本文關(guān)鍵詞：ATF2基因促進(jìn)腎癌細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移與臨床患者預(yù)后相關(guān)性的研究

  更多相關(guān)文章： ATF2 腎細(xì)胞癌 基因敲減 增殖 轉(zhuǎn)移 預(yù)后

【摘要】：[目的]激活轉(zhuǎn)錄因子2(activating transcription factor 2,ATF2)是堿性亮氨酸拉鏈(basic leucine zipper,b ZIP)家族成員,在不同腫瘤的發(fā)生和發(fā)展當(dāng)中,ATF2發(fā)揮抑癌和促癌的雙重作用。研究報(bào)道其在調(diào)節(jié)參與應(yīng)激、DNA損傷應(yīng)答和轉(zhuǎn)錄調(diào)控基因和蛋白方面均發(fā)揮重要作用。然而,在腎臟腫瘤的相關(guān)研究中,ATF2的作用鮮有報(bào)道。本課題旨在通過抑制ATF2基因的表達(dá),探究其對(duì)腎癌細(xì)胞系表型的影響,并結(jié)合臨床資料研究其相關(guān)的臨床意義。[研究方法]1、通過qRT-PCR(quantitative real-time,PCR)方式驗(yàn)證腎癌細(xì)胞系與正常腎臟細(xì)胞系,癌旁組織和癌組織,癌組織和癌栓組織中ATF2 mRNA的表達(dá)差異。2、構(gòu)建針對(duì)ATF2基因的三條si RNA(small interfering RNA,si RNA)敲減序列,并通過qRT-PCR方式驗(yàn)證其敲減效率從而篩選敲減效率最強(qiáng)的一條序列制備慢病毒介導(dǎo)的ATF2 sh RNA(short hairpin RNA,sh RNA),并再次在mRNA和蛋白水平驗(yàn)證其敲減效率。3、通過細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期、凋亡、遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證ATF2敲減對(duì)腎癌細(xì)胞系786-O和ACHN的影響。同時(shí)利用qRT-PCR和Western blot技術(shù)檢測影響細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移相關(guān)基因的表達(dá)。裸鼠皮下荷瘤實(shí)驗(yàn)再次驗(yàn)證ATF2敲減對(duì)腎癌細(xì)胞增殖的影響。4、利用免疫組化和組織芯片技術(shù),探究ATF2在腎癌組織中的表達(dá)情況,并結(jié)合臨床資料研究其對(duì)患者生存和預(yù)后的意義。[結(jié)果]1、qRT-PCR結(jié)果表明ATF2 mRNA在腎癌細(xì)胞系中的表達(dá)高于正常腎臟細(xì)胞系,臨床樣本中結(jié)果表明其在癌組織中高表達(dá),且相較于癌組織,癌栓組織中ATF2 mRNA表達(dá)水平更高。2、qRT-PCR和Western blot結(jié)果表明構(gòu)建的ATF2 sh RNA能夠有效的敲減ATF2在mRNA和蛋白水平的表達(dá),敲減效率在90%以上。3、相較于對(duì)照組,ATF2敲減組腎癌細(xì)胞在增殖活性,遷移和侵襲能力方面均明顯降低。ATF2 sh RNA敲減組細(xì)胞凋亡增加,細(xì)胞周期出現(xiàn)G0/G1期阻滯。qRT-PCR和Western blot結(jié)果顯示,ATF2敲減后Cyclin B1,Cyclin D1,Snail和Vimentin基因的表達(dá)受到抑制,E-cadherin的表達(dá)升高。裸鼠皮下荷瘤實(shí)驗(yàn)顯示實(shí)驗(yàn)組腫瘤生長明顯受到抑制。4、組織芯片免疫組化染色結(jié)果分析,ATF2在腎癌組織中高表達(dá),ATF2的表達(dá)與腎癌患者腫瘤的大小,有無癌栓,有無轉(zhuǎn)移相關(guān)。高表達(dá)ATF2腎癌患者的總體生存期和無進(jìn)展生存期明顯較短。[結(jié)論]慢病毒敲減ATF2使其在mRNA和蛋白水平表達(dá)明顯受到抑制,ATF2通過調(diào)控Cyclin B1,Cyclin D1,Snail,Vimentin和E-cadherin基因的表達(dá)影響腎癌細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移。結(jié)合臨床資料分析ATF2可能作為判斷患者預(yù)后的生物學(xué)指標(biāo)。
【關(guān)鍵詞】：ATF2 腎細(xì)胞癌 基因敲減 增殖 轉(zhuǎn)移 預(yù)后
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.11
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 英文縮略詞表10-11
• 前言11-14
• 參考文獻(xiàn)12-14
• 第一部分 驗(yàn)證ATF2在腎癌中轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)和慢病毒載體介導(dǎo)的ATF2 shRNA的構(gòu)建及驗(yàn)證14-35
• 一、材料14-16
• 二、實(shí)驗(yàn)方法16-27
• 三、結(jié)果27-32
• 四、討論32-33
• 五、結(jié)論33-34
• 參考文獻(xiàn)34-35
• 第二部分 體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證ATF2基因敲減后對(duì)人腎癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響35-61
• 一、材料35-36
• 二、方法36-42
• 三、結(jié)果42-57
• 四、討論57-58
• 五、結(jié)論58-59
• 參考文獻(xiàn)59-61
• 第三部分 ATF2基因在腎癌組織的表達(dá)及與臨床預(yù)后的相關(guān)性分析61-73
• 一、實(shí)驗(yàn)材料61-62
• 二、方法62-63
• 三、結(jié)果63-71
• 四、討論71
• 五、結(jié)論71-72
• 參考文獻(xiàn)72-73
• 文獻(xiàn)綜述73-84
• 參考文獻(xiàn)79-84
• 在讀期發(fā)表論文和參加科研工作情況說明84-85
• 致謝85

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本文編號(hào)：635502