本文關(guān)鍵詞：YAP與P-YAP在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)與其臨床生物學(xué)行為關(guān)系的研究

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【摘要】：目的:肝細(xì)胞癌(HCC,hepatocellular carcinoma)是肝臟原發(fā)腫瘤中最常見的類型,也是我國乃至全世界.最常見的惡性腫瘤疾病之一。通常HCC被發(fā)現(xiàn)時(shí)患者已進(jìn)入晚期,常規(guī)化療對其作用不明顯,致使生存率較其它癌癥顯著降低。因此,加強(qiáng)對HCC的發(fā)病機(jī)制研究,尋找更多關(guān)于肝癌基因及抑癌基因的表達(dá)并明確其與HCC的關(guān)系已成為當(dāng)前研究的重要方向。Hippo通路在促進(jìn)細(xì)胞凋亡,限制細(xì)胞增殖,調(diào)控器官分化方面起著重要的作用。YAP(Yes-associated protein)即Yes相關(guān)蛋白,作為該通路下游的效應(yīng)因子,多以磷酸化形式(P-YAP)參與細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)以調(diào)控細(xì)胞凋亡與增殖的平衡。在病理狀態(tài)下,被阻斷或失活的Hippo通路對YAP磷酸化作用失效致YAP自身活性增強(qiáng)使細(xì)胞增生和凋亡間平衡失調(diào)、組織器官過度生長及腫瘤發(fā)生。國內(nèi)外相關(guān)研究表明,YAP作為新近發(fā)現(xiàn)的癌基因,參與胃癌、結(jié)腸癌、肺癌等多種腫瘤的形成和發(fā)展。但YAP、P-YAP在肝細(xì)胞肝癌組織中的表達(dá)情況及意義報(bào)道還不多見。本課題以原發(fā)肝細(xì)胞肝癌患者為研究對象,應(yīng)用常規(guī)病理免疫組化技術(shù)、蛋白印跡(Western blot)技術(shù)檢測YAP,P-YAP在肝細(xì)胞癌組織、癌旁肝硬化組織及正常肝組織中的表達(dá)情況,從基礎(chǔ)與臨床相結(jié)合角度分析其表達(dá)意義,研究了YAP表達(dá)與患者年齡、腫瘤大小、AFP水平、病理分級、血管侵犯情況及TNM分期的關(guān)系,進(jìn)而推測YAP在肝細(xì)胞肝癌發(fā)生發(fā)展中的重要功能及意義,為肝癌的發(fā)生和診治提供一定依據(jù)。方法:收集唐山市工人醫(yī)院肝膽外科2012年8月至2014年7月間具有完整臨床及病理資料的78例肝細(xì)胞肝癌根治性切除術(shù)的標(biāo)本。所取標(biāo)本一式兩份,一份用中性福爾馬林固定置備石蠟切塊供HE染色和免疫組化使用,一份留取新鮮組織供Western blot備檢。HE染色,鏡下觀察三種組織標(biāo)本的病理變化;應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色SP法檢測YAP、P-YAP在三種組織中的表達(dá)情況;從冷凍組織中提取蛋白,用Western blot方法檢測各組標(biāo)本中YAP、P-YAP蛋白的表達(dá)情況;卡方檢驗(yàn)分析YAP與HCC患者年齡、腫瘤大小、病理分級、轉(zhuǎn)移情況及TNM分期的關(guān)系;Pearson相關(guān)分析對各組中YAP、P-YAP蛋白的表達(dá)關(guān)系進(jìn)行相關(guān)分析。結(jié)果:1 HE染色正常肝組織內(nèi)肝小葉結(jié)構(gòu)清晰,肝細(xì)胞排列緊密有序呈索狀,可見中央靜脈及多處毛細(xì)血管竇;肝硬化組織中肝小葉正常結(jié)構(gòu)被破壞,肝細(xì)胞排列紊亂且體積增大,細(xì)胞核大且深染,纖維組織增多,可見較多炎性細(xì)胞;肝癌組織失去正常肝小葉結(jié)構(gòu),癌細(xì)胞體積增大,異形性明顯,大小形態(tài)極不一致,胞核明顯變大、嗜堿性增強(qiáng),可見多核及異型核,毛細(xì)血管竇擴(kuò)張。2免疫組織化學(xué)法染色結(jié)果顯示正常肝組織的細(xì)胞質(zhì)中P-YAP表達(dá)強(qiáng)陽性,肝硬化組織胞質(zhì)內(nèi)弱陽性表達(dá),而肝癌組織中幾乎無表達(dá);而與P-YAP相反,YAP在肝癌組織的細(xì)胞核及胞漿中呈深棕黃色的強(qiáng)陽性表達(dá),在肝硬化組織胞核及胞漿中棕黃色陽性表達(dá),正常肝組織內(nèi)無細(xì)胞核表達(dá)。3 Western blot法檢測結(jié)果顯示正常肝組織內(nèi)P-YAP蛋白的表達(dá)明顯高于肝癌組織,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;而伴隨著正常組織到肝癌的演變,YAP蛋白表達(dá)依次升高,在肝癌組織中的表達(dá)顯著高于肝硬化和正常肝組織,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4癌組織內(nèi)YAP的表達(dá)與AFP水平、病理分級、血管侵犯情況及TNM分期相關(guān),與患者年齡及腫瘤大小無明顯相關(guān)性。5 P-YAP蛋白表達(dá)量隨YAP蛋白表達(dá)量的增高而下降,兩者呈負(fù)相關(guān)。結(jié)論:1 YAP在HCC患者中強(qiáng)陽性表達(dá),且與AFP水平、病理分級、血管侵犯情況及TNM分期相關(guān),與患者年齡及腫瘤大小無明顯相關(guān)性,提示其可能在肝細(xì)胞癌的發(fā)生、發(fā)展起重要的作用;2肝硬化組織和肝癌組織中P-YAP蛋白表達(dá)量隨YAP蛋白表達(dá)量的增高而下降,兩者呈負(fù)相關(guān)。3 P-YAP在正常肝細(xì)胞胞漿內(nèi)表達(dá),去磷酸化后YAP在HCC患者胞核內(nèi)表達(dá),可能提示了病理狀態(tài)下,YAP磷酸化失效,致使去磷酸化的YAP由細(xì)胞漿進(jìn)入細(xì)胞核中且轉(zhuǎn)錄活性表達(dá)增強(qiáng),發(fā)揮自身癌基因作用促進(jìn)了HCC的發(fā)生。
【關(guān)鍵詞】：肝細(xì)胞癌 肝硬化 正常肝組織 Yes相關(guān)蛋白 磷酸化Yes相關(guān)蛋白
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 英文縮寫10-11
• 前言11-12
• 材料與方法12-21
• 結(jié)果21-24
• 附圖24-30
• 附表30-33
• 討論33-36
• 結(jié)論36-37
• 參考文獻(xiàn)37-40
• 綜述YAP與惡性腫瘤的研究現(xiàn)狀與進(jìn)展40-49
• 參考文獻(xiàn)45-49
• 致謝49-51
• 個(gè)人簡歷51-52

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：617105