本文關鍵詞：下調miRNA146a抑制膠質瘤微環(huán)境內M2型巨噬細胞分泌IL-6的研究

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【摘要】：目的:腫瘤微環(huán)境是目前研究的熱點,其中腫瘤免疫炎性微環(huán)境在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用。在膠質瘤中也是如此,膠質瘤免疫炎性微環(huán)境中的主要細胞是發(fā)揮固有免疫功能的巨噬細胞,除了傳統(tǒng)的腫瘤抑制型M1型巨噬細胞,還有具有促進膠質瘤生長的M2型巨噬細胞。研究發(fā)現(xiàn)miRNA146a在M2型巨噬細胞明顯高表達,而M2型巨噬細胞可分泌IL-6,IL-6不僅可以直接促進膠質瘤細胞的生長,也可刺激M1型巨噬細胞轉變?yōu)镸2型巨噬細胞從而間接達到促腫瘤生長效果。目前對于M2型巨噬細胞中miRNA146a與IL-6的關系鮮有報道。本實驗擬建立M2型巨噬細胞模型,通過慢病毒轉染下調M2型巨噬細胞中miRNA146a的表達,測定M2型巨噬細胞慢病毒干擾前后IL-6分泌的變化,以闡明miRNA146a在M2型巨噬細胞分泌IL-6中的作用。方法:正常培養(yǎng)小鼠巨噬細胞系RAW264.7細胞后,使用IL-4刺激RAW264.7,免疫組化檢測刺激后的細胞的M2型巨噬細胞特性標記物CD206表達,以確定刺激后的細胞為M2型細胞。將M2型巨噬細胞分為三組,轉染抑制性載體的實驗組(PC)、轉染空載體的陰性對照組(NC)與只加入完全培養(yǎng)基的空白對照組。對轉染后的三組細胞行Real-time PCR檢測miRNA146a的變化及IL-6表達的變化,GraphPad Prism5軟件對實驗數(shù)據進行統(tǒng)計學處理,所有數(shù)據以means±SD表示,進行t檢驗及其他相關統(tǒng)計學分析,P0.05具有統(tǒng)計學意義。結果:RAW264.7在IL-4刺激后,細胞表達CD206,極化為M2型巨噬細胞。使用慢病毒轉染,轉染抑制載體的PC組及轉染空載體的NC組在熒光顯微鏡下均表達紅色熒光示病毒已轉染。Real-Time PCR結果表明轉染抑制性載體病毒后M2型巨噬細胞中miRNA146a相對于NC組和空白對照組明顯下降(P0.05)),NC組與空白對照組對比無明顯變化(P0.05)。Real-Time PCR檢測IL-6分泌情況,結果表明轉染抑制性載體病毒后M2型巨噬細胞中IL-6mRNA相對于NC組和空白對照組明顯下降(P0.05)。結果提示miRNA146a在M2型巨噬細胞中的下調可減少IL-6 mRNA的表達。結論:抑制miRNA146a在M2型巨噬細胞中的表達,可有效減少M2型巨噬細胞中IL-6mRNA的表達,理論上可有效抑制膠質瘤細胞生長,并可減少M1型巨噬細胞向M2型巨噬細胞的極化,為膠質瘤的微環(huán)境中提供有效的免疫細胞。
【關鍵詞】：腦膠質瘤 miRNA146a M2型巨噬細胞 白細胞介素-6
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R739.41
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 序言9-11
• 材料與方法11-21
• 結果21-25
• 討論25-27
• 總結27-28
• 參考文獻28-29
• 綜述29-44
• 參考文獻37-44
• 縮略詞表44-46
• 攻讀學位期間公開發(fā)表的論文46-47
• 致謝47-48

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本文編號：605048