本文關(guān)鍵詞：PARP1在卵巢癌的表達(dá)及抗氧化作用研究

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【摘要】：[研究背景]卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)常見的惡性腫瘤,其發(fā)病率僅次于子宮內(nèi)膜癌和宮頸癌列居第三位,但其死亡率卻占各類婦科腫瘤之首,嚴(yán)重威脅女性身體健康。卵巢癌早期一般無(wú)臨床癥狀,很難得到早期診斷,70%的患者就診時(shí)已為晚期。目前,卵巢癌的治療臨床上主要采用手術(shù)切除和藥物化療聯(lián)合治療,且預(yù)后很差,5年生存率僅30%。由于卵巢癌極高的惡性程度和極低的生存率,因此研究卵巢癌的惡性生物學(xué)行為及其發(fā)病機(jī)制就變得極其重要。PARP是存在于多數(shù)真核細(xì)胞中的一種多功能蛋白質(zhì)翻譯后修飾酶,其PAPR1約占90%。當(dāng)DNA損傷時(shí),PARP1可以識(shí)別DNA損傷片段并招募DNA修復(fù)蛋白到DNA損傷位點(diǎn),因此PARP1被認(rèn)為是DNA損傷的感受器。受它修飾的蛋白質(zhì)有組蛋白、RNA聚合酶、DNA聚合酶、DNA連接酶等。PARP1可以對(duì)組蛋白進(jìn)行ADP-核糖基化修飾使組蛋白從染色質(zhì)上脫離下來(lái),從而有助于修復(fù)蛋白結(jié)合進(jìn)行DNA的損傷修復(fù)。近年來(lái)有研究發(fā)現(xiàn),PARP1在乳腺癌、鼻咽癌、子宮內(nèi)膜癌和肺癌等多種腫瘤中普遍高表達(dá),提示PARP1有可能是腫瘤細(xì)胞生存所必須的,以及PARP1抑制劑用于治療腫瘤的可能性。因此,我們?cè)诼殉舶┲袡z測(cè)了PARP1的表達(dá)情況,發(fā)現(xiàn)PARP1在卵巢癌中同樣高表達(dá)。為了進(jìn)一步研究PARP1對(duì)卵巢癌細(xì)胞生存所起到的作用,我們用PARP1抑制劑PJ-34及敲除PARP1表達(dá)來(lái)研究其功能。結(jié)果發(fā)現(xiàn),PJ-34或敲除PARP1表達(dá)都可以抑制卵巢癌細(xì)胞生長(zhǎng)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)PARP1抑制顯著升高了卵巢癌細(xì)胞的ROS水平,同時(shí)誘導(dǎo)DNA雙鏈斷裂。而PARP1抑制對(duì)卵巢癌細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用可被自由基清除劑NAC所拯救,說(shuō)明PARP1通過(guò)提高卵巢癌細(xì)胞的抗氧化能力對(duì)癌細(xì)胞發(fā)揮保護(hù)作用。[研究目的]研究PARP1在卵巢癌中的表達(dá)水平及生物學(xué)作用。[研究方法]一、利用Western blot和Real-time PCR技術(shù)檢測(cè)PARP1在卵巢癌細(xì)胞和卵巢癌組織中的表達(dá)情況。二、利用平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)PARP1抑制對(duì)卵巢癌細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用。三、利用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)PARP1抑制對(duì)卵巢癌細(xì)胞ROS水平變化的影響。