本文關(guān)鍵詞：3-BrPA逆轉(zhuǎn)肺腺癌細(xì)胞的耐藥性研究

  更多相關(guān)文章： 3-BrPA 順鉑 A549/DDP細(xì)胞 耐藥逆轉(zhuǎn)

【摘要】：背景癌癥這一難以治愈的疾病無(wú)論在發(fā)達(dá)還是發(fā)展中國(guó)家都會(huì)給社會(huì)帶來(lái)沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。在環(huán)境污染及吸煙等因素的作用下,肺癌幾乎已經(jīng)成為男性癌癥患者的主要死因,并且在發(fā)達(dá)國(guó)家的女性人群中,其病死率已經(jīng)超越乳腺癌躍居惡性腫瘤榜首[1]。眾所周知,手術(shù)切除病灶是肺癌最有效的治療手段,但是臨床上絕大多數(shù)患者明確診斷時(shí)分期已經(jīng)偏晚,失去了手術(shù)切除病灶的機(jī)會(huì),故針對(duì)肺癌患者行之有效的治療方式為化療治療[2]。包含鉑類藥物的治療方案是晚期肺癌化療的標(biāo)準(zhǔn)模式,然而這些方案的治療效果并不令人滿意,其主要原因是順鉑在臨床運(yùn)用過(guò)程中所產(chǎn)生的耐藥性。順鉑耐藥后,多藥耐藥蛋白P-gp等表達(dá)相應(yīng)增加,改變順鉑排出和攝取,從而降低細(xì)胞中含量,使其不能達(dá)到有效濃度[3]。20世紀(jì),Warburg O等[4-6]研究發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞在氧氣充足時(shí)仍是通過(guò)糖酵解的方式獲得生存所需的能量,這一現(xiàn)象被稱為瓦伯格效應(yīng)(Warburg effect)[7]。XU RH、PELICANO H等[8]已經(jīng)證實(shí)通過(guò)阻斷腫瘤細(xì)胞的糖酵解過(guò)程從而抑制細(xì)胞生存所需的ATP能殺死多藥耐藥表型的腫瘤細(xì)胞,并且多藥耐藥細(xì)胞對(duì)3-BrPA這種糖酵解特異性抑制劑很敏感,3-BrPA能增強(qiáng)耐藥細(xì)胞(HL-60/AR)對(duì)阿霉素、長(zhǎng)春新堿、阿糖胞苷等化療藥物的敏感性。因此,3-BrPA作為一種糖酵解抑制劑,為腫瘤界逆轉(zhuǎn)MDR的研究帶來(lái)了一個(gè)新思路。本研究擬采用3-BrPA作為研究對(duì)象觀察其對(duì)A549/DDP細(xì)胞是否具有耐逆轉(zhuǎn)作用以及探討可能的機(jī)制。目的探究3-BrPA對(duì)肺腺癌耐順鉑的A549/DDP細(xì)胞的逆轉(zhuǎn)作用及其可能機(jī)制。方法1.采用CCK-8(cell counting kit-8)法檢測(cè)3-BrPA對(duì)A549/DDP細(xì)胞的增殖抑制作用,由此計(jì)算出3-BrPA的最佳耐藥逆轉(zhuǎn)濃度。2.采用CCK8法分別檢測(cè)順鉑對(duì)A549細(xì)胞、A549/DDP細(xì)胞及A549/DDP細(xì)胞加入3-BrPA后的IC50(half maximal inhibitory concentration),并根據(jù)公式計(jì)算出耐藥倍數(shù)、耐藥逆轉(zhuǎn)倍數(shù)及相對(duì)逆轉(zhuǎn)效率。3.采用Western blot法檢測(cè)P-gp分別在A549細(xì)胞、A549/DDP細(xì)胞以及3-BrPA作用后的A549/DDP細(xì)胞上的表達(dá)水平,由此觀察3-BrPA對(duì)細(xì)胞膜P-gp表達(dá)的影響。4.采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)不同濃度水平的3-BrPA作用于A549/DDP細(xì)胞后細(xì)胞內(nèi)Rh123的平均熒光強(qiáng)度(MFI),由此觀察3-BrPA對(duì)細(xì)胞膜P-gp功能的影響。結(jié)果1.3-BrPA對(duì)A549/DDP細(xì)胞的增殖具有抑制作用,并且呈時(shí)間-劑量依賴性,與對(duì)照組相比差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),由此算出3-BrPA的最佳耐藥逆轉(zhuǎn)濃度5ug/ml。2.A549細(xì)胞及A549/DDP細(xì)胞的順鉑IC50分別為6.714ug/ml、38.99 ug/ml,3-BrPA作用后的A549/DDP細(xì)胞的順鉑IC50為12.86 ug/ml,由此計(jì)算得出A549/DDP細(xì)胞的耐藥倍數(shù)為5.81。A549/DDP細(xì)胞對(duì)順鉑的耐藥性被3-BrPA逆轉(zhuǎn)了3.03倍,相對(duì)逆轉(zhuǎn)效率為81%。3.Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示存在P-gp過(guò)表達(dá)現(xiàn)象的A549/DDP細(xì)胞在加入3-BrPA后,P-gp表達(dá)較之前明顯降低。4.流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果示隨著3-BrPA濃度的遞增,作用后的A549/DDP細(xì)胞內(nèi)平均熒光強(qiáng)度(MFI)亦隨之遞增。結(jié)論1.3-BrPA能以時(shí)間-劑量依賴性的方式抑制A549/DDP細(xì)胞的生長(zhǎng)。2.3-BrPA能逆轉(zhuǎn)順鉑對(duì)A549/DDP細(xì)胞產(chǎn)生的耐藥性。3.抑制細(xì)胞膜表面P-gp表達(dá)、降低P-gp功能可能是3-BrPA逆轉(zhuǎn)順鉑耐藥性的機(jī)制。
【關(guān)鍵詞】：3-BrPA 順鉑 A549/DDP細(xì)胞 耐藥逆轉(zhuǎn)
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R734.2
【目錄】：

• 縮略詞表4-5
• 英文摘要5-8
• 中文摘要8-10
• 第一章 前言10-14
• 第二章 3-BrPA對(duì)肺腺癌耐藥細(xì)胞A549/DDP細(xì)胞的抑制作用14-20
• 2.1 材料與方法14-17
• 2.2 結(jié)果17-18
• 2.3 討論18-20
• 第三章 3-BrPA對(duì)A549/DDP細(xì)胞的耐藥逆轉(zhuǎn)作用20-25
• 3.1 材料與方法20-22
• 3.2 結(jié)果22-23
• 3.3 討論23-25
• 第四章 3-BrPA逆轉(zhuǎn)耐順鉑的肺腺癌細(xì)A549/DDP細(xì)胞耐藥性的機(jī)制研究25-32
• 4.1 材料與方法25-29
• 4.2 結(jié)果29-30
• 4.3 討論30-32
• 全文結(jié)論32-33
• 參考文獻(xiàn)33-37
• 文獻(xiàn)綜述 3-BrPA的抗腫瘤作用研究37-46
• 參考文獻(xiàn)42-46
• 攻讀碩士期間發(fā)表的文章46-47
• 致謝47

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