本文關(guān)鍵詞：miR-187-3p促進(jìn)Huh7人肝癌細(xì)胞干性形成的初步研究

  更多相關(guān)文章： miR-187-3p 肝癌 肝癌干樣細(xì)胞 自我更新 增殖 侵襲 遷移

【摘要】：目的:前期研究中,我們從Huh7人肝癌細(xì)胞系中成功富集培養(yǎng)出肝癌干樣細(xì)胞,并用相關(guān)實(shí)驗(yàn)證實(shí)其具有腫瘤干細(xì)胞(CSCs,cancer stem cells)的生物學(xué)特性。此外,我們使用Exiqon micro RNA芯片在肝癌細(xì)胞與肝癌干樣細(xì)胞中篩查出差異的miRNA表達(dá)譜。本研究在前期芯片研究基礎(chǔ)上篩選可能參與促進(jìn)Huh7人肝癌細(xì)胞干性形成相關(guān)差異表達(dá)的miRNA,并進(jìn)一步探討其對(duì)Huh7細(xì)胞干性的影響及其潛在分子機(jī)制,為肝癌的分子靶向治療提供研究基礎(chǔ)。方法:一、促進(jìn)Huh7人肝癌細(xì)胞干性形成相關(guān)差異表達(dá)miRNA的篩選及驗(yàn)證1.用非粘附球培養(yǎng)法在Huh7人肝癌細(xì)胞系中富集培養(yǎng)肝癌干樣細(xì)胞;用實(shí)時(shí)定量PCR(quantitative real time polymerase chain reaction,qPCR)方法在肝癌干樣細(xì)胞與肝癌細(xì)胞中檢測(cè)部分miRNA差異表達(dá)譜。2.用qPCR方法在肝癌組織與癌旁組織中檢測(cè)部分miRNA差異表達(dá)譜。二、miR-187-3p對(duì)Huh7人肝癌細(xì)胞干性的影響及其潛在分子機(jī)制1.構(gòu)建miR-187-3p慢病毒表達(dá)載體,感染Huh7人肝癌細(xì)胞,以獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染過(guò)表達(dá)miR-187-3p的Huh7細(xì)胞(miR-187-3p組),并設(shè)置感染空載體慢病毒的Huh7細(xì)胞為陰性對(duì)照(negative control group,NC組)和未感染慢病毒的Huh7細(xì)胞為空白對(duì)照(Blank組);慢病毒感染Huh7細(xì)胞72 h后,用倒置熒光顯微鏡觀察三組細(xì)胞中綠色熒光蛋白(enhanced Green Fluorescent Protein,e GFP)的表達(dá)情況,進(jìn)一步用qPCR方法檢測(cè)三組細(xì)胞中目的基因miR-187-3p的表達(dá)水平。2.用tumorsphere實(shí)驗(yàn)檢測(cè)miR-187-3p對(duì)肝癌干樣細(xì)胞自我更新能力的影響;用qPCR方法檢測(cè)miR-187-3p對(duì)肝癌細(xì)胞腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志基因表達(dá)的影響。3.用CCK-8(Cell Counting Kit-8)實(shí)驗(yàn)、平板克隆實(shí)驗(yàn)、transwell實(shí)驗(yàn)和劃痕實(shí)驗(yàn)在體外檢測(cè)過(guò)表達(dá)miR-187-3p對(duì)肝癌細(xì)胞增殖、侵襲及遷移能力的影響;用裸鼠成瘤實(shí)在體內(nèi)驗(yàn)檢測(cè)過(guò)表達(dá)miR-187-3p對(duì)肝癌細(xì)胞成瘤能力的影響。4.用生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)miR-187-3p的下游靶基因。結(jié)果:一、促進(jìn)Huh7人肝癌細(xì)胞干性形成相關(guān)差異表達(dá)miRNA的篩選及驗(yàn)證1.我們從Huh7人肝癌細(xì)胞系中富集培養(yǎng)出肝癌干樣細(xì)胞;進(jìn)一步用qPCR方法檢測(cè)到miR-187-3p在肝癌干樣細(xì)胞中的表達(dá)水平顯著高于肝癌細(xì)胞(p0.05),與前期miRNA差異表達(dá)譜的趨勢(shì)相一致。2.