四、利用平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)PARP1抑制劑和NAC單獨(dú)及聯(lián)合處理對(duì)卵巢癌細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用。五、利用免疫熒光和Western blot方法檢測(cè)PARP1抑制后,卵巢癌細(xì)胞γ-H2AX的焦點(diǎn)形成及蛋白表達(dá)情況。六、利用Real-time PCR檢測(cè)PARP1抑制后卵巢癌細(xì)胞氧化損傷相關(guān)基因GPX1、GPX3、PRDX1、NOX4等的表達(dá)。[實(shí)驗(yàn)結(jié)果]一、PARP1在卵巢癌細(xì)胞A2780、HEY、SKOV3、 HO8910、HO8910PM和OVCAR3中高表達(dá),而在正常輸卵管上皮細(xì)胞FTE-187中低表達(dá)。PARP1在卵巢癌組織中同樣高表達(dá)。二、PJ-34對(duì)卵巢癌細(xì)胞A2780、HEY、H08910具有明顯的增殖抑制作用,而對(duì)正常輸卵管上皮細(xì)胞FTE-187影響較小。三、PJ-34誘導(dǎo)A2780、HO8910、HEY、SKOV3等卵巢癌細(xì)胞ROS水平升高。PARP1表達(dá)沉默的A2780細(xì)胞ROS水平同樣升高。四、PARP1功能缺陷的卵巢癌細(xì)胞對(duì)H202和MTH1抑制劑更敏感。抗氧化劑NAC處理卵巢癌細(xì)胞A2780可以拯救PJ-34對(duì)卵巢癌細(xì)胞的增殖抑制作用,說(shuō)明PJ-34對(duì)癌細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用是通過(guò)升高ROS介導(dǎo)的。五、PJ-34處理卵巢癌細(xì)胞A2780可以誘導(dǎo)DNA雙鏈斷裂,當(dāng)PJ-34和NAC聯(lián)合處理后可以降低DNA雙鏈斷裂,說(shuō)明DNA雙鏈斷裂是由ROS升高所引起的。六、部分卵巢癌細(xì)胞,如A2780、HO8910,經(jīng)PJ-34處理后,GPX1表達(dá)下調(diào)。[結(jié)論]PARP1在卵巢癌細(xì)胞中普遍高表達(dá)。PARP1通過(guò)降低氧化壓力對(duì)卵巢癌細(xì)胞發(fā)揮保護(hù)作用。
【關(guān)鍵詞】：卵巢癌 PARP1 ROS DNA雙鏈斷裂
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.31
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 符號(hào)說(shuō)明12-13
• 前言13-17
• 材料與方法17-37
• 結(jié)果37-47
• 一、PARP1在卵巢癌細(xì)胞和組織中普遍高表達(dá)37-38
• 二、PARP1抑制對(duì)卵巢癌具有增殖抑制作用38-40
• 三、PARP1抑制誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞ROS產(chǎn)生40-41
• 四、NAC可以拯救PARP1抑制對(duì)卵巢癌細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用41-44
• 五、PARP1抑制可誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞DNA雙鏈斷裂44-45
• 六、PARP1調(diào)控ROS的機(jī)制研究45-47
• 討論47-50
• 結(jié)論50-51
• 參考文獻(xiàn)51-57
• 致謝57-58
• 碩士期間待發(fā)表論文及參與發(fā)表的論文58-59
• 附件59

