本文關鍵詞：食管鱗癌放射抗拒細胞株蛋白指紋圖譜特征的實驗研究

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【摘要】：目的:探討食管鱗狀細胞癌(ECa109)放射抗拒細胞株特征性蛋白指紋圖譜,為進一步開展臨床研究提供依據(jù)。方法:1.確定食管鱗狀細胞癌細胞株ECa109的亞致死劑量射線。2.構建食管鱗狀細胞癌放射抗拒細胞株模型。食管鱗狀細胞癌放射抗拒細胞株ECa109-IR是用亞致死劑量放射線反復照射法獲得的,ECa109-IR來源于食管鱗癌細胞株ECa109,是ECa109接受5次亞致死劑量射線后存活的第五代亞克隆細胞。3.檢測食管鱗癌放射抗拒細胞株ECa109-IR的放射敏感性�？寺∩嬖囼�、細胞增殖試驗和流式細胞術比較ECa109-IR和ECa109的放射敏感性。4.測差異蛋白譜——用蛋白指紋圖譜技術檢測放射抗拒細胞株ECa109-IR與放射敏感細胞株ECa109之間差異的蛋白譜。結果:1、建立食管鱗狀細胞癌放射抗拒細胞株ECa109-IR。ECa109-IR為ECa109接受亞致死劑量射線反復5次照射后,存活的第五代亞克隆細胞株為放射抗拒細胞株ECa109-IR。2、ECa109-IR細胞的放射抗拒性分析。a.克隆生存實驗結果顯示ECa109-IR的存活克隆比ECa109的更大、數(shù)量更多,表現(xiàn)為放射抗拒。ECa109-IR的劑量存活曲線下降趨勢比ECa109慢。從而證實ECa109-IR的放射抗拒性明顯高于ECa109,ECa109-IR的放射抗拒性強。b.細胞增值實驗射線對放射抗拒細胞株ECa109-IR的生長影響效應較小,射線照射后細胞恢復時間短、增長快。c.流式細胞術G0/G1的百分率:ECa109-IR和ECa109無明顯差異,S期的百分率:ECa109-IR比ECa109高,G2/M期的百分率:ECa109-IR比ECa109低,表明ECa109-IR細胞放射誘導的G1/S和G2/M期阻滯的作用在明顯弱于ECa109,這與典型的放射抗拒表型一致。該實驗表明,放射誘導的細胞周期調節(jié)在放射抗拒細胞株ECa109-IR發(fā)生了改變。3.ECa109-IR和ECa109蛋白指紋圖譜:ECa109-IR細胞和ECa109細胞的蛋白質荷比峰存在明顯差異(P0.05的差異峰為21個,P0.01的差異峰為19個),差異峰的M/Z幾乎均在6000以內,其中以M/Z在2000-6000最多見。以上顯示ECa109-IR細胞和ECa109細胞蛋白圖譜存在差異,即兩者之間存在差異蛋白,這些蛋白極有可能為決定ECa109-IR和ECa109放射敏感性差異的原因。結論:放射抗拒ECa109-IR細胞和放射敏感ECa109細胞之間存在差異蛋白質荷比峰,也是ECa109-IR放射抗拒的原因,并為臨床研究提供依據(jù)。
【關鍵詞】：食管鱗癌 放射治療 放療抵抗 蛋白指紋圖譜技術
【學位授予單位】：蚌埠醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.1
【目錄】：

• 中文摘要5-6
• 英文摘要6-8
• 引言8-11
• 實驗材料11-13
• 實驗方法13-15
• 1.ECa109細胞株的復蘇13
• 2.細胞培養(yǎng)傳代13-14
• 3.細胞的凍存14
• 4.活細胞計數(shù)14
• 5.蛋白質的提取14-15
• 實驗步驟15-17
• 1.培養(yǎng)ECa109細胞15
• 2.建立ECa109-IR細胞株15
• 3、克隆生存實驗探討ECa109-IR的放射抗拒性15-16
• 4、細胞增值實驗分析ECa109-IR細胞的放射抗拒性16
• 5、流式細胞術檢測ECa109-IR的放射抗拒性16-17
• 6、ECa109-IR細胞和ECa109細胞蛋白指紋圖譜測定17
• 結果17-23
• 1.放射抗拒ECa109細胞株的建立17
• 2.ECa109-IR細胞的放射抗拒性分析17-20
• 3.ECa109-IR細胞蛋白指紋圖譜20-23
• 討論23-25
• 小結25
• 參考文獻25-29
• 致謝29-30
• 附錄A 個人簡歷及發(fā)表文章30-40
• 附錄B 綜述40-52
• 參考文獻48-52

【相似文獻】

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本文編號：646055