本文關(guān)鍵詞：NGAL基因在肺癌中的表達(dá)及功能研究

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【摘要】：【研究背景】肺癌,又稱原發(fā)性支氣管肺癌,是發(fā)病率和死亡率最高的的惡性腫瘤之一。發(fā)病率在中國呈上升和年輕化趨勢,其死亡率居各類腫瘤的第一位。按照病理分型為小細(xì)胞肺癌和非小細(xì)胞肺癌,其中小細(xì)胞肺癌占肺癌總數(shù)的25%,非小細(xì)胞肺癌占肺癌總數(shù)的75%,非小細(xì)胞肺癌又可分為鱗癌、腺癌、大細(xì)胞癌、腺鱗癌等類型。小細(xì)胞肺癌是一種生長迅速、早期即有淋巴結(jié)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的侵襲性疾病,對放化療敏感,約三分之一的小細(xì)胞肺癌為局限期,化放療可獲得80%左右的客觀響應(yīng)率,三分之二表現(xiàn)為擴(kuò)展期,預(yù)后很差,中位生存期為10個月。非小細(xì)胞肺癌的標(biāo)準(zhǔn)治療包括手術(shù)、放療、化療等綜合治療,系統(tǒng)性治療是非小細(xì)胞肺癌的多模態(tài)療法的一個基本元素。但絕大多數(shù)非小細(xì)胞肺癌就診時表現(xiàn)為局部晚期且治愈率低,由于肺癌早期沒有明顯的癥狀,難以覺察,就醫(yī)時肺癌細(xì)胞已向其他器官發(fā)生轉(zhuǎn)移,發(fā)展成為難以醫(yī)治的惡性腫瘤。肺癌死亡率高的主要原因就是腫瘤細(xì)胞的浸潤和轉(zhuǎn)移,而這一過程是由不同階段、不同的多個基因參與和調(diào)控的,包括了一系列病理生理反應(yīng)過程。因此,研究肺癌的病因、發(fā)病機(jī)制具有重要的臨床意義。中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL)是lipocalin家族的一員。NGAL可以在許多類型的疾病中都呈現(xiàn)異常表達(dá),在癌癥中研究較多的是NGAL能與基質(zhì)金屬蛋白酶形成復(fù)合物而起作用。近年來越來越多的研究表明,一些轉(zhuǎn)移能力較強(qiáng)的腫瘤細(xì)胞中,NGAL蛋白表達(dá)升高,參與了癌細(xì)胞的增殖、侵襲、浸潤,且與癌癥的分化有關(guān),對于NGAL在肺癌中所扮演的角色及其可能的的調(diào)控機(jī)制至今研究地并不完全清楚。因此,我們在肺癌組織上檢測其表達(dá)情況,明確其表達(dá)與肺癌的關(guān)系,在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步在人肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549中深入研究了NGAL基因功能及可能的表達(dá)調(diào)控機(jī)制,這對于闡明NGAL基因在腫瘤中的表達(dá)作用及調(diào)控機(jī)制有一定價值。通過以上研究可能有助于明確NGAL是否是肺癌浸潤和轉(zhuǎn)移的一個重要參考指標(biāo)以及其是否可能成為肺癌治療潛在的靶點。【研究目的】本研究主要觀察NGAL在臨床肺癌組織及其癌旁組織中的表達(dá)情況,分析NGAL是否在癌組織表達(dá)有所變化。同時通過體外細(xì)胞Si RNA干擾實驗,觀察沉默NGAL基因?qū)Ψ伟┘?xì)胞增殖、遷移及侵襲能力的影響,對肺癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT)形態(tài)轉(zhuǎn)換及對MMP-2和MMP-9蛋白表達(dá)的影響。【研究方法】應(yīng)用免疫組織化學(xué)檢測臨床標(biāo)本肺癌及癌旁組織中NGAL的表達(dá)情況。通過RNAi技術(shù)干擾NGAL后,運用定量PCR、Western-blot技術(shù),觀察干擾NGAL基因效率。干擾NGAL后,MTT檢測細(xì)胞增殖、Transwell實驗及細(xì)胞劃痕實驗檢測細(xì)胞遷移和侵襲能力,用Western blot及免疫熒光技術(shù)檢測EMT相關(guān)的蛋白E-Cadherin及Vimentin的表達(dá)情況。用Western blot方法檢測干擾NGAL后MMP-2和MMP-9蛋白的表達(dá)變化�！窘Y(jié)果】對臨床標(biāo)本組織化學(xué)檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)NGAL在癌旁中表達(dá)率為13.3%(4/30),而在肺癌組織中NGAL的陽性信號主要定位于胞質(zhì),其陽性表達(dá)率為76.32%(58/76),顯著高于癌旁組織中NGAL的表達(dá)水平(P0.01)。在肺癌細(xì)胞上,NGAL-si RNA轉(zhuǎn)染組,癌細(xì)胞中NGAL基因及蛋白水平表達(dá)都受到明顯的抑制。NGAL-si RNA轉(zhuǎn)染組細(xì)胞增殖能力24、48小時細(xì)胞存活率為64.92%、56.58%;抑制率分別為35.08%、43.42%,與對照組比較有顯著差異。遷移、侵襲能力比對照組都有顯著降低,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。干擾NGAL,E-cadherin的表達(dá)顯著升高,Vimentin的表達(dá)水平降低。干擾NGAL,MMP-2和MMP-9蛋白表達(dá)水平降低。【結(jié)論】NGAL在肺癌組織較癌旁組織高表達(dá)。干擾NGAL基因后,肺癌細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移受到明顯的抑制。干擾NGAL后,EMT的標(biāo)志物Vimentin表達(dá)降低,E-Cadherin表達(dá)升高,NGAL對肺癌細(xì)胞的EMT轉(zhuǎn)換過程中起著重要作用。另外沉默NGAL能夠抑制MMP-2、MMP-9蛋白的表達(dá),抑制肺癌細(xì)胞的侵襲。因此,NGAL可能是肺癌浸潤和轉(zhuǎn)移的一個重要參考指標(biāo),可為肺癌治療提供潛在的靶點。
【關(guān)鍵詞】：肺癌 NGAL基因 遷移 侵襲 上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R734.2
【目錄】：