用qPCR方法檢測(cè)到miR-187-3p在肝癌組織中的表達(dá)水平顯著高于癌旁組織(p0.05),與前期miRNA差異表達(dá)譜的趨勢(shì)相一致。二、miR-187-3p對(duì)Huh7人肝癌細(xì)胞干性的影響及其潛在分子機(jī)制1.慢病毒感染Huh7細(xì)胞72 h后,倒置熒光顯微鏡(暗場(chǎng))觀察三組細(xì)胞中e GFP表達(dá)情況,結(jié)果顯示:轉(zhuǎn)染了慢病毒載體的miR-187-3p組和NC組中均可見(jiàn)大量綠色熒光,而未轉(zhuǎn)染慢病毒載體的Blank組中未見(jiàn)綠色熒光,提示慢病毒轉(zhuǎn)染成功;進(jìn)一步用qPCR法檢測(cè)miR-187-3p的表達(dá)情況,結(jié)果顯示:miR-187-3p組中目的基因miR-187-3p的表達(dá)水平顯著高于NC組和Blank組(p0.01),提示miR-187-3p過(guò)表達(dá)成功。2.tumorsphere實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:miR-187-3p組形成的肝癌干樣細(xì)胞球顯著大于NC組和Blank組,且miR-187-3p組的細(xì)胞球形成率顯著高于NC組和Blank組(p0.01);此外,qPCR結(jié)果顯示:miR-187-3p組中部分腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志基因BMI1、CTNNB1、KLF4、LIN28和PROM1的表達(dá)也顯著高于NC組和Blank組(p0.05)。3.CCK-8和平板克隆實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:miR-187-3p過(guò)表達(dá)后,Huh7細(xì)胞的增殖能力顯著增強(qiáng),miR-187-3p組的克隆形成率顯著高于NC組和Blank組(p0.01);transwell檢測(cè)細(xì)胞侵襲能力結(jié)果顯示:miR-187-3p組的侵襲細(xì)胞數(shù)較NC組和Blank組顯著增多(p0.01);transwell實(shí)驗(yàn)和劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移能力結(jié)果顯示:miR-187-3p過(guò)表達(dá)后,Huh7細(xì)胞的遷移能力顯著增強(qiáng),miR-187-3p組的遷移細(xì)胞數(shù)較NC組和Blank組顯著增多(p0.01),且miR-187-3p組24 h/0 h劃痕寬度顯著窄于NC組和Blank組(p0.01);裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:皮下注射腫瘤細(xì)胞40天時(shí),miR-187-3p組形成的瘤體明顯大于對(duì)照組,將瘤體取出測(cè)量其體積和重量結(jié)果顯示:miR-187-3p組的形成瘤體體積和重量均顯著大于NC組和Blank組(p0.01)。4.通過(guò)Target Scan、miRanda等生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn):UCHL1可能是miR-187-3p的下游功能靶基因。結(jié)論:1.過(guò)表達(dá)miR-187-3p不僅可促進(jìn)肝癌干樣細(xì)胞的自我更新和成球能力,還可促進(jìn)肝癌細(xì)胞部分腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志基因的表達(dá)。2.過(guò)表達(dá)miR-187-3p可促進(jìn)肝癌細(xì)胞在體外的增殖、侵襲、遷移及裸鼠體內(nèi)的成瘤能力;miR-187-3p可能通過(guò)靶向作用于UCHL1影響肝癌細(xì)胞的生物學(xué)功能。
【關(guān)鍵詞】：miR-187-3p 肝癌 肝癌干樣細(xì)胞 自我更新 增殖 侵襲 遷移
【學(xué)位授予單位】：西南醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.7
【目錄】：

