發(fā)布時間：2017-07-31 12:31

  本文關(guān)鍵詞：不同鎮(zhèn)痛藥對肝癌細胞生物學行為影響及其機制的研究

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【摘要】：第一章不同鎮(zhèn)痛藥對肝癌細胞生物學行為影響目的：探討不同鎮(zhèn)痛藥(嗎啡、布洛芬、塞來昔布、氯胺酮)對肝癌細胞生物學行為影響。方法：人肝癌QGY-7703細胞培養(yǎng)至對數(shù)生長期,分別接種于培養(yǎng)板或25cm2培養(yǎng)瓶中。采用隨機數(shù)字表法,將兩種細胞分別隨機分為13組(n=6)：不同濃度布洛芬組(IB,-3組)布洛芬終濃度分別為250 umol/L、500 umol/L、 1000umo1/L;塞來昔布組(CE1-3組)：塞來昔布終濃度分別為25umol/L、 50umol/L.100umol/L;嗎啡組(M01_3組)：嗎啡組終濃度分別為0.01umol/L、 10umol/L、1000umol/L；氯胺酮組(KE1-3組)：氯胺酮終濃度分別為100umol/L、 500umol/L、1000umol/L;以及正常對照組(C組)：加入等容量的RPM-1640培養(yǎng)基。分別于孵育24、48和72h時,采用cck-8法測定各組細胞增殖抑制率。于孵育48h后,用流式細胞術(shù)檢測各組細胞凋亡率及其周期情況；采用利用Transwell小室檢測各組細胞的侵襲和遷移能力。結(jié)果：與C組比較,IB1-3組、CE1-3組、MO1-3組和KE1-3組等十二組細胞的增殖抑制率均依次升高,且依照藥物作用的濃度和時間的增加而依次升高,具有濃度和時間的依賴性,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。與C組比較,IB1_3組、CE1_3組、M01-3組和KE1_3組等十二組細胞遷移和侵襲能力均降低,且依照藥物作用的濃度的增加而依次降低,具有濃度依賴性,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。與C組比較,IB1-3組、CE1-3組、M01-3組和KE1-3組等十二組細胞凋亡率均增加,且依照藥物作用的濃度增加而依次增加,具有濃度依賴性,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。與C組比較,IB,_3組、CE1-3組和MO,-3組等九組細胞的G1期細胞百分比均升高,S期和M期細胞百分比均降低,且依照藥物作用濃度的增加而依次變化,具有濃度依賴性,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)；KE1-3組細胞的G1期和S期細胞百分比均升高,M期細胞百分比均降低,且依照藥物作用的濃度的增加而依次變化,具有濃度依賴性,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結(jié)論布洛芬、塞來昔布、嗎啡和氯胺酮均可以抑制人肝癌QGY-7703細胞的增殖,并可降低肝癌QGY-7703細胞的侵襲和遷移的能力,可能與其促進細胞的凋亡并使細胞周期發(fā)生阻滯有關(guān)。第二章 布洛芬抑制肝癌細胞生長的機制研究目的：探討PI3K/Akt/mTOR通路和IKKβ/IκBα/NF-κB通路在布洛芬抑制肝癌細胞生長中的作用。方法：取對數(shù)生長期人肝癌細胞QGY-7703,采用隨機分為兩組,對照組(C組)：加入等容量的RPM-1640培養(yǎng)基；實驗組(IB組)：按照不同布洛芬作用濃度分為三個亞組：IB1組(布洛芬作用濃度為250umol/L), IB2組(布洛芬作用濃度為500umol/L)、IB3組(布洛芬作用濃度為1000umol/L)。各組分別作用48后,采用Real-TimePCR測各組細胞中IKKβ、Bcl-2、PI3K、 PTEN和MMP-9基因表達的變化。用Western blot檢測各組細胞中PI3K/Akt/mTOR信號通路和IKKβ/IκBα/NF-κB信號通路相關(guān)蛋白的表達。結(jié)果：1. PI3K/Akt/mTOR信號通路相關(guān)因子與C組比較,IB1組、IB2組、IB3組三組細胞PTEN mRNA和PTEN蛋白表達明顯升高,且隨著布洛芬作用濃度的增加依此升高,具有濃度依賴性,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)；與C組比較,IB1組、IB2組、IB3組三組細胞PI3K mRNA、Akt蛋白和mTOR蛋白的表達量均無明顯差異(P0.05)；與C組比較,IB1組、IB2組、IB3組等三組細胞MMP-9 mRNA和MMP-9蛋白的表達以及p-Akt、p-mTOR蛋白的表達均顯著下降,且隨著布洛芬作用濃度的增加依此降低,具有良好的濃度依賴性,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。2. IKKβ/IκBα/NF-κB信號通路相關(guān)相關(guān)因子表達的結(jié)果與C組比較,IB1組、IB2組、IB3組三組細胞IKKβ mRNA和Bcl-2mRNA表達明顯下調(diào),且依照布洛芬作用濃度的增加而依次下調(diào),具有濃度依賴性,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)；與C組比較,IB1組、IB2組、IB3組三組細胞IKKβ、Bcl-2、p-IKKβ、p-IκBα和NF-κ Bp65蛋白的表達明顯下調(diào),且隨著布洛芬作用濃度的增加依此降低,具有良好的濃度依賴性,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結(jié)論：布洛芬對QGY-7703細胞生長的抑制可能與其對細胞PI3K/Akt/mTOR和IKKβ/IκBα/NF-κB信號通路的調(diào)控有關(guān)。第三章鎮(zhèn)痛藥物處理后肝癌QGY-7703細胞差異表達基因的篩選目的：探究鎮(zhèn)痛藥(塞來昔布、嗎啡和氯胺酮)抑制肝癌QGY-7703細胞生長的機制方法：取對數(shù)生長期的細胞,采用隨機數(shù)字表法,將細胞隨機分為4組(n=3):QGY-7703細胞分為：塞來昔布組(CE組)：塞來昔布作用濃度為50umol/L;嗎啡組(MO組)：嗎啡作用濃度為10 umol/L;氯胺酮組(KE組)：氯胺酮作用濃度為500umol/L;對照組(C組)加入等容量的RPM-1640培養(yǎng)基。各組培養(yǎng)48h后,采用全基因組表達譜芯片,篩查鎮(zhèn)痛藥物(塞來昔布、氯胺酮和嗎啡)處理后QGY-7703細胞差異表達基因,并進行生物信息學功能和通路分析。結(jié)果：與C組相比,在CE組細胞中有141個基因表達增加,50個基因表達下降；而在KE組中有1032個基因表達增加,899個基因表達下降；而在MO組中有766個基因表達上升,311個基因表達下降。其中KE組和CE組兩組共同調(diào)控基因有34個；KE組和MO組兩組共同調(diào)控基因195個；MO組和CE組兩組共同調(diào)控18基因個；KE組、CE組和MO組三組共同調(diào)控基因17個。生物學通路分析顯示：與C組相比,CE組差異基因主要涉及應急、細胞的負性調(diào)節(jié)、生物大分子代謝等方面,參與PPAR信號通路、MAPK信號通路、mTOR信號通路等的改變；KE組差異基因主要涉及細胞周期、RNA的代謝等方面,參與溶酶體、基因的剪接與復制相關(guān)通路和P53信號通路等通路的改變；MO組差異基因主要涉及生物代謝、轉(zhuǎn)運、RNA的代謝等方面,參與抗原的加工和提呈、自然殺傷細胞介導的細胞毒性等相關(guān)通路、MAPK信號通路等通路的改變結(jié)論：本研究成功篩選出鎮(zhèn)痛藥(塞來昔布、嗎啡和氯胺酮)處理后人肝癌QGY-7703細胞差異表達的基因,生物信息學功能和通路分析顯示鎮(zhèn)痛藥抑制QGY-7703細胞的生長涉及了不同的基因和通路,為探討鎮(zhèn)痛藥抗肝癌的作用提供了有效線索并具有一定的指導意義。
【關(guān)鍵詞】：嗎啡 塞來昔布 布洛芬 氯胺酮 肝癌細胞 增殖 凋亡 布洛芬 肝癌細胞PI3K/Akt/mTOR通路 IKKβ/IκBα/NF-κB通路
【學位授予單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R614;R735.7
【目錄】：

