 3.6 細胞外galectin-3誘導β-catenin從細胞質(zhì)進入細胞核41
• 3.7 細胞外galectin-3對E-cadherin/β-catenin復合體的作用41-42
• 4. 討論42-45
• 5. 結(jié)論45-46
• 參考文獻46-58
• 致謝58-59
• 碩士學位期間發(fā)表或待發(fā)表的論文59-60
• 附件60

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