FoxM1基因在人類Burkitt淋巴瘤細(xì)胞株Raji中的功能研究
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更多相關(guān)文章: FoxM1 Burkitt淋巴瘤 Raji Thiostrepton(TST) TST 多柔比星 FoxM1 藥物敏感性
【摘要】:目的:FoxM1屬于Forkhead Box轉(zhuǎn)錄因子家族,參與調(diào)節(jié)正常細(xì)胞增殖和凋亡等多種重要病理生理過程,其在多種實(shí)體腫瘤存在異常高表達(dá)。近年來FoxM1在血液系統(tǒng)腫瘤中的作用被日漸關(guān)注,本文旨在研究FoxM1基因在人類Burkitt淋巴瘤細(xì)胞株Raji中的表達(dá)水平,探索其在B細(xì)胞淋巴瘤(B-NHL)疾病增殖和凋亡中的作用。方法:采用實(shí)時(shí)定量PCR (qRT-PCR)方法檢測(cè)正常人外周血CD19+的B淋巴細(xì)胞(正常對(duì)照,NC)和Raji細(xì)胞的mRNA水平,蛋白質(zhì)印記法(Western-blot)檢測(cè)蛋白水平的表達(dá)。硫鏈絲菌素(TST)是FoxM1的特異性抑制劑,是一種具有抗生素性質(zhì)的天然產(chǎn)物,用TST處理Raji細(xì)胞后,通過細(xì)胞增殖-毒性檢測(cè)試劑盒(CCK-8)進(jìn)行加入不同藥物濃度TST后的細(xì)胞活性抑制率檢測(cè),24及36 h后加入CCK8 20 μl,測(cè)得各孔OD值,計(jì)算出TST對(duì)Raji細(xì)胞24 h及36h的半抑制濃度(IC50);再用此濃度處理Raji細(xì)胞后,采用流式細(xì)胞術(shù)(FCM) Annexin/PI雙染法檢測(cè)用TST處理及未處理NC的凋亡率,同時(shí)在mRNA及蛋白水平驗(yàn)證FoxM1的表達(dá)變化。結(jié)果:FoxM1在mRNA和蛋白水平的表達(dá)都顯著高于正常對(duì)照(p0.05和p0.001),使用特異性抑制劑TST后明顯抑制Raji細(xì)胞增殖并且凋亡率顯著增加,進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)TST對(duì)Raji的作用呈劑量及時(shí)間依賴性,隨著劑量及時(shí)間的增加凋亡率呈現(xiàn)上升趨勢(shì),測(cè)得24 h的半抑制濃度為5.39 pmol/L,同時(shí)在mRNA及蛋白水平檢測(cè)FoxM1具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,即FoxM1顯著下調(diào)(p0.001和p0.05)。結(jié)論:FoxM1在人類Burkitt淋巴瘤細(xì)胞株Raji中呈現(xiàn)mRNA和蛋白水平高表達(dá),特異性抑制FoxM1表達(dá)可以抑制Raji增殖并促進(jìn)凋亡,表明FoxM1在Raji細(xì)胞增殖和凋亡中發(fā)揮重要作用。目的:研究FoxMl特異性抑制劑thiostrepton (TST)在增加Raji細(xì)胞株對(duì)多柔比星藥物敏感性中的作用。方法:利用CCK8和流式細(xì)胞術(shù)分別檢測(cè)TST和多柔比星對(duì)于Raji細(xì)胞株增殖和凋亡的影響,摸索兩種藥物作用的濃度梯度,進(jìn)一步利用兩者低濃度聯(lián)合處理Raji細(xì)胞株,觀察是否存在協(xié)同效應(yīng)。結(jié)果:經(jīng)過分析發(fā)現(xiàn)TST和多柔比星對(duì)于Raji細(xì)胞株增殖和凋亡的影響都呈現(xiàn)時(shí)間和劑量依賴性。TST對(duì)Raji細(xì)胞作用的IC50為5.39μmol/L,當(dāng)濃度為3μmol/L時(shí)細(xì)胞抑制率及凋亡率降低,Raji細(xì)胞平均凋亡率為10.82%;單用多柔比星0.08 μmol/L和0.03 μmol/L作用Raji細(xì)胞24 h后凋亡率分別為23.52%和9.32%,故認(rèn)為低濃度的TST (3 μmol/L)和多柔比星(0.03 μmol/L)細(xì)胞毒性較弱;首先聯(lián)用3 μmol/L的TST后多柔比星的IC50值從0.08 μmol/L降至0.04μmol/L;進(jìn)一步聯(lián)合低濃度TST和多柔比星作用Raji細(xì)胞株24 h后的平均凋亡率為21.41%,凋亡率較兩者單藥顯著增加(p0.05)。結(jié)論:FoxM1特異性抑制劑TST和多柔比星均可以抑制Raji細(xì)胞增殖和促進(jìn)凋亡,并且呈現(xiàn)時(shí)間和劑量依賴性,兩者在較低濃度聯(lián)合使用可以產(chǎn)生協(xié)同效應(yīng),顯著提高Raji細(xì)胞株對(duì)多柔比星的敏感性,促進(jìn)細(xì)胞凋亡。
【關(guān)鍵詞】:FoxM1 Burkitt淋巴瘤 Raji Thiostrepton(TST) TST 多柔比星 FoxM1 藥物敏感性
【學(xué)位授予單位】:南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2016
【分類號(hào)】:R733
【目錄】:
- 第一部分 FoxM1基因?qū)aji細(xì)胞株增殖和凋亡的作用5-37
- 中文摘要5-7
- Abstract7-9
- 前言9-13
- 材料與方法13-24
- 結(jié)果24-30
- 分析與討論30-33
- 參考文獻(xiàn)33-37
- 第二部分 FoxM1在Raji細(xì)胞株藥物增敏中的作用研究37-53
- 中文摘要37-38
- Abstract38-40
- 前言40-42
- 材料與方法42-44
- 結(jié)果44-48
- 分析與討論48-51
- 參考文獻(xiàn)51-53
- 綜述53-64
- 參考文獻(xiàn)60-64
- 附錄64-66
- 致謝66
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,本文編號(hào):629203
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