本文關(guān)鍵詞：雷帕霉素對(duì)食管癌細(xì)胞TE13凋亡的影響及相關(guān)機(jī)制

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【摘要】：食管癌是一種常見的消化道惡性腫瘤,鱗狀細(xì)胞癌是它最常見的組織學(xué)類型,我們國(guó)家是食管癌高發(fā)地國(guó)家。盡管臨床上一直在改進(jìn)食管癌的治療手段與方法,但它的死亡率依然很高。通過多年對(duì)食管癌的研究,我們得知,它的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)非常復(fù)雜的過程,這個(gè)過程有多基因的參與、多基因的作用,其中包括信號(hào)通路的異�；罨Ｋ�,食管癌治療的關(guān)鍵仍然是研究抗癌藥物及與其相關(guān)的信號(hào)通路。國(guó)內(nèi)外多項(xiàng)研究證明,在多種腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中,AKT/mTOR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路存在異常的激活。mTOR信號(hào)通路與細(xì)胞的生存、生長(zhǎng)和增殖有關(guān),還參與細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)合成的調(diào)節(jié)過程。mTOR是由2549個(gè)氨基酸組成的,它是一種絲氨酸/蘇氨酸激酶,它參加了很多細(xì)胞的重要功能的調(diào)節(jié)。P70S6K和4EBP1是mTOR下游兩個(gè)重要的效應(yīng)分子,是mTOR通路功能的主要執(zhí)行者。該信號(hào)通路的活化通常表現(xiàn)出P70S6K和4EBP1的磷酸化。如果抑制mTOR通路,P70S6K和4EBP1的磷酸化過程受阻,進(jìn)而抑制蛋白質(zhì)的翻譯過程,細(xì)胞周期就會(huì)停滯,最終誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。雷帕霉素(Rapamycin)屬于大環(huán)內(nèi)酯類藥物,是mTOR的特異性抑制劑,具有杰出的抗腫瘤效果。研究表明,它對(duì)前列腺癌、乳腺癌及胰腺癌等惡性腫瘤均有一定療效。但雷帕霉素是否對(duì)食管鱗狀細(xì)胞癌的生長(zhǎng)增殖有抑制作用及誘導(dǎo)凋亡的確切機(jī)制仍不清楚。本實(shí)驗(yàn)以食管鱗狀細(xì)胞癌TE13細(xì)胞為模型,觀察雷帕霉素對(duì)mTOR通路及細(xì)胞凋亡的影響,探討食管癌的發(fā)生、發(fā)展機(jī)制,從而為我們臨床對(duì)食管癌的治療提高幫助。目的:探討雷帕霉素對(duì)食管癌細(xì)胞TE13凋亡的影響及相關(guān)機(jī)制。方法:1用MTT方法檢測(cè)不同濃度的雷帕霉素對(duì)TE13細(xì)胞增殖的影響。2用Western Blot方法分別檢測(cè)不同濃度的雷帕霉素作用于TE13細(xì)胞后細(xì)胞內(nèi)p-P70S6K、p-4EBP1蛋白的變化。3用Western Blot方法分別檢測(cè)100nmol/l雷帕霉素作用于TE13細(xì)胞2h、6h、12h、24h、36h、48h后細(xì)胞內(nèi)cIAP-1和BAD的蛋白表達(dá)。4采用流式細(xì)胞儀通過PI染色法檢測(cè)不同濃度的雷帕霉素作用于TE13細(xì)胞后細(xì)胞的解析周期和細(xì)胞的凋亡率。5用TUNEL標(biāo)記方法檢查測(cè)量細(xì)胞凋亡的指數(shù)。6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法處理。結(jié)果:1 MTT檢測(cè)結(jié)果應(yīng)用雷帕霉素作用于TE13細(xì)胞24h后,20、40、80、160、320、640nmol/L雷帕霉素對(duì)TE13細(xì)胞的抑制率分別為7.513±0.162%、14.004±0.714% 、16.089±1.650%、22.235±0.459% 、40.134±0.501%、52.423±0.673%,各個(gè)對(duì)照組明顯高于對(duì)照組,差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。提示雷帕霉素對(duì)TE13細(xì)胞生長(zhǎng)有抑制作用,并具有濃度依賴性。2 Western Blot檢測(cè)20、40、80、160 nmol/l雷帕霉素作用于TE13細(xì)胞24h后細(xì)胞內(nèi)p-P70S6K、p-4EBP1蛋白表達(dá)變化。(1)隨著藥物濃度的升高,p-P70S6K蛋白的表達(dá)水平逐漸降低(0.714±0.045,0.606±0.023,0.552±0.020,0.332±0.022,P0.05),差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的意義。(2)隨著藥物濃度的升高,p-4EBP1蛋白的表達(dá)水平逐漸降低(0.952±0.085,0.866±0.068,0.692±0.059,0.462±0.019,P0.05),差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的意義。