• 縮略詞4-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 前言11-12
• 材料與方法12-25
• 結(jié)果25-29
• 討論29-32
• 結(jié)論32-33
• 參考文獻(xiàn)33-35
• 文獻(xiàn)綜述35-47
• 參考文獻(xiàn)42-47
• 發(fā)表文章47-59
• 個人簡歷59-60
• 致謝60

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前9條

1 牛永東,許麗艷,李恩民;酵母單雜交誘餌質(zhì)粒pHis-3NF和pLacZ-3NF的構(gòu)建與鑒定[J];癌變.畸變.突變;2003年01期

2 許麗艷,李恩民,蔡唯佳,沈忠英,曾毅;NGAL基因5’側(cè)翼區(qū)轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件螢火蟲熒光素酶報告基因表達(dá)載體的構(gòu)建與鑒定[J];癌變.畸變.突變;2004年01期

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5 李恩民,許麗艷,熊華淇,蔡唯佳,吳炳禮,張燦,張永發(fā),林艷,沈忠英;食管癌細(xì)胞SHEEC中NGAL基因5'-UTR和3'-UTR的克隆與鑒定[J];癌癥;2003年02期

6 榮舉,許麗艷,蔡唯佳,熊興東,李勁濤,方王楷,沈忠英,李恩民;Fascin 1基因在永生化食管上皮細(xì)胞癌變中的表達(dá)[J];癌癥;2004年03期

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8 韓溟,許麗艷;惡性腫瘤中MMP-9表達(dá)調(diào)控機(jī)制研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué)(分子生物學(xué)分冊);2003年01期

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中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 許麗艷;NGAL基因在食管癌細(xì)胞中的表達(dá)調(diào)控機(jī)制[D];北京工業(yè)大學(xué);2006年

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本文編號：638334