本文關(guān)鍵詞：石蒜堿及鹽酸石蒜堿對(duì)肺癌A549細(xì)胞和食管癌Eca-109細(xì)胞增殖和凋亡的影響

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【摘要】：惡性腫瘤是當(dāng)前危害人類(lèi)健康的嚴(yán)重疾病,抗腫瘤化學(xué)藥物在殺滅癌細(xì)胞的同時(shí),對(duì)人體正常細(xì)胞也產(chǎn)生了一定的毒副作用。因此,從天然植物中尋找和提煉高效低毒的抗腫瘤藥物已逐漸成為近年來(lái)國(guó)內(nèi)外學(xué)者的研究熱點(diǎn)。關(guān)于石蒜科植物提取物石蒜堿及鹽酸石蒜堿,研究報(bào)道其在白血病細(xì)胞(HL-60、K562),多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞(KM3),卵巢癌細(xì)胞(Hey1B),非激素依賴性前列腺癌細(xì)胞(PC-3M,DU145,LNCa P,22RV1)中,均有良好的抗腫瘤功效,但作用機(jī)制不盡相同。本文選取石蒜堿及鹽酸石蒜堿,探討其抑制肺癌A549細(xì)胞和食管癌Eca-109細(xì)胞活性及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制。本文開(kāi)展了如下實(shí)驗(yàn):(1)MTT法檢測(cè)不同濃度(0,2.5,5.0,10.0,20.0μM)的石蒜堿和鹽酸石蒜堿處理肺癌A549細(xì)胞和食管癌Eca-109細(xì)胞24h和48h對(duì)細(xì)胞活性的影響。(2)熒光顯微鏡觀察濃度為0,2.5,5.0,10.0,20.0μM的石蒜堿和鹽酸石蒜堿處理A549細(xì)胞和Eca-109細(xì)胞24h后AO/PI染色下的形態(tài)變化。(3)流式細(xì)胞儀檢測(cè)濃度為0,1.2,2.4,4.8μM的鹽酸石蒜堿處理Eca-109細(xì)胞24h后的細(xì)胞凋亡率。(4)流式細(xì)胞儀檢測(cè)濃度為0,2.4,4.8μM的鹽酸石蒜堿處理Eca-109細(xì)胞24h后細(xì)胞周期的變化。(5)qRT-PCR檢測(cè)石蒜堿和鹽酸石蒜堿(0,10μM)處理24h后,肺癌A549細(xì)胞和食管癌Eca-109細(xì)胞內(nèi)凋亡相關(guān)基因(p53,Bcl-2,Bax,Caspase-3,Caspase-9)在轉(zhuǎn)錄水平的變化。(6)Western blot檢測(cè)濃度為0,0.5,1.0μM的鹽酸石蒜堿處理Eca-109細(xì)胞6h后,基因p53,因Bcl-2,Caspase-9,Cyclin D1表達(dá)量的變化以及Akt,SAPK/JNK及GSK-3β蛋白磷酸化水平的變化。本文研究結(jié)果如下:(1)石蒜堿和鹽酸石蒜堿對(duì)A549細(xì)胞和Eca-109細(xì)胞活性均有明顯的抑制作用,并且呈時(shí)間劑量依賴關(guān)系。(2)在不同濃度石蒜堿和鹽酸石蒜堿處理下,經(jīng)AO/PI染色后熒光顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)A549細(xì)胞和Eca-109細(xì)胞發(fā)出紅色熒光,凋亡小體增多。(3)經(jīng)濃度為0,1.2,2.4,4.8μM的鹽酸石蒜堿處理Eca-109細(xì)胞24h后,細(xì)胞凋亡率相應(yīng)增高,并且呈劑量依賴關(guān)系。(4)濃度為0,2.4,4.8μM的鹽酸石蒜堿處理Eca-109細(xì)胞24h后,細(xì)胞周期G1期細(xì)胞數(shù)目百分率明顯上升,并且呈劑量依賴關(guān)系。(5)經(jīng)石蒜堿和鹽酸石蒜堿(10μM)處理24h后,肺癌A549細(xì)胞和食管癌Eca-109細(xì)胞內(nèi)凋亡相關(guān)基因p53、Bax、Caspase-3、Caspase-9的轉(zhuǎn)錄水平明顯上調(diào),而B(niǎo)cl-2下調(diào)明顯。(6)濃度為0,0.5,1.0μM的鹽酸石蒜堿處理Eca-109細(xì)胞6h后,p53和Caspase-9蛋白表達(dá)量隨藥物濃度的增加而上升,Bcl-2和Cyclin D1蛋白表達(dá)量隨藥物濃度的增加而下降,SAPK/JNK和GSK-3β蛋白磷酸化水平隨藥物濃度增加而上升。綜上所述,石蒜堿和鹽酸石蒜堿可以抑制肺癌A549細(xì)胞和食管癌Eca-109細(xì)胞的細(xì)胞活性并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。本文的研究結(jié)果為石蒜堿及鹽酸石蒜堿日后開(kāi)發(fā)為新型天然抗腫瘤的潛在性提供了理論基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：石蒜堿 鹽酸石蒜堿 肺癌A549細(xì)胞 食管癌Eca-109細(xì)胞 細(xì)胞凋亡 細(xì)胞周期
【學(xué)位授予單位】：西華師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R73-3
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-10
• 主要符號(hào)對(duì)照表10-11
• 第一章 前言11-24
• 1.1 腫瘤概述11-13
• 1.1.1 腫瘤的細(xì)胞構(gòu)成11
