本文關(guān)鍵詞：GPC5對人肺腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響

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【摘要】：目的肺癌是最常見的惡性腫瘤之一,一項多中心的全基因組關(guān)聯(lián)研究(GWAS)發(fā)現(xiàn)位于13q31.3位點的磷脂酰肌醇蛋白聚糖5(glypican-5,GPC5)可能增加患肺腺癌的風(fēng)險。目前在哺乳類基因組中共發(fā)現(xiàn)GPC1到GPC6的6個磷脂酰肌醇蛋白聚糖成員,均歸屬于磷脂酰肌醇蛋白聚糖(heparan sulphate proteoglycans,HSPGs)大類,HSPGs主要通過糖基-磷脂酰肌醇錨錨定在細(xì)胞膜的表面,從而在細(xì)胞生長及分化中扮演重要角色。對于GPC5基因的研究發(fā)現(xiàn),GPC5基因的高表達或低表達與人體多部位、多種類型的腫瘤的發(fā)生發(fā)展相關(guān),例如淋巴瘤、橫紋肌肉瘤及結(jié)腸癌等。但關(guān)于GPC5如何在肺腺癌中發(fā)揮作用及其在細(xì)胞水平對肺腺癌細(xì)胞生物學(xué)活動的影響如何,當(dāng)前尚存在爭議。本課題構(gòu)建GPC5相關(guān)的肺腺癌細(xì)胞模型,全面研究GPC5對肺腺癌細(xì)胞生物學(xué)活動的促進或抑制作用,從而為進一步探索GPC5在肺腺癌中的功能定義及分子機制探索提供理論依據(jù)。方法1.采用逆轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)、實時定量RT-PCR(qRT-PCR)分析肺腺癌細(xì)胞系中GPC5基因mRNA表達情況;同時,采用Western blot(WB)的方法驗證肺腺癌細(xì)胞系中GPC5基因在蛋白水平的不同表達情況。2.利用真核載體構(gòu)建GPC5過表達載體及干擾載體,并通過脂質(zhì)體法將GPC5過表達載體及干擾載體轉(zhuǎn)入細(xì)胞,構(gòu)建GPC5過表達及GPC5沉默細(xì)胞模型。3.利用CCK-8法觀察GPC5過表達及沉默對細(xì)胞生長情況的影響。4.通過流式細(xì)胞熒光分析的方法,探究GPC5過表達及沉默對細(xì)胞周期及凋亡的相關(guān)影響。5.通過Transwell小室系統(tǒng)觀察肺腺癌細(xì)胞的侵襲及遷移活動,探究GPC5過表達及沉默對細(xì)胞遷移能力和侵襲能力的相關(guān)影響。結(jié)果1.檢測GPC5基因在4株人肺腺癌細(xì)胞系(A549、H1299、H358和H1975)和正常肺組織中的mRNA表達情況,發(fā)現(xiàn)與正常肺組織相比,GPC5基因的表達量在這4株人肺腺癌細(xì)胞系中均較低;僅對基因表達的細(xì)胞系之間的比較分析,發(fā)現(xiàn)在A549細(xì)胞中GPC5基因低表達,在H1299細(xì)胞中則高表達;對蛋白表達的檢測分析與mRNA水平一致。2.通過前期mRNA及蛋白表達檢測,選取A549細(xì)胞完成GPC5過表達細(xì)胞系模型的建立及鑒定工作,選取H1299細(xì)胞完成GPC5沉默細(xì)胞系模型的建立及鑒定工作。3.與陰性對照組比較分析,GPC5過表達細(xì)胞系生長受到抑制,轉(zhuǎn)染后第三天抑制作用最強,對照組細(xì)胞生長曲線OD值為2.21±0.09,過表達組OD值為1.51±0.07;GPC5沉默細(xì)胞系細(xì)胞生長得到促進,轉(zhuǎn)染后第四天促進效果最明顯,對照組細(xì)胞生長曲線OD值為1.81±0.07,干擾組OD值為2.51±0.05,兩組的差異比較均具有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。4.GPC5基因過表達引起A549細(xì)胞G1期增加,G2、S期降低,與對照組相比G1期和S期變化差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05);GPC5基因沉默引起H1299細(xì)胞G1、G2期下降,S期增高,與對照組G1期和S期比率變化差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。5.與陰性對照相比,GPC5基因過表達細(xì)胞總凋亡率由10.03%降到8.99%,但差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義,同樣在GPC5沉默細(xì)胞系H1299中也未觀察到細(xì)胞總凋亡率之間的差異。6.GPC5過表達實驗組遷移到膜下側(cè)的細(xì)胞數(shù)明顯減少,穿膜細(xì)胞數(shù)為(28.2±2.5),陰性對照組則為(59.6±1.81)。同時對于GPC5沉默實驗組,GPC5沉默實驗組穿膜細(xì)胞數(shù)呈現(xiàn)增加的趨勢,沉默組細(xì)胞的穿膜細(xì)胞數(shù)為(14±2),陰性對照組則為(2.33±0.58),與陰性對照組相比,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。7.GPC5過表達實驗組穿過基質(zhì)膠后進入膜下側(cè)的細(xì)胞數(shù)明顯減少,過表達實驗組穿膜細(xì)胞數(shù)(9.2±0.7),陰性對照組(20.3±2)。同時對于GPC5沉默實驗組,GPC5沉默組的穿膜細(xì)胞數(shù)呈現(xiàn)增加的趨勢,沉默組(20±2),陰性對照組(3.67±0.58),兩組之間進行比較,P值小于0.05,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義結(jié)論GPC5可以抑制人肺腺癌細(xì)胞的生長和細(xì)胞周期、細(xì)胞遷移及侵襲活動,提示GPC5可能為抑癌基因,可能在肺腺癌的發(fā)生及發(fā)展中發(fā)揮作用。
【關(guān)鍵詞】：GPC5 肺腺癌 增殖 周期 凋亡 侵襲和遷移
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R734.2
【目錄】：

• 縮略語表4-6
• 英文摘要6-9
• 中文摘要9-11
• 第一章 前言11-13
• 第二章 GPC5基因在肺腺癌細(xì)胞中的表達分析13-29
• 2.1 實驗材料13-16
• 2.2 研究對象16
• 2.3 研究方法16-23
• 2.4 結(jié)果23-27
• 2.5 討論27-29
• 第三章 GPC5對肺腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響29-54
• 3.1 實驗材料29-31
• 3.2 研究對象31
• 3.3 實驗方法31-39
• 3.4 實驗結(jié)果39-51
• 3.5 討論51-54
• 全文結(jié)論54-55
• 參考文獻55-59
• 文獻綜述GPC5基因以及其在肺癌中的上下游分子調(diào)控機制59-71
• 參考文獻66-71
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文71-72
• 致謝72

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 饒文;余祖濱;向穎;吳龍;鄔娜;吳亞楠;白莉;李亞斐;;GPC5基因在肺腺癌組織中差異表達和突變分析[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2014年11期

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本文編號：620323