本文關(guān)鍵詞：染氡BEAS-2B細胞組蛋白乙酰化對P53和MGMT基因的影響

  更多相關(guān)文章： 氡 BEAS-2B細胞 組蛋白H3乙�；� P53 MGMT

【摘要】：目的:人永生化支氣管上皮細胞(BEAS-2B)暴露于放射性氡,觀察BEAS-2B細胞暴露后組蛋白H3乙酰化改變情況及對P53和MGMT基因的影響,探究氡致肺癌早期細胞內(nèi)相關(guān)分子生物學(xué)改變情況。方法:BEAS-2B細胞用LHC-8無血清培養(yǎng)基于37℃,5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。設(shè)立對照組(C)和染氡組(Rn)。將處于對數(shù)生長期的細胞制備單細胞懸液,以每孔1×105個細胞的數(shù)量接種于Transwell膜上,第2天細胞貼壁后置于細胞氣體染毒裝置中,Transwell膜上方氡持續(xù)泵入直接對細胞染氡,膜下方通入培養(yǎng)基保持細胞濕潤。氡濃度為20000bq/m3,染氡時間為30min,細胞染氡兩次記作染氡1代(Rn1)。每代染氡結(jié)束后收集細胞,一部分繼續(xù)下一次染氡,其余常規(guī)培養(yǎng)傳代,傳至第n代記作Rn1-n,共染氡10代,傳代40代。對照組暴露于氡本底值濃度下該裝置中,其余條件同染氡組。流式細胞儀檢測細胞的細胞周期、凋亡率及線粒體膜電位,軟瓊脂克隆形成實驗分析細胞惡性轉(zhuǎn)化程度,染色質(zhì)免疫共沉淀試驗檢測P53基因和MGMT基因啟動子區(qū)乙�；M蛋白H3水平,染色質(zhì)免疫共沉淀聯(lián)合RT-PCR檢測P53基因和MGMT基因m RNA表達情況,Western blot檢測各組細胞P53和MGMT蛋白表達情況。結(jié)果:(1)染氡后細胞G1期縮短,S期延長,染氡細胞傳代后晚期代數(shù)細胞凋亡率相比早期代數(shù)細胞降低,線粒體膜電位降低,細胞軟瓊脂克隆形成實驗結(jié)果顯示,BEAS-2B細胞在軟瓊脂中有較小的克隆形成率,但隨著細胞染毒代數(shù)的增加以及傳代,軟瓊脂克隆形成率逐漸增高,染毒10代克隆形成率最高。(2)染氡細胞P53基因組蛋白H3乙酰化水平較對照組降低,MGMT基因組蛋白H3乙�；捷^對照組增加。(3)組蛋白H3乙�；揎棸l(fā)生后P53基因表達和蛋白表達較對照組減少,MGMT基因和蛋白表達較對照組增加。結(jié)論:1.染氡后細胞出現(xiàn)惡性轉(zhuǎn)化趨勢。2、染氡后細胞P53基因組蛋白H3乙�；浇档�,MGMT基因組蛋白H3乙酰化水平升高。3、組蛋白H3乙�；礁淖兒�,P53基因和蛋白表達水平降低,MGMT基因表達水平和蛋白表達水平升高。
【關(guān)鍵詞】：氡 BEAS-2B細胞 組蛋白H3乙�；� P53 MGMT
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R734.2
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 引言9-12
• 第一部分 氡致BEAS-2B細胞早期惡性轉(zhuǎn)化12-21
• 1．材料與方法12-15
• 1.1 試劑和儀器12-13
• 1.1.1 試劑12
• 1.1.2 儀器12-13
• 1.1.3 細胞13
• 1.2 方法13-15
• 1.2.1 細胞培養(yǎng)與照射13-14
• 1.2.2 細胞周期分析14
• 1.2.3 細胞凋亡分析14
• 1.2.4 線粒體膜電位測定14
• 1.2.5 軟瓊脂克隆檢測染氡細胞和對照組細胞惡性轉(zhuǎn)化趨勢14-15
• 1.2.6 統(tǒng)計分析15
• 2 結(jié)果15-19
• 2.1 細胞形態(tài)變化15-16
• 2.2 細胞周期變化16
• 2.3 細胞凋亡率變化16-17
• 2.4 線粒體膜電位改變17-18
• 2.5 軟瓊脂克隆結(jié)果18-19
• 3.討論19-21
• 第二部分 染氡后BEAS-2B細胞P53和MGMT基因啟動子區(qū)域組蛋白H3乙酰化表達水平的研究21-30
• 1 材料與方法21-26
• 1.1 材料21-22
• 1.1.1 主要試劑21-22
• 1.1.2 主要儀器22
• 1.2 方法22-26
• 1.2.1 染色質(zhì)免疫共沉淀22-26
• 1.2.2 瓊脂糖凝膠電泳實驗26
• 2 結(jié)果26-28
• 2.1 超聲條件探索26-27
• 2.2 RT-QPCR檢測P53基因和MGMT基因啟動子區(qū)組蛋白H3乙�；�27-28
• 3 討論28-30
• 第三部分 染氡后BEAS-2B細胞P53和MGMT基因組蛋白H3乙酰化水平改變對基因表達的影響30-37
• 1 材料與方法30-33
• 1.1 材料30-31
• 1.1.1 主要試劑30
• 1.1.2 主要儀器30-31
• 1.2.方法31-33
• 1.2.1 Western blot實驗檢測P53和MGMT蛋白的表達情況31-33
• 1.2.2 RT-PCR檢測P53和MGMT基因表達量33
• 2.結(jié)果33-35
• 2.1 P53和MGMT基因表達量結(jié)果33-34
• 2.2 P53基因和MGMT基因蛋白表達量34-35
• 3 討論35-37
• 結(jié)論37-38
• 參考文獻38-43
• 綜述43-48
• 參考文獻46-48
• 研究生期間科研經(jīng)歷及發(fā)表的文章48-49
• 中英文縮略語對照表49-50
• 致謝50-51

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 府偉靈,黃慶;腫瘤表觀遺傳學(xué)[J];國外醫(yī)學(xué)(臨床生物化學(xué)與檢驗學(xué)分冊);2004年04期

2 孫樹漢;;腫瘤的表觀遺傳學(xué)研究[J];中國腫瘤生物治療雜志;2008年01期

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本文編號：660791