本文關(guān)鍵詞：Snail2和G9a在肝細(xì)胞EMT過程中的作用及機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： 肝細(xì)胞 EMT E-鈣黏蛋白 Snail2 G9a

【摘要】：肝癌是臨床上最常見的惡性腫瘤之一,居惡性腫瘤的第五位。手術(shù)切除和肝臟移植是目前臨床上治療肝癌的主要方法,但是由于肝癌細(xì)胞極易侵襲包膜和血管,導(dǎo)致肝內(nèi)和肝外轉(zhuǎn)移,使得患者的五年生存期仍低于10%。尸檢發(fā)現(xiàn),肝癌患者肝外轉(zhuǎn)移率達(dá)到40%-71.6%,是導(dǎo)致患者死亡的主要原因。因此闡明惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移機(jī)制對于提高肝癌患者的生存期無疑具有極其重要的意義。腫瘤轉(zhuǎn)移是一個(gè)極其復(fù)雜的病理學(xué)過程,腫瘤細(xì)胞的侵襲是腫瘤轉(zhuǎn)移的前提,而上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)是惡性腫瘤細(xì)胞獲得侵襲和遷移能力的關(guān)鍵,因此闡明調(diào)控EMT過程的分子機(jī)制已成為腫瘤轉(zhuǎn)移機(jī)制研究的關(guān)鍵。上皮細(xì)胞表面標(biāo)志蛋白E-鈣黏蛋白(E-cadherin)表達(dá)下調(diào)是EMT過程的標(biāo)志事件,同時(shí)伴隨著N-鈣粘蛋白(N-cadherin)、纖連蛋白(Fibronectin)和波形蛋白(Vimentin)等特定間質(zhì)細(xì)胞表面標(biāo)志蛋白的高表達(dá)。特定轉(zhuǎn)錄因子可以通過下調(diào)E-鈣粘蛋白的表達(dá)誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的EMT過程,從而促進(jìn)腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移。Snail是肝癌侵襲轉(zhuǎn)移過程中誘導(dǎo)EMT過程的關(guān)鍵作用因子之一,然而,在肝癌細(xì)胞的EMT過程中,Snail是通過何種機(jī)制抑制E-鈣粘蛋白轉(zhuǎn)錄的仍不清楚。另外,表觀遺傳學(xué)信息的改變也是調(diào)控惡性腫瘤細(xì)胞發(fā)生EMT過程的重要機(jī)制,各種參與EMT過程的轉(zhuǎn)錄抑制因子可以利用不同的表觀遺傳機(jī)制實(shí)現(xiàn)對E-鈣粘蛋白的表達(dá)調(diào)控。本課題前期研究表明,肝癌的發(fā)生發(fā)展與組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶G9a的異常高表達(dá)密切相關(guān),同時(shí)在乳腺癌細(xì)胞中,Snail家族蛋白通過與G9a相互作用共同介導(dǎo)E-鈣粘蛋白的表達(dá)抑制,從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移。然而,Snail和G9a在肝癌的侵襲轉(zhuǎn)移過程中的作用尚未闡明。因此我們推測在肝癌侵襲轉(zhuǎn)移過程中,Snail通過募集G9a抑制E-鈣粘蛋白的轉(zhuǎn)錄,從而促進(jìn)肝癌細(xì)胞發(fā)生EMT過程。我們首先利用TGF-β誘導(dǎo)人源肝細(xì)胞QSG-7701和HL-7702發(fā)生EMT現(xiàn)象。RT-PCR實(shí)驗(yàn)表明在肝細(xì)胞發(fā)生EMT過程中,E-鈣粘蛋白在mRNA表達(dá)水平顯著下降,N-鈣粘蛋白、纖連蛋白和波形蛋在mRNA表達(dá)水平都明顯增加。同時(shí)轉(zhuǎn)錄抑制因子Snail家族的Snail2在mRNA水平也高表達(dá),而Snail1基因在mRNA水平并未上調(diào)。另外,在33對臨床肝癌組織樣品的檢測中也發(fā)現(xiàn),相比于癌旁組織,Snail2基因在肝癌組織中有高表達(dá)的趨勢。接下來,我們進(jìn)一步驗(yàn)證Snail2是否通過與G9a蛋白相互作用共同抑制E-鈣粘蛋白的表達(dá)。首先分別構(gòu)建了Snail2的全長及N端截短體600bp和C端截短體200bp的質(zhì)粒,以及G9a的全長和N端截短體2039bp和C端截短體1832bp的質(zhì)粒。通過免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)證實(shí),Snail2與G9a在體內(nèi)能夠結(jié)合,并且通過截短體的相互作用實(shí)驗(yàn)證明Snail2和G9a的C端有相互作用,與N端并無相互作用,并且Snail2的N端和G9a的C端也沒有結(jié)合,說明二者的作用位點(diǎn)都在C端。同時(shí)染色質(zhì)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)也表明,在發(fā)生了EMT過程的肝細(xì)胞中,Snail2和G9a均在E-鈣粘蛋白基因上有一定富集,且E-鈣粘蛋白基因上有H3K9me2修飾的發(fā)生,說明Snail2能夠與G9a共同結(jié)合至E-鈣粘蛋白基因上從而抑制其表達(dá)。綜上所述,本論文初步確認(rèn),Snail2通過與G9a相互作用,將之募集到E-鈣粘蛋白的基因上,使E-鈣粘蛋白基因發(fā)生甲基化修飾,進(jìn)而導(dǎo)致E-鈣粘蛋白的表達(dá)受到抑制,從而誘發(fā)了EMT現(xiàn)象的發(fā)生。
