本文關(guān)鍵詞：肺腫瘤抑制基因GPRC5A在肺癌發(fā)生中的作用

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【摘要】：目的利用Gprc5a基因敲除小鼠的肺癌模型,研究GPRC5A作用的分子機理及關(guān)鍵性靶向信號通路,揭示GPRC5A抑制肺癌發(fā)生的作用及生物學(xué)意義。材料與方法1.利用m RNA表達譜芯片分析比較野生型與Gprc5a基因敲除型小鼠氣管上皮細胞(MTEC)的差異表達,用RT-PCR和Westernblot的方法分別在m RNA和蛋白質(zhì)水平上驗證。2.構(gòu)建一系列GPRC5A截短體與缺失突變體,運用luciferase報告基因?qū)嶒灪蚖esternblot實驗檢測突變體質(zhì)粒的功能活性,確定GPRC5A發(fā)揮抑制作用的功能結(jié)構(gòu)域;運用免疫共沉淀和免疫熒光共定位實驗探究GPRC5A抑制EGFR信號通路的作用機制。3.利用EGFR及其他信號通路的特異性抑制劑,分別處理Gprc5a-/-小鼠肺氣管上皮細胞,用CCK-8法檢測不同藥物對細胞增殖的抑制作用。4.利用Gprc5a基因敲除小鼠的肺癌模型,通過RT-PCR、Westernblot,檢測Gprc5a-/-小鼠的肺組織中EGFR和STAT3信號通路是否有過度激活的情況。5.在人的肺癌細胞系中,構(gòu)建GPRC5A的穩(wěn)定表達株,驗證GPRC5A在人肺癌細胞中是否也有抑制EGFR信號通路的作用;裸鼠皮下移植實驗,研究GPRC5A對A549細胞在裸鼠皮下成瘤的影響。結(jié)果1.Affymetrix全基因組表達譜芯片結(jié)果表明,Gprc5a基因敲除小鼠MTEC細胞同野生型細胞相比,其EGFR信號通路發(fā)生顯著增高。2.Gprc5a基因敲