本文關(guān)鍵詞：索拉非尼誘導(dǎo)腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞促肝癌增殖、轉(zhuǎn)移的機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： 索拉非尼 肝細(xì)胞肝癌 巨噬細(xì)胞 NF-kB

【摘要】：目的索拉非尼(Sorafenib),作為小分子多靶點(diǎn)蛋白激酶抑制劑,是目前唯一被FDA批準(zhǔn)用于治療晚期肝癌的靶向藥物,盡管其在SHARP和ORIENTAL兩項(xiàng)三期臨床試驗(yàn)中已顯示較好的抗癌活性,然而僅延長(zhǎng)不足3個(gè)月的生存期,且對(duì)部分患者有效,提示肝癌患者存在著不同程度對(duì)Sorafenib的初級(jí)或獲得性抵抗。另一方面,研究發(fā)現(xiàn)治療過(guò)程中所導(dǎo)致的機(jī)體持續(xù)免疫反應(yīng)是促進(jìn)腫瘤發(fā)生發(fā)展的原因之一。近些年的研究逐漸開(kāi)始關(guān)注分子靶向藥物治療腫瘤過(guò)程中的負(fù)面作用,包括通過(guò)影響腫瘤及其免疫微環(huán)境,直接和間接地促腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移。之前,已有相關(guān)研究探索了Sorafenib與免疫微環(huán)境的關(guān)系。此外,我們課題組張偉的前期研究發(fā)現(xiàn),Sorafenib治療肝癌的過(guò)程中,盡管其抑制了原位腫瘤的增長(zhǎng),但sorafenib動(dòng)員更多單核-巨噬細(xì)胞入血和浸潤(rùn)腫瘤組織促進(jìn)肝癌的侵襲轉(zhuǎn)移,以及通過(guò)炎性信號(hào)通路STAT3下調(diào)抑癌基因HTATIP2的表達(dá),進(jìn)一步增加腫瘤生長(zhǎng)、腫瘤新生血管及肺轉(zhuǎn)移灶的數(shù)量。因此,Sorafenib的確可作用于機(jī)體免疫功能從而影響其療效,但考慮炎性微環(huán)境的極其復(fù)雜,Sorafenib治療過(guò)程中是如何改變腫瘤微環(huán)境的機(jī)制需要進(jìn)一步探討。鑒于腫瘤轉(zhuǎn)移是其本身及其與所處免疫微環(huán)境復(fù)雜相互作用的結(jié)果,因此,本文通過(guò)分析實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù),從Sorafenib治療過(guò)程中腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(Tumor Associated Macrophages,TAMs)所起的作用方面進(jìn)行研究,并探索進(jìn)一步提高Sorafenib療效的途徑。方法1.應(yīng)用不同劑量Sorafenib(1-10μmol/L)作用小鼠巨噬細(xì)胞(RAW264.7),采用MTT技術(shù)觀(guān)察其對(duì)RAW264.7細(xì)胞增殖的影響。2.誘導(dǎo)RAW264.7分化為經(jīng)典途徑激活型巨噬細(xì)胞-M1型及選擇途徑激活型巨噬細(xì)胞-M2型,采用RT-PCR技術(shù)在轉(zhuǎn)錄水平檢測(cè)兩種巨噬細(xì)胞高表達(dá)因子的水平。3.Sorafenib作用RAW264.7細(xì)胞,應(yīng)用RT-PCR、Elisa技術(shù)檢測(cè)巨噬細(xì)胞表型及其分泌細(xì)胞因子的變化。4.應(yīng)用MTT、劃痕試驗(yàn)、Transwell試驗(yàn)檢測(cè)低劑量Sorafenib作用后RAW264.7及其分泌的細(xì)胞因?qū)Φ投葠盒匀烁伟㎝HCC-97L細(xì)胞系增殖、遷移及侵襲能力的影響。5.應(yīng)用RT-PCR、Western bloting技術(shù)檢測(cè)sorafenib對(duì)RAW264.7細(xì)胞中相關(guān)通路的激活情況。采用相關(guān)通路抑制劑,檢測(cè)巨噬細(xì)胞極化狀態(tài)的改變,進(jìn)一步明確sorafenib調(diào)控RAW264.7細(xì)胞分化的分子機(jī)制。結(jié)果1.采用MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同濃度sorafenib對(duì)巨噬細(xì)胞增殖的影響。結(jié)果顯示:與大劑量相比,低劑量sorafenib不抑制巨噬細(xì)胞的增殖。2.應(yīng)用LPS誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞呈現(xiàn)為M1型極化狀態(tài);IL-4誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞呈現(xiàn)為M2型極化狀態(tài),應(yīng)用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)不同極化狀態(tài)的巨噬細(xì)胞相關(guān)炎性因子在轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)差異,結(jié)果顯示:M1型巨噬細(xì)胞高表達(dá)炎性因子IL-12、TNF-α,低表達(dá)IL-10、Arg1,M2型巨噬細(xì)胞高表達(dá)IL-10、Arg1,低表達(dá)IL-12、TNF-α,而兩種極化狀態(tài)下轉(zhuǎn)錄水平的IL-6表達(dá)量差異較小,提示兩種巨噬細(xì)胞的極化狀態(tài)在體內(nèi)免疫微環(huán)境中所起的作用不同。3.