【關(guān)鍵詞】：肝細(xì)胞 EMT E-鈣黏蛋白 Snail2 G9a
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 第一章 前言11-20
• 1.1 肝癌的發(fā)生及其侵襲轉(zhuǎn)移11-13
• 1.1.1 肝癌的發(fā)生11
• 1.1.2 肝癌的侵襲轉(zhuǎn)移11-13
• 1.2 EMT及其調(diào)控機(jī)制13-14
• 1.2.1 EMT與腫瘤13
• 1.2.2 EMT的調(diào)控機(jī)制13-14
• 1.3 SNAIL蛋白家族與EMT發(fā)生14-17
• 1.3.1 Snail蛋白14-15
• 1.3.2 Snail蛋白在EMT過程中的作用15-17
• 1.4 組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶G9A與癌癥發(fā)生17-18
• 1.4.1 組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶G9a17
• 1.4.2 G9a與癌癥發(fā)生17-18
• 1.5 論文意義與設(shè)計(jì)18-20
• 1.5.1 論文目的和意義18
• 1.5.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)18-20
• 第二章 實(shí)驗(yàn)材料和方法20-36
• 2.1 材料、試劑和儀器20-23
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料20-21
• 2.1.2 試劑和溶液21-22
• 2.1.3 主要儀器22-23
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法23-36
• 2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)23
• 2.2.2 EMT現(xiàn)象的誘導(dǎo)方法23
• 2.2.3 細(xì)胞總RNA的提取23-24
• 2.2.4 Realtime-PCR實(shí)驗(yàn)24-25
• 2.2.5 質(zhì)粒構(gòu)建25-29
• 2.2.5.1 Snail2的真核表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建25-27
• 2.2.5.2 G9a的真核表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建27-29
• 2.2.6 細(xì)胞轉(zhuǎn)染29-30
• 2.2.7 樣品制備30
• 2.2.8 Western blot及SDS- PAGE30-32
• 2.2.9 免疫共沉淀（Co-IP）32
• 2.2.10 染色質(zhì)免疫共沉淀（Ch IP）實(shí)驗(yàn)32-36
• 第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果36-50
• 3.1 人肝細(xì)胞發(fā)生EMT過程的細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化36-39
• 3.2 肝細(xì)胞EMT過程中相關(guān)基因的表達(dá)水平變化39-40
• 3.3 SNAIL2基因在臨床肝癌組織和癌旁組織中的表達(dá)差異40-41
• 3.4 SNAIL2和G9A相互作用41-48
• 3.4.1 Snail2全長，N端和C端質(zhì)粒的構(gòu)建42-44
• 3.4.1.1 Snail2全長的構(gòu)建42-43
• 3.4.1.2 Snail2 N端和C端的構(gòu)建43-44
• 3.4.2 G9a的N端和C端質(zhì)粒的構(gòu)建44-45
• 3.4.3 Snail2與G9a的試表達(dá)45-46
• 3.4.4 Snail2與G9a的相互作用46-48
• 3.5 Snail2和G9a在肝細(xì)胞發(fā)生EMT過程中的作用機(jī)制48-50
• 第四章 結(jié)論與討論50-52
• 參考文獻(xiàn)52-57
• 作者簡介57-58
• 致謝58