• 個人簡歷3-6
• 英文縮略詞表6-9
• 摘要9-15
• ABSTRACT15-21
• 前言21-27
• 參考文獻23-27
• 第一章 不同鎮(zhèn)痛藥對肝癌細胞生物學行為影響27-49
• 材料與方法27-35
• 1 材料27-29
• 2 方法29-35
• 實驗結(jié)果35-45
• 討論45-46
• 結(jié)論46-47
• 參考文獻47-49
• 第二章 布洛芬抑制肝癌QGY-7703細胞生長的機制研究49-68
• 材料與方法49-60
• 1 材料49-52
• 2 方法52-60
• 實驗結(jié)果60-63
• 討論63-65
• 結(jié)論65
• 參考文獻65-68
• 第三章 鎮(zhèn)痛藥處理后肝癌QGY-7703細胞差異表達基因的篩選68-78
• 材料與方法68-70
• 1 材料68-69
• 2 方法69-70
• 結(jié)果70-74
• 討論74-75
• 結(jié)論75-76
• 參考文獻76-78
• 綜述78-90
• 參考文獻83-90
• 致謝90-91
• 攻讀學位期間發(fā)表論文91

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中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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3 陳豫清;使用鎮(zhèn)痛藥物時護士應注意的問題[J];中原醫(yī)刊;2003年16期

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6 王文軍,張健;32例截癱病人長期服用鎮(zhèn)痛藥與不服用鎮(zhèn)痛藥的臨床分析[J];中國民康醫(yī)學;2004年08期

7 王玉梅;夏玉葉;閔e，

本文編號：599188