3 Western Blot檢測(cè)100 nmol/l雷帕霉素作用于TE13細(xì)胞后2小時(shí)、6小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)、36小時(shí)、48小時(shí)細(xì)胞內(nèi)BAD和cIAP-1的蛋白表達(dá)的變化。(1)BAD蛋白表達(dá)的水平順次升高(0.465±0.024,0.596±0.042,0.655±0.023,0.883±0.019,0.958±0.015,1.157±0.013,P0.05),差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的意義。(2)cIAP-1蛋白表達(dá)的水平順次降低(0.842±0.013,0.717±0.017,0.645±0.021,0.514±0.014,0.469±0.026,0.218±0.018,P0.05),差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的意義。4流式細(xì)胞儀結(jié)果顯示:分別用0、20、40、60、80、160 nmol/l濃度的雷帕霉素作用于TE13細(xì)胞24h后,細(xì)胞凋亡率逐漸升高(4.12±0.327%,5.67±0.206%,8.46±0.198%,10.97±0.440%,18.42±0.551%,23.60±0.754%,P0.05);細(xì)胞周期中出現(xiàn)G0/G1期的阻滯,G0/G1期細(xì)胞百分比由9.8±1.819%增加至61.5±2.394%,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。5 TUNEL標(biāo)記法顯示:正常細(xì)胞的細(xì)胞核不著色,而凋亡細(xì)胞的細(xì)胞核染色呈現(xiàn)棕黃色。0 nmol/l、40 nmol/l、80 nmol/l、160 nmol/l雷帕霉素處置TE13細(xì)胞24h,凋亡指數(shù)隨用藥濃度增加逐漸升高(5.67±1.435%,7.97±1.433%,35.79±2.886%,51.89±2.778%,P0.05),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:1雷帕霉素可以抑制食管癌TE13細(xì)胞的生長(zhǎng),并以劑量依賴性方式誘導(dǎo)TE13細(xì)胞凋亡,雷帕霉素以時(shí)間依賴地誘導(dǎo)cIAP-1低表達(dá)和BAD蛋白高表達(dá)。2雷帕霉素通過抑制mTOR的下游底物P70S6K和4EBP1的活化誘TE13細(xì)胞凋亡,進(jìn)而抑制食管癌細(xì)胞TE13的生長(zhǎng)。
【關(guān)鍵詞】：食管癌 TE13細(xì)胞株 雷帕霉素 mTOR通路 P70S6K 4EBP1 Western Blot 凋亡
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.1
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 英文縮寫11-12
• 前言12-14
• 材料與方法14-23
• 結(jié)果23-25
• 附圖25-30
• 附表30-33
• 討論33-36
• 結(jié)論36-37
• 參考文獻(xiàn)37-40
• 綜述 雷帕霉素及其衍生物的研究進(jìn)展40-49
• 參考文獻(xiàn)45-49
• 致謝49-50
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷50

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中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 沈忠英,沈健,陳銘華,蔡維佳,陳彩云;氧化砷誘導(dǎo)食管癌細(xì)胞系細(xì)胞凋亡的研究(英文)[J];汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2001年01期

2 王柏春,閻承慧,李野,王巨,禹亮,王勝發(fā),傅松濱;轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1抑制食管癌細(xì)胞的生長(zhǎng)[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2004年05期

3 謝仰民;謝劍君;周飛;侯健;曹君君;許麗艷;李恩民;;激活轉(zhuǎn)錄因子3的過表達(dá)對(duì)食管癌細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用[J];癌變.畸變.突變;2009年04期

4 任建華;李瑞明;李超;熊奎;駱志國(guó);;放射抗拒食管癌細(xì)胞系的建立及抗拒機(jī)制研究[J];中國(guó)腫瘤;2009年11期

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