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 吳一遷;瞿永華;;小鼠游離肝細(xì)胞的制備方法[J];上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué);1985年01期

2 盧力心,倫照榮,梁東升;獼猴肝細(xì)胞的分離及培養(yǎng)[J];動(dòng)物學(xué)雜志;1988年05期

3 ;培養(yǎng)肝細(xì)胞新方法[J];藥物生物技術(shù);1997年02期

4 趙利斌,郝飛;肝細(xì)胞水化狀態(tài)對細(xì)胞某些代謝的影響[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2000年05期

5 羅小玲,梁安民,李力,謝裕安,吳繼寧,匡志鵬;胎牛肝細(xì)胞低分子天然抑瘤物的制備及其抗腫瘤作用[J];中國腫瘤生物治療雜志;2001年02期

6 李保森,辛紹杰,游紹莉,鄒正升,王福生;乳豬肝細(xì)胞的簡易分離獲取[J];透析與人工器官;2002年04期

7 梁安民,謝裕安,羅小玲,李力,吳繼寧,匡志鵬;胎牛肝細(xì)胞低分子天然抑瘤物的生物學(xué)特性及抗腫瘤作用[J];中國腫瘤;2002年06期

8 湯習(xí)鋒,周東耀,康格非;二甲亞砜、尼克酰胺對肝細(xì)胞生長素促肝細(xì)胞增殖的影響[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2002年02期

9 周霖,薛毅瓏,田磊,李雁凌,張佐云;大規(guī)模豬肝細(xì)胞低溫保存方法的建立[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2003年09期

10 李曼妮;蘇先獅;;人肝臟再生增強(qiáng)因子對體外肝細(xì)胞生長的影響[J];臨床肝膽病雜志;2009年05期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 曹磊;張妍;高超;楊軍;;小型灌流式生物反應(yīng)器的構(gòu)建及其在體外培養(yǎng)肝細(xì)胞的應(yīng)用[A];天津市生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)會第三十四屆學(xué)術(shù)年會論文集[C];2014年

2 朱薇;袁愛力;賴卓勝;劉思德;王亞東;;大量豬肝細(xì)胞的聚集培養(yǎng)及功能鑒定[A];中國中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會第十二次全國消化系統(tǒng)疾病學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2000年

3 項(xiàng)紅升;李明;劉劍峰;楊巍;;肝細(xì)胞在線快速定性監(jiān)測系統(tǒng)[A];第一屆全國人工肝及血液凈化學(xué)術(shù)年會暨全國人工肝及血液凈化攻關(guān)協(xié)作組成立大會論文集[C];2004年

4 任宏造;;低硒低磷脂豚鼠肝細(xì)胞的電鏡觀察[A];第五次全國電子顯微學(xué)會議論文摘要集[C];1988年

5 賈珍容;邱銀生;王大菊;王程;宮新江;潘學(xué)營;;三種核苷類抗病毒藥物對大鼠原代肝細(xì)胞的毒性研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會獸醫(yī)藥理毒理學(xué)分會第九次學(xué)術(shù)討論會論文與摘要集[C];2006年

6 呂林;王美玲;羅緒剛;張麗陽;;不同錳水平對肉仔雞肝細(xì)胞脂肪合成關(guān)鍵酶的影響[A];安全優(yōu)質(zhì)的家禽生產(chǎn)——第十五次全國家禽學(xué)術(shù)討論會論文集[C];2011年

7 祝哲誠;李濤;謝俊杰;程東峰;申川;沈柏用;彭承宏;;用于生物人工肝的大量豬肝細(xì)胞低溫凍存[A];2013中國器官移植大會論文匯編[C];2013年

8 劉曙正;段廣才;Henrik S.Huitfeldt;;EGF通過TGFα-P53正反饋機(jī)制引起肝細(xì)胞增殖[A];全國腫瘤流行病學(xué)和腫瘤病因?qū)W學(xué)術(shù)會議論文集[C];2011年

9 張勇;宋良文;王清明;黃山英;孫麗;尹繼業(yè);王曉民;;肝再生增強(qiáng)因子在肝細(xì)胞中的自分泌研究[A];第六屆全國生物醫(yī)學(xué)體視學(xué)學(xué)術(shù)會議暨第九屆全軍軍事病理學(xué)學(xué)術(shù)會議、第五屆全軍定量病理學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2005年