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1 劉爽;林靜嫻;劉琦;石群立;王建東;吳元赭;;維A酸干預(yù)前后卵巢癌細(xì)胞中維A酸受體的表達(dá)變化及意義[J];醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào);2007年11期

2 ;發(fā)現(xiàn)休眠卵巢癌細(xì)胞存活機(jī)制[J];生命世界;2009年02期

3 ;美發(fā)現(xiàn)休眠卵巢癌細(xì)胞存活機(jī)制[J];醫(yī)學(xué)研究雜志;2009年04期

4 向君彥;夏新蜀;王昕娜;徐靜;王萍;江園;余和平;白定群;許川山;;低強(qiáng)度中頻超聲殺傷卵巢癌細(xì)胞的初步研究[J];激光雜志;2011年01期

5 陳韻仙;;下泌尿道切除作為卵巢癌細(xì)胞減少術(shù)的一部分[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).婦產(chǎn)科學(xué)分冊(cè);1983年03期

6 仲任,黃瑞濱,宋善俊;組織因子途徑抑制物2對(duì)卵巢癌細(xì)胞遷徙和浸潤(rùn)能力的影響[J];癌癥;2003年10期

7 ;精液能夠殺死卵巢癌細(xì)胞[J];發(fā)明與創(chuàng)新;2003年12期

8 高琨,李力,陳心秋,張瑋;雌孕激素對(duì)卵巢癌細(xì)胞體外生長(zhǎng)的影響[J];腫瘤防治研究;2004年04期

9 王威廉,陳心秋,恩帝安,馬加薩,周德南,唐凱,黃薇;抗卵巢癌細(xì)胞膜抗體對(duì)卵巢癌細(xì)胞體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)及荷瘤小鼠的體內(nèi)聚集性的實(shí)驗(yàn)研究[J];廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2004年04期

10 仲任,黃瑞濱,宋善俊;組織因子途徑抑制物2表達(dá)抑制卵巢癌細(xì)胞浸潤(rùn)能力的實(shí)驗(yàn)研究[J];腫瘤;2004年05期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 王文霞;孔北華;李鵬;曲迅;;蛋白酶體抑制劑對(duì)卵巢癌細(xì)胞的作用機(jī)制[A];第八次全國(guó)婦產(chǎn)科學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2004年

2 劉娟娟;林蓓;趙越;李飛飛;郝瑩瑩;張帆;朱連成;張淑蘭;;巖藻糖基化抗原對(duì)卵巢癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響[A];東北三省第四屆婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2008年

3 陳心秋;王威廉;趙芳芳;周德南;唐凱;;~(131)Ⅰ—抗卵巢癌抗體聯(lián)合外放射對(duì)卵巢癌細(xì)胞的體外殺傷實(shí)驗(yàn)研究[A];第七屆廣西腫瘤學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2003年

4 王威廉;陳心秋;恩帝安.馬加薩;周德南;唐凱;;抗卵巢癌抗體對(duì)卵巢癌細(xì)胞體外細(xì)胞毒及載瘤裸鼠體內(nèi)聚集性實(shí)驗(yàn)研究[A];第七屆廣西腫瘤學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2003年

5 許沈華;牟瀚舟;顧琳慧;朱赤紅;劉祥麟;;高轉(zhuǎn)移卵巢癌細(xì)胞差異表達(dá)基因在染色體定位及其功能[A];浙江省生理科學(xué)會(huì)2006年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2006年

6 唐東平;陳心秋;唐凱;張潔清;賀海平;;11種化療藥物對(duì)卵巢癌細(xì)胞的抑制作用及其有核細(xì)胞細(xì)胞毒性研究[A];第四屆中國(guó)腫瘤學(xué)術(shù)大會(huì)暨第五屆海峽兩岸腫瘤學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2006年

7 李曉峰;王欣;馬開東;劉寶林;;卵巢癌細(xì)胞的低溫保存及致死特性研究[A];上海市制冷學(xué)會(huì)2007年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2007年

8 梁念慈;何太平;覃燕梅;吳科鋒;;抗癌草藥半邊旗有效成分對(duì)卵巢癌細(xì)胞基因表達(dá)的影響[A];第十屆全國(guó)生化與分子藥理學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要匯編[C];2007年

9 郝瑩瑩;林蓓;趙越;歐陽(yáng)玲;張淑蘭;;α1,2巖藻糖轉(zhuǎn)移酶基因轉(zhuǎn)染對(duì)卵巢癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第九次全國(guó)婦科腫瘤學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

10 李長(zhǎng)東;張為遠(yuǎn);苑春莉;韓麗英;;卵巢癌細(xì)胞對(duì)人樹突狀細(xì)胞成熟及功能的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第一屆全球華人婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)大會(huì)暨第三次全國(guó)婦產(chǎn)科中青年醫(yī)師學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2007年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 記者 任海軍;卵巢癌為何常常復(fù)活？生死命懸一基因[N];新華每日電訊;2009年