• 摘要4-8
• Abstract8-12
• 前言12-14
• 第一部分 促進(jìn)Huh7人肝癌細(xì)胞干性形成相關(guān)差異表達(dá)miRNA的篩選及驗(yàn)證14-26
• 材料與方法14-21
• 結(jié)果21-23
• 討論23-26
• 第二部分 miR-187-3p對(duì)Huh7人肝癌細(xì)胞干性的影響及其潛在分子機(jī)制26-45
• 材料與方法26-34
• 結(jié)果34-43
• 討論43-45
• 結(jié)論45-46
• 參考文獻(xiàn)46-53
• 英漢縮略詞對(duì)照表53-55
• 致謝55-57
• 綜述57-66
• 參考文獻(xiàn)63-66

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 陳瑞銘;沈鼎武;;三系人肝癌細(xì)胞體外長(zhǎng)期培養(yǎng)后仍保持人肝癌的相關(guān)特性[J];細(xì)胞生物學(xué)雜志;1989年01期

2 齊連君,王執(zhí)民,張洪新,郭衛(wèi)平,倪代會(huì);加熱對(duì)人肝癌細(xì)胞-7721生長(zhǎng)規(guī)律的影響[J];實(shí)用放射學(xué)雜志;2000年05期

3 王小平,劉彥仿,楊守京,孫玉靜;不同人肝癌細(xì)胞中熱休克蛋白70表達(dá)的動(dòng)態(tài)研究[J];腫瘤研究與臨床;2000年05期

4 程中,歐小紅,匡安仁;人肝癌細(xì)胞膜胰島素受體的研究及臨床意義[J];中華普通外科雜志;2002年06期

5 朱惠明,蔡筱彥,黃勛,顧紅祥,王立生;凋亡素基因治療系統(tǒng)對(duì)人肝癌細(xì)胞的影響[J];中華內(nèi)科雜志;2003年09期

6 楊大國(guó),鄧欣,李知玉,聶廣,樂(lè)曉華,單萬(wàn)水;正肝方藥物血清誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞分化的體外實(shí)驗(yàn)研究[J];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志;2004年02期

7 董良;黃玲珍;孫海英;陳彥田;沈陽(yáng);肖登明;齊瀚實(shí);;極低頻磁場(chǎng)誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞的凋亡(英文)[J];中國(guó)臨床康復(fù);2006年25期

8 戴鍇;田德英;;瘦素促進(jìn)人肝癌細(xì)胞侵襲性生長(zhǎng)的體外研究[J];腫瘤;2007年06期

9 孫波;顏鑫;李文超;陳劍峰;朱海峰;;堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子對(duì)人肝癌細(xì)胞蛋白激酶B活性的影響[J];社區(qū)醫(yī)學(xué)雜志;2012年18期

10 劉耳;朱忠斌;吳燕;;亞硒酸鈉和絲裂霉素抑制人肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)的協(xié)同效應(yīng)[J];天津醫(yī)藥;1993年11期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 甘璐;楊祥良;徐輝碧;;硫氧還蛋白還原酶反義RNA對(duì)人肝癌細(xì)胞作用的研究[A];第六屆全國(guó)自由基生物學(xué)與自由基醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議和海峽兩岸自由基生物學(xué)與自由基醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2004年

2 王文奇;劉倩;時(shí)昌文;徐瀚峰;吳洪文;;生長(zhǎng)抑素對(duì)人肝癌細(xì)胞生物學(xué)行為影響的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國(guó)消化病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編（上冊(cè)）[C];2007年

3 王迎春;劉炎芳;邢蘭花;楊旭;李小歡;;曲古抑菌素A對(duì)人肝癌細(xì)胞周期及增殖凋亡影響的研究[A];第7屆全國(guó)疑難及重癥肝病大會(huì)論文集[C];2013年

4 田媛;白文元;馮子南;劉云燕;陳慶;;三羥異黃酮抑制人肝癌細(xì)胞SMMC-7721侵襲轉(zhuǎn)移的實(shí)驗(yàn)研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國(guó)消化病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編（下冊(cè)）[C];2007年

5 王秋艷;馬小軍;袁權(quán);;微囊化人肝癌細(xì)胞的極性重建[A];第一屆全國(guó)化學(xué)工程與生物化工年會(huì)論文摘要集(下)[C];2004年

6 劉珊林;劉冠中;申宗候;施冬云;;氧化還原介導(dǎo)PI3-K/PKB-JNK信號(hào)通路串話調(diào)節(jié)人肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)[A];第九次全國(guó)生物物理大會(huì)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2002年

7 崔杰峰;劉銀坤;宋海燕;張子;孫瑞霞;陳潔;馮鉅濤;于雁靈;申華麗;楊們?cè)?;人肝癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移相關(guān)分子的比較表達(dá)蛋白質(zhì)組學(xué)分析[A];中國(guó)蛋白質(zhì)組學(xué)首屆學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要集[C];2003年

8 邵勤;官陽(yáng);周澤斌;;血小板衍生生長(zhǎng)因子對(duì)人肝癌細(xì)胞的促生長(zhǎng)作用[A];中南地區(qū)第十六屆電子顯微鏡學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];2007年