10 顧勁揚(yáng);張悅;施曉雷;諸薛慧;丁義濤;;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞維持原代豬肝細(xì)胞形態(tài)與功能的實(shí)驗(yàn)研究[A];第一屆全國疑難重型肝病大會、第四屆全國人工肝及血液凈化學(xué)術(shù)年會論文集[C];2008年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王小龍;科學(xué)家發(fā)現(xiàn)保護(hù)肝細(xì)胞的蛋白質(zhì)[N];科技日報(bào);2009年

2 鄭屠;實(shí)現(xiàn)從干細(xì)胞得到肝細(xì)胞[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2003年

3 王健;骨髓細(xì)胞可轉(zhuǎn)化為肝細(xì)胞[N];大眾科技報(bào);2007年

4 本報(bào)記者 鄭曉春;英國成功實(shí)施肝細(xì)胞治療[N];科技日報(bào);2003年

5 記者 王艷紅;成年人骨髓干細(xì)胞培育出肝細(xì)胞[N];新華每日電訊;2000年

6 時(shí)仲省 陳建設(shè) 朱武凌;動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí) 骨髓造血干細(xì)胞可轉(zhuǎn)化為肝細(xì)胞[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2002年

7 江西 錢剛　(主任醫(yī)師);肝臟怎樣解毒[N];家庭醫(yī)生報(bào);2009年

8 欣光;移植豬肝細(xì)胞首獲成功[N];華夏時(shí)報(bào);2002年

9 陳金偉;“傷肝藥物”知多少(上)[N];中國醫(yī)藥報(bào);2006年

10 紅衛(wèi);肝炎患者不宜食罐頭食品[N];民族醫(yī)藥報(bào);2004年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 吳根生;SV40 T介導(dǎo)的人類胚肝上皮細(xì)胞的體外永生化及其機(jī)制探討[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);1992年

2 牛勃;大鼠肝氨甲酰磷酸合成酶Ⅰ基因在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)的研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);1990年

3 郭懷斌;實(shí)驗(yàn)性淋巴瘀滯誘發(fā)家兔肝組織結(jié)構(gòu)病理變化及其與脂肪肝的關(guān)系[D];河北醫(yī)科大學(xué);2014年

4 劉崇忠;供體肝細(xì)胞預(yù)輸注誘導(dǎo)大鼠肝移植免疫耐受及其作用機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究[D];山東大學(xué);2008年

5 李曉波;肝細(xì)胞內(nèi)新的核氧化固醇—3-硫酸-25-羥化膽固醇的生物合成通路、調(diào)節(jié)及功能研究[D];復(fù)旦大學(xué);2007年

6 張弓;EphA7在原發(fā)性肝細(xì)胞癌中的表達(dá)及其體外抑制研究[D];鄭州大學(xué);2010年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 周美齡;COFs對肝細(xì)胞線粒體損傷及能量代謝障礙機(jī)制的研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

2 王勝男;六價(jià)鉻對雞肝功能和抗氧化性能的影響[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

3 劉佳;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激通過Insig-1泛素化和SCAP調(diào)節(jié)肝細(xì)胞脂質(zhì)代謝及機(jī)制探討[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

4 楊靜;LCC基生物材料的制備及其與人體肝細(xì)胞生物相容性的研究[D];湖北工業(yè)大學(xué);2015年

5 黃家惠;利福平誘導(dǎo)小鼠脂肪肝及部分作用機(jī)理[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2016年

6 胡越;Snail2和G9a在肝細(xì)胞EMT過程中的作用及機(jī)制研究[D];吉林大學(xué);2016年

7 劉輝;葡多酚對肝細(xì)胞蛋白激酶C的影響作用研究[D];青島大學(xué);2007年

8 王幼萍;亞硫酸鹽對肝細(xì)胞脂肪代謝相關(guān)因素的影響[D];山西醫(yī)科大學(xué);2013年

9 李莉瓊;水通道蛋白8在妊娠肝內(nèi)膽汁淤積癥孕鼠肝細(xì)胞表達(dá)的研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2008年

10 張日華;脂肪細(xì)胞與原代肝細(xì)胞共培養(yǎng)可以誘導(dǎo)肝細(xì)胞在細(xì)胞水平上發(fā)生胰島素抵抗[D];南京醫(yī)科大學(xué);2007年

，

本文編號：597768