2 靖九江;4-HPR有望用于治療卵巢癌[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2005年

3 邰 舉;韓國(guó)醫(yī)學(xué)專家發(fā)現(xiàn)精液能夠殺死卵巢癌細(xì)胞[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2003年

4 邰舉;精液能夠殺死卵巢癌細(xì)胞[N];科技日?qǐng)?bào);2003年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 王萍;丙泊酚對(duì)卵巢癌細(xì)胞侵襲和紫杉醇誘導(dǎo)的卵巢癌細(xì)胞凋亡的作用中轉(zhuǎn)錄因子Slug的影響[D];山東大學(xué);2015年

2 魏星;CGI-58基因調(diào)控脂代謝介導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的作用及機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

3 李曉;卵巢癌細(xì)胞影響外周血T淋巴細(xì)胞功能和分化的研究[D];浙江大學(xué);2006年

4 彭萍;白細(xì)胞介素12基因轉(zhuǎn)染樹突狀細(xì)胞后和卵巢癌細(xì)胞融合作為卵巢癌腫瘤疫苗的初步研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2003年

5 張晶晶;卵巢癌細(xì)胞與腹膜間皮細(xì)胞相互作用對(duì)侵襲轉(zhuǎn)移微環(huán)境的影響[D];山東大學(xué);2006年

6 李慧慧;雌激素及其代謝物和抗壞血酸對(duì)卵巢癌細(xì)胞的作用及相互影響[D];山東大學(xué);2013年

7 李留霞;基因調(diào)控溶血磷脂酸作用通路抑制卵巢癌細(xì)胞生長(zhǎng)的實(shí)驗(yàn)研究[D];鄭州大學(xué);2008年

8 黃妍;卵泡刺激素對(duì)卵巢癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及其相關(guān)分子機(jī)制[D];復(fù)旦大學(xué);2009年

9 劉穎濤;Rab25對(duì)卵巢癌的促進(jìn)作用及其分子調(diào)節(jié)機(jī)制[D];復(fù)旦大學(xué);2010年

10 李琴華;制瘤素對(duì)卵巢癌細(xì)胞的影響及其機(jī)制的體外研究[D];吉林大學(xué);2011年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 曾麗;AKT2通過(guò)PKM2調(diào)控卵巢癌細(xì)胞增殖作用的研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

2 雷婧;SDF-1激活PI3K-Akt通路在卵巢癌細(xì)胞增殖和侵襲中的作用[D];鄭州大學(xué);2015年

3 牛貝貝;GDF15對(duì)卵巢癌細(xì)胞遷移、增殖的影響及其可能機(jī)制[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

4 陳燕;卡鉑與吉西他濱單獨(dú)或聯(lián)合用藥對(duì)卵巢癌細(xì)胞SKOV3及裸鼠皮下移植腫瘤生長(zhǎng)抑制作用的研究[D];蘇州大學(xué);2015年

5 李釗;應(yīng)用葉酸受體靶向} 米載體增強(qiáng)卵巢癌細(xì)胞光動(dòng)力殺傷的實(shí)驗(yàn)研究[D];山東大學(xué);2015年

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7 侯棟;PARP1在卵巢癌的表達(dá)及抗氧化作用研究[D];山東大學(xué);2015年

8 周靜;PADI4基因?qū)Σ煌琾53狀態(tài)的卵巢癌細(xì)胞系生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移的影響[D];山東大學(xué);2015年

9 楊欣影;α2，，3唾液酸轉(zhuǎn)移酶Ⅲ調(diào)節(jié)卵巢癌細(xì)胞對(duì)紫杉醇敏感性的研究[D];暨南大學(xué);2015年

10 馬沐雅;促紅細(xì)胞生成素及其受體在卵巢癌細(xì)胞的表達(dá)和相關(guān)作用的研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2008年

本文編號(hào)：640360