本文關(guān)鍵詞：Bmi1在口腔舌鱗癌中的生物學(xué)作用及組蛋白去乙酰化酶抑制劑干預(yù)的實(shí)驗(yàn)研究

  更多相關(guān)文章： 舌鱗狀細(xì)胞癌 Bmi1 組蛋白去乙�；敢种苿�

【摘要】：Bmi1基因(B lymphoma Mo-MLV insertion region 1 homolog,Bmi1)屬于核染色質(zhì)調(diào)控因子多梳基因(Polycomb group,Pc G)家族,主要通過染色質(zhì)結(jié)構(gòu)的改變來調(diào)控基因的轉(zhuǎn)錄后沉默,直接參與細(xì)胞周期、凋亡和衰老的調(diào)控,與干細(xì)胞穩(wěn)態(tài)和腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。近來,大量研究證實(shí)Bmi1在許多人類惡性腫瘤中異常高表達(dá),因此其具有重要的診斷和治療意義,并且可作為一種潛在的治療靶點(diǎn)。但是目前其在舌鱗狀細(xì)胞癌(tongue squamous cell carcinoma,TSCC)中的表達(dá)情況少有報(bào)道。為了研究Bmi1在舌鱗癌中相關(guān)生物學(xué)作用,設(shè)計(jì)并實(shí)施了如下實(shí)驗(yàn):目的:闡明Bmi1在舌鱗癌細(xì)胞系和臨床標(biāo)本中的表達(dá)及其臨床意義;探索以Bmi1為靶向的小分子抑制劑抗口腔鱗癌治療的有效性,為抗腫瘤治療提供新的靶點(diǎn)和理論基礎(chǔ)。方法:1、應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色檢測Bmi1和Ki67在舌鱗癌組織及正常舌體組織中的表達(dá),分析Bmi1的表達(dá)水平與相關(guān)臨床病理參數(shù)及患者總體生存率之間的關(guān)系。2、利用si RNA抑制舌鱗癌細(xì)胞中Bmi1的表達(dá),通過MTT、Western blot、遷移試驗(yàn)、實(shí)時(shí)定量RT-PCR等實(shí)驗(yàn)分析其對(duì)舌鱗癌細(xì)胞的增值、凋亡、遷移、衰老、克隆形成率等相關(guān)生物學(xué)作用的影響。3、通過組蛋白去乙酰化酶抑制劑TSA和Na B處理舌鱗癌細(xì)胞后,觀察其對(duì)舌鱗癌細(xì)胞相關(guān)生物學(xué)特征的影響。4、通過構(gòu)建動(dòng)物模型觀察Bmi1基因沉默和Na B腹腔給藥對(duì)腫瘤生長的影響。結(jié)果:1、通過q-PCR結(jié)果顯示,除Tca8113細(xì)胞系外Bmi1的m RNA水平與正常舌粘膜組織相比,在Cal27、SCC9、SCC25、HN4、HN6、HN12細(xì)胞中分別提高大約3.45、3.71、3.57、8.42、5.82和6.21倍(P0.01)。Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果也證實(shí)除了Tca8113外,Bmi1在TSCC細(xì)胞系中呈高表達(dá)。免疫熒光染色結(jié)果顯示Bmi1穩(wěn)定并主要表達(dá)于三種細(xì)胞系的細(xì)胞核當(dāng)中。免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示:52例舌鱗狀細(xì)胞癌組織中36例Bmi1呈強(qiáng)陽性表達(dá)(69.2%);16例舌正常黏膜組織中13例Bmi1呈弱陽性或陰性表達(dá)(81.3%)。因此,Bmi1在舌鱗狀細(xì)胞癌組織與正常舌體組織中的表達(dá)有顯著差異(P0.01)。在研究的52例舌鱗狀細(xì)胞癌患者中Bmi1表達(dá)與病人的年齡、性別、腫瘤大小、局部浸潤、病理分級(jí)、臨床分期無關(guān),與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)(P=0.0367)。免疫組化染色結(jié)果表明:Bmi1表達(dá)與Ki67表達(dá)顯著相關(guān)(P=0.0384);結(jié)合臨床隨訪資料,對(duì)患者總體生存情況進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)Bmi1高表達(dá)組患者的總體生存率明顯低于低表達(dá)組患者(log-rank,P=0.0179)。2、Bmi1基因沉默顯著抑制舌鱗癌細(xì)胞的增殖和遷移并且誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,顯著降低舌鱗癌細(xì)胞克隆形成率、降低CD44+CD133+雙陽性細(xì)胞亞群比例、誘導(dǎo)細(xì)胞衰老、增強(qiáng)順鉑化療藥物的敏感性。3、HDACi TSA和Na B能夠有效抑制舌鱗癌細(xì)胞中Bmi1的表達(dá)。有效地抑制腫瘤細(xì)胞的增殖、克隆形成以及CD44+CD133+雙陽性細(xì)胞亞群比例,誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡、衰老并且增強(qiáng)化療藥物的敏感性,獲得了與Bmi1基因沉默相類似的表型變化。但是也不完全一致,實(shí)驗(yàn)過程中我們發(fā)現(xiàn)TSA處理的細(xì)胞發(fā)生EMT樣形態(tài)改變并伴隨E-cadherin表達(dá)下調(diào)和Vimentin表達(dá)上調(diào)。我們也證明了在舌鱗癌細(xì)胞中Na B的這些抗癌作用至少部分是通過下調(diào)Bmi1的表達(dá)來實(shí)現(xiàn)的。4、通過構(gòu)建動(dòng)物模型發(fā)現(xiàn)Bmi1的基因沉默和Na B的藥理學(xué)抑制分別與對(duì)照組相比都能夠明顯抑制腫瘤的生長。結(jié)論:Bmi1在舌鱗狀細(xì)胞癌組織及細(xì)胞系中高表達(dá),與頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)和患者的預(yù)后及總體生存率也顯著相關(guān),提示Bmi1的異常表達(dá)可能與舌鱗癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān),并且可作為一種新的生物標(biāo)志物用于患者的診斷和預(yù)后預(yù)測。其次,選擇像Na B這樣合適的HDACi可作為一種新的抗舌鱗癌治療的藥物。
【關(guān)鍵詞】：舌鱗狀細(xì)胞癌 Bmi1 組蛋白去乙�；敢种苿�
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R739.85
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 符號(hào)說明10-12
• 前言12-15
• 第一部分 Bmi1在舌鱗癌組織及舌鱗癌細(xì)胞系中的表達(dá)及臨床意義15-34
• 1 材料與方法15-25
• 2 結(jié)果25-33
• 3 討論33
• 4 結(jié)論33-34
• 第二部分 Bmi1沉默對(duì)舌鱗癌細(xì)胞生物學(xué)功能的影響34-50
• 1 材料與方法34-41
• 2 結(jié)果41-48
• 3 討論48-49
• 4 結(jié)論49-50
• 第三部分 HDACi干預(yù)對(duì)舌鱗癌細(xì)胞表型的影響及相關(guān)機(jī)制50-66
• 1 材料與方法50-52
• 2 結(jié)果52-63
• 3 討論63-65
• 4 結(jié)論65-66
• 參考文獻(xiàn)66-72
• 文獻(xiàn)綜述72-82
• 參考文獻(xiàn)77-82
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況82-83
• 致謝83

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本文編號(hào)：636420