發(fā)布時間：2017-08-07 16:08

  本文關鍵詞：ATF2基因促進腎癌細胞的增殖和轉移與臨床患者預后相關性的研究

  更多相關文章： ATF2 腎細胞癌 基因敲減 增殖 轉移 預后

【摘要】：[目的]激活轉錄因子2(activating transcription factor 2,ATF2)是堿性亮氨酸拉鏈(basic leucine zipper,b ZIP)家族成員,在不同腫瘤的發(fā)生和發(fā)展當中,ATF2發(fā)揮抑癌和促癌的雙重作用。研究報道其在調節(jié)參與應激、DNA損傷應答和轉錄調控基因和蛋白方面均發(fā)揮重要作用。然而,在腎臟腫瘤的相關研究中,ATF2的作用鮮有報道。本課題旨在通過抑制ATF2基因的表達,探究其對腎癌細胞系表型的影響,并結合臨床資料研究其相關的臨床意義。[研究方法]1、通過qRT-PCR(quantitative real-time,PCR)方式驗證腎癌細胞系與正常腎臟細胞系,癌旁組織和癌組織,癌組織和癌栓組織中ATF2 mRNA的表達差異。2、構建針對ATF2基因的三條si RNA(small interfering RNA,si RNA)敲減序列,并通過qRT-PCR方式驗證其敲減效率從而篩選敲減效率最強的一條序列制備慢病毒介導的ATF2 sh RNA(short hairpin RNA,sh RNA),并再次在mRNA和蛋白水平驗證其敲減效率。3、通過細胞增殖、細胞周期、凋亡、遷移和侵襲實驗驗證ATF2敲減對腎癌細胞系786-O和ACHN的影響。同時利用qRT-PCR和Western blot技術檢測影響細胞增殖和轉移相關基因的表達。裸鼠皮下荷瘤實驗再次驗證ATF2敲減對腎癌細胞增殖的影響。4、利用免疫組化和組織芯片技術,探究ATF2在腎癌組織中的表達情況,并結合臨床資料研究其對患者生存和預后的意義。[結果]1、qRT-PCR結果表明ATF2 mRNA在腎癌細胞系中的表達高于正常腎臟細胞系,臨床樣本中結果表明其在癌組織中高表達,且相較于癌組織,癌栓組織中ATF2 mRNA表達水平更高。2、qRT-PCR和Western blot結果表明構建的ATF2 sh RNA能夠有效的敲減ATF2在mRNA和蛋白水平的表達,敲減效率在90%以上。3、相較于對照組,ATF2敲減組腎癌細胞在增殖活性,遷移和侵襲能力方面均明顯降低。ATF2 sh RNA敲減組細胞凋亡增加,細胞周期出現(xiàn)G0/G1期阻滯。qRT-PCR和Western blot結果顯示,ATF2敲減后Cyclin B1,Cyclin D1,Snail和Vimentin基因的表達受到抑制,E-cadherin的表達升高。裸鼠皮下荷瘤實驗顯示實驗組腫瘤生長明顯受到抑制。4、組織芯片免疫組化染色結果分析,ATF2在腎癌組織中高表達,ATF2的表達與腎癌患者腫瘤的大小,有無癌栓,有無轉移相關。高表達ATF2腎癌患者的總體生存期和無進展生存期明顯較短。[結論]慢病毒敲減ATF2使其在mRNA和蛋白水平表達明顯受到抑制,ATF2通過調控Cyclin B1,Cyclin D1,Snail,Vimentin和E-cadherin基因的表達影響腎癌細胞的增殖和轉移。結合臨床資料分析ATF2可能作為判斷患者預后的生物學指標。
【關鍵詞】：ATF2 腎細胞癌 基因敲減 增殖 轉移 預后
【學位授予單位】：第二軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.11
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 英文縮略詞表10-11
• 前言11-14
• 參考文獻12-14
• 第一部分 驗證ATF2在腎癌中轉錄水平的表達和慢病毒載體介導的ATF2 shRNA的構建及驗證14-35
• 一、材料14-16
• 二、實驗方法16-27
• 三、結果27-32
• 四、討論32-33
• 五、結論33-34
• 參考文獻34-35
• 第二部分 體外和體內實驗驗證ATF2基因敲減后對人腎癌細胞生物學行為的影響35-61
• 一、材料35-36
• 二、方法36-42
• 三、結果42-57
• 四、討論57-58
• 五、結論58-59
• 參考文獻59-61
• 第三部分 ATF2基因在腎癌組織的表達及與臨床預后的相關性分析61-73
• 一、實驗材料61-62
• 二、方法62-63
• 三、結果63-71
• 四、討論71
• 五、結論71-72
• 參考文獻72-73
• 文獻綜述73-84
• 參考文獻79-84
• 在讀期發(fā)表論文和參加科研工作情況說明84-85
• 致謝85

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