9 王秋艷;馬小軍;袁權(quán);;海藻酸鈉/聚賴氨酸微膠囊用于人肝癌細(xì)胞三維培養(yǎng)[A];中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)2005年學(xué)術(shù)大會(huì)、青年學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要集[C];2005年

10 馮子南;白文元;劉云燕;田媛;;三羥異黃酮抑制人肝癌細(xì)胞SMMC-7721增殖及其機(jī)制的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國(guó)消化病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編（下冊(cè)）[C];2007年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 葉震敏;裂解型腺病毒基因治療人肝癌細(xì)胞及其轉(zhuǎn)移瘤的體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究[D];蘇州大學(xué);2006年

2 李雁;轉(zhuǎn)移性人肝癌細(xì)胞模型的優(yōu)化及轉(zhuǎn)移機(jī)理探討[D];復(fù)旦大學(xué);2002年

3 馬棟柱;人肝癌細(xì)胞抑癌基因PTEN的表達(dá)及其啟動(dòng)子的調(diào)控研究[D];復(fù)旦大學(xué);2004年

4 殷鵬;PI3K/Akt信號(hào)通路對(duì)人肝癌細(xì)胞中胱硫醚-γ-裂解酶基因表達(dá)調(diào)控的分子機(jī)制及其生物學(xué)功能的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2012年

5 楊闖;Beclin 1沉默對(duì)維生素K_3誘導(dǎo)的人肝癌細(xì)胞損傷的影響[D];吉林大學(xué);2009年

6 王文奇;EGF、雌二醇和生長(zhǎng)抑素對(duì)人肝癌細(xì)胞生物學(xué)行為影響的研究[D];山東大學(xué);2006年

7 馬秋野;脫落酸對(duì)SMMC-7721人肝癌細(xì)胞誘導(dǎo)分化的實(shí)驗(yàn)研究[D];昆明醫(yī)學(xué)院;2006年

8 李蘇宜;重組人生長(zhǎng)激素干預(yù)GHR不同表達(dá)水平人肝癌細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[D];鄭州大學(xué);2010年

9 孟玫;組蛋白去乙酰化酶抑制劑對(duì)人肝癌細(xì)胞的誘導(dǎo)分化及其機(jī)制的研究[D];山東大學(xué);2005年

10 鄭科;CXCL12/CXCR7調(diào)節(jié)人肝癌細(xì)胞侵襲和血管生成能力的實(shí)驗(yàn)研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2010年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 崔玉婷;大黃素誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞HepG2凋亡的作用和分子機(jī)制研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2016年

2 羅旺;MCM7基因?qū)θ烁伟┘?xì)胞周期的影響機(jī)制探究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2016年

3 賀稅;高表達(dá)NDRG2基因?qū)θ烁伟┘?xì)胞HepG2 EMT的影響[D];南華大學(xué);2016年

4 李孟玲;硫化氫通過(guò)EGFR/ERK/MMP-2和PTEN/AKT信號(hào)通路調(diào)控人肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)的作用研究[D];河南大學(xué);2016年

5 趙源源;miR-187-3p促進(jìn)Huh7人肝癌細(xì)胞干性形成的初步研究[D];西南醫(yī)科大學(xué);2016年

6 嚴(yán)羚瑋;高壓芒刺靜電場(chǎng)對(duì)人肝癌細(xì)胞生理活動(dòng)的影響[D];東北師范大學(xué);2005年

7 王開(kāi)陽(yáng);改變細(xì)胞周期時(shí)相分布后人肝癌細(xì)胞SMMC-7721侵襲力的觀察[D];南昌大學(xué);2010年

8 鐘雪;銀杏外種皮提取物對(duì)人肝癌細(xì)胞SMMC-7721效應(yīng)的研究[D];廈門(mén)大學(xué);2009年

9 楊軍;用血清藥理學(xué)方法研究復(fù)方斑蝥膠囊抗人肝癌細(xì)胞作用及作用機(jī)制[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2005年

10 汪勝林;光動(dòng)力療法對(duì)體外培養(yǎng)人肝癌細(xì)胞SMMC-7721的作用及機(jī)制[D];南京醫(yī)科大學(xué);2010年

，

本文編號(hào)：635830