• 1.1.2 腫瘤的抵抗11-12
• 1.1.3 腫瘤的轉(zhuǎn)化12-13
• 1.1.4 腫瘤細(xì)胞的遷移13
• 1.2 腫瘤發(fā)病趨勢(shì)及死亡率13-14
• 1.2.1 我國(guó)肺癌現(xiàn)狀14
• 1.2.2 我國(guó)食管癌現(xiàn)狀14
• 1.3 細(xì)胞凋亡與腫瘤的關(guān)系14-15
• 1.4 細(xì)胞周期與腫瘤的關(guān)系15-16
• 1.5 細(xì)胞程序性壞死與腫瘤的關(guān)系16-17
• 1.6 腫瘤研究的新方法學(xué)17-18
• 1.6.1 腫瘤細(xì)胞與動(dòng)物模型的方法17
• 1.6.2 腫瘤微環(huán)境的研究方法17
• 1.6.3 腫瘤系統(tǒng)生物學(xué)的方法17-18
• 1.7 生物堿18-19
• 1.7.1 生物堿概述18
• 1.7.2 生物堿抗腫瘤功效研究概況18-19
• 1.7.2.1 苦參堿18
• 1.7.2.2 長(zhǎng)春花堿18-19
• 1.7.2.3 喜樹(shù)堿19
• 1.7.2.4 秋水仙堿19
• 1.7.2.5 三尖杉酯堿19
• 1.8 石蒜堿及鹽酸石蒜堿19-22
• 1.8.1 石蒜堿及鹽酸石蒜堿概述19-20
• 1.8.2 石蒜堿及鹽酸石蒜堿抗腫瘤研究進(jìn)展20-22
• 1.8.2.1 抗急性早幼粒細(xì)胞白血病細(xì)胞20-21
• 1.8.2.2 抗多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞21
• 1.8.2.3 抗慢性粒細(xì)胞性白血病細(xì)胞21-22
• 1.8.2.4 抗卵巢癌細(xì)胞22
• 1.8.2.5 抗激素非依賴性前列腺癌細(xì)胞22
• 1.9 本研究的目的與意義22-23
• 1.10 實(shí)驗(yàn)線路圖23-24
• 第二章 實(shí)驗(yàn)材料與方法24-35
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料24
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)試劑24
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器24
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法24-35
• 2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)24
• 2.2.2 MTT法檢測(cè)細(xì)胞活性24-25
• 2.2.3 熒光染色觀察細(xì)胞形態(tài)25
• 2.2.4 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡25-26
• 2.2.4.1 樣品染色26
• 2.2.4.2 觀察檢測(cè)26
• 2.2.5 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期26-27
• 2.2.6 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)基因轉(zhuǎn)錄水平的變化27-29
• 2.2.6.1 mRNA抽提27
• 2.2.6.2 mRNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA27-29
• 2.2.6.3 REALTIME-PCR29
• 2.2.7 Western blot檢測(cè)蛋白表達(dá)水平的變化29-35
• 2.2.7.1 蛋白提取29-30
• 2.2.7.2 制作BCA標(biāo)準(zhǔn)曲線30-31
• 2.2.7.3 SDS-PAGE制備31-33
• 2.2.7.4 轉(zhuǎn)膜及封閉33
• 2.2.7.5 孵抗體33-34
• 2.2.7.6 顯影34-35
• 第三章 結(jié)果與分析35-45
• 3.1 MTT法檢測(cè)細(xì)胞活性35-37
• 3.2 AO/PI染色觀察A549、Eca-109細(xì)胞形態(tài)37-39
• 3.3 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡（PE-Annexin V—7-ADD）39-40
• 3.4 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期（PI-stained）40-41
• 3.5 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)基因轉(zhuǎn)錄水平的變化41-43
• 3.6 Western blot檢測(cè)蛋白表達(dá)水平的變化43-44
• 3.7 Western blot檢測(cè)信號(hào)通路蛋白磷酸化水平的變化44-45
• 第四章 討論45-49
• 第五章 結(jié)論與展望49-51
• 參考文獻(xiàn)51-56
• 致謝56-59
• 在學(xué)期間的科研情況59

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前6條

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本文編號(hào)：658203