本文關(guān)鍵詞：調(diào)控Klotho與IGF1R信號對正常肝細(xì)胞與肝癌細(xì)胞生存期的影晌

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【摘要】：研究背景：肝癌是最常見的惡性腫瘤之一,其死亡率位居腫瘤相關(guān)死亡中第三位,而我國每年因肝癌死亡人數(shù)占世界的半數(shù)以上。雖然近年來我國在肝癌的早期診斷、手術(shù)治療及肝臟移植方面取得了舉世矚目的成就,但依然存在復(fù)發(fā)率高,5年生存率低等諸多問題。所以進(jìn)一步深入研究肝癌發(fā)生的病理機(jī)制,尋找有效的治療途徑依然是當(dāng)務(wù)之急。Klotho基因是Kuro-o等人于1997年發(fā)現(xiàn)的與人類衰老密切相關(guān)的基因。發(fā)生這一基因缺陷表達(dá)的小鼠表現(xiàn)為生命期短,并有明顯的與人類衰老相關(guān)的一系列表現(xiàn)。近年來有不少研究發(fā)現(xiàn)klotho在一些惡性腫瘤中起著抑制腫瘤增長的作用,其中就包括肝癌。已有報(bào)道顯示,過表達(dá)klotho能夠抑制癌細(xì)胞的增殖、遷移,誘導(dǎo)其凋亡及自噬,而其發(fā)生機(jī)制可能與IGF-1受體磷酸化和其下游信號通路ERK和AKT信號的活化有關(guān)。但尚未見有研究顯示klotho在正常肝細(xì)胞中的作用。在這里,我們通過構(gòu)建siRNA干擾klotho在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá),進(jìn)而研究它對正常肝細(xì)胞及肝癌細(xì)胞的生存期、肝癌相關(guān)基因表達(dá)的影響,探索klotho、 IGFIR信號通路在調(diào)控細(xì)胞生存與衰老及腫瘤發(fā)生中的作用及其機(jī)制。研究目的：1.構(gòu)建klotho特異的小干擾RNA (siRNA)及無關(guān)序列對照siRNA2.用siRNA轉(zhuǎn)染正常人肝細(xì)胞系L02及人肝癌細(xì)胞系HepG2細(xì)胞,檢測細(xì)胞增殖、肝癌相關(guān)基因表達(dá)及IGF1R信號通路中相關(guān)分子的表達(dá)與磷酸化水平的改變。從而闡述klotho在調(diào)控正常細(xì)胞與癌細(xì)胞生存及腫瘤發(fā)生中的作用及機(jī)制。研究方法:在這一研究中,我們構(gòu)建了klotho特異的siRNA于體外干擾klotho的表達(dá),并用其轉(zhuǎn)染正常人肝細(xì)胞系L02細(xì)胞和人肝癌細(xì)胞系HepG2細(xì)胞。用細(xì)胞增殖CCK-8試驗(yàn)來檢測細(xì)胞的增殖能力；用qPCR試驗(yàn)來檢測肝癌相關(guān)基因的表達(dá)；用Western blot試驗(yàn)來檢測siRNA的干擾效果及細(xì)胞中IGF1R信號通路相關(guān)分子的表達(dá)和磷酸化水平。研究結(jié)果：結(jié)果顯示,klotho在肝癌細(xì)胞中的表達(dá)明顯低于正常肝細(xì)胞,而IGF-1受體的磷酸化水平則相反。干擾klotho在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)后,癌細(xì)胞的增殖水平有明顯升高,而正常肝細(xì)胞的增殖水平下降。qPCR結(jié)果顯示干擾klotho的表達(dá)后,正常肝細(xì)胞中肝癌相關(guān)基因的表達(dá)有明顯的上升趨勢。Western blot結(jié)果顯示,在肝癌細(xì)胞中IGF1R信號通路相關(guān)分子如IGF1R、AKT、ERK的磷酸化水平與klotho的表達(dá)呈反向相關(guān),而在正常肝細(xì)胞中卻成正相關(guān)。結(jié)論：Klotho能夠促進(jìn)正常肝細(xì)胞的增殖,抑制癌細(xì)胞的增殖。Klotho基因缺陷會導(dǎo)致正常肝細(xì)胞內(nèi)肝癌相關(guān)基因的表達(dá)增加。Klotho的作用可能是通過調(diào)控IGF1R信號通路及其下游AKT和ERK信號實(shí)現(xiàn)的。
【關(guān)鍵詞】：Klotho IGF1R信號通路 正常人肝細(xì)胞 人肝癌細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-11
• 符號說明11-14
• 前言14-21
• 材料與方法21-33
• 結(jié)果33-35
• 討論35-40
• 結(jié)論40-41
• 附表41-42
• 附圖42-50
• 參考文獻(xiàn)50-57
• 致謝57-58
• 攻讀碩士期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文58-59
• 附件59

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本文編號：617781