分別采用RT-PCR、Elisa技術(shù)從m RNA、蛋白水平檢測(cè)sorafenib處理后巨噬細(xì)胞高表達(dá)因子的變化情況從而反應(yīng)巨噬細(xì)胞的極化狀態(tài),結(jié)果顯示:sorafenib可以促使巨噬細(xì)胞高表達(dá)IL-10、IL-6,低表達(dá)IL-12并促進(jìn)其向M2型活化。4.與sorafenib作用后的巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)或上清夜培養(yǎng),低度惡性肝癌細(xì)胞MHCC-97L的增殖、遷移及侵襲能力顯著增強(qiáng)。5.采用RT-PCR、Western Blot技術(shù)證實(shí):sorafenib通過(guò)激活巨噬細(xì)胞內(nèi)NF-k B信號(hào)通路誘導(dǎo)其向M2型分化,其中NF-k B亞型P50起重要作用。6.給予NFk B通路特異性抑制劑后再次檢測(cè)巨噬細(xì)胞極化狀態(tài)發(fā)現(xiàn):巨噬細(xì)胞恢復(fù)經(jīng)典極化狀態(tài)。提示NFk B通路的特異性抑制劑可以逆轉(zhuǎn)sorafenib誘導(dǎo)的TAMs,其與sorafenib聯(lián)合使用可能能提高sorafenib治療效果。結(jié)論1.低劑量Sorafenib不抑制巨噬細(xì)胞增值。2.M1、M2巨噬細(xì)胞表達(dá)的炎性細(xì)胞因子存在差異。3.低劑量Sorafenib誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞向M2型分化,并促進(jìn)其分泌促瘤相關(guān)炎性因子。4.Sorafenib作用后巨噬細(xì)胞增強(qiáng)了人肝癌細(xì)胞系MHCC-97L的增值、轉(zhuǎn)移、侵襲能力。5.Sorafenib通過(guò)激活NF-k B通路誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞向M2型極化;通路的特異性抑制劑可以逆轉(zhuǎn)sorafenib誘導(dǎo)的TAMs。
【關(guān)鍵詞】：索拉非尼 肝細(xì)胞肝癌 巨噬細(xì)胞 NF-kB
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R735.7
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-12
• 縮略語(yǔ)/符號(hào)說(shuō)明12-14
• 前言14-18
• 研究現(xiàn)狀、成果14-17
• 研究目的、方法17-18
• 一、Sorafenib對(duì)巨噬細(xì)胞極化狀態(tài)的影響18-44
• 1.對(duì)象和方法18-38
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料18-21
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法21-36
• 1.3 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)36-38
• 2.實(shí)驗(yàn)結(jié)果38-41
• 2.1 低劑量sorafenib對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7 的增殖影響較小38-39
• 2.2 M1型、M2巨噬細(xì)胞炎性相關(guān)因子表達(dá)水平存在差異39-40
• 2.3 Sorafenib誘導(dǎo)小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7 向M2型分化40-41
• 3. 討論41-43
• 4. 小結(jié)43-44
• 二、Sorafenib處理后巨噬細(xì)胞對(duì)肝癌細(xì)胞生物學(xué)功能的影響44-51
• 1.對(duì)象和方法44-46
• 1.1 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)44-46
• 2.實(shí)驗(yàn)結(jié)果46-49
• 2.1 低劑量sorafenib處理后巨噬細(xì)胞能夠增強(qiáng)肝癌細(xì)胞的遷移能力46-47
• 2.2 低劑量sorafenib處理后巨噬細(xì)胞能夠增強(qiáng)肝癌細(xì)胞的侵襲能力47-48
• 2.3 低劑量sorafenib處理后巨噬細(xì)胞能夠增強(qiáng)肝癌細(xì)胞的增殖能力48-49
• 3.討論49-50
• 4.小結(jié)50-51
• 三、Sorafenib通過(guò)激活NF-kB信號(hào)通路誘導(dǎo)M2型巨噬細(xì)胞分化51-57
• 1.對(duì)象和方法51-52
• 1.1 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)51-52
• 2.實(shí)驗(yàn)結(jié)果52-55
• 2.1 Sorafenib不激活巨噬細(xì)胞中STAT3相關(guān)通路52-53
• 2.2 Sorafenib激活NF-kB通路促進(jìn)M2型巨噬細(xì)胞活化53
• 2.3 NF-kB通路抑制劑可恢復(fù)巨噬細(xì)胞M1型活化狀態(tài)53-55
• 3.討論55-56
• 4.小結(jié)56-57
• 結(jié)論57-58
• 參考文獻(xiàn)58-64
• 發(fā)表論文和參加科研情況說(shuō)明64-65
• 綜述 抗血管生成劑在肝癌中耐藥的研究進(jìn)展65-75
• 綜述參考文獻(xiàn)69-75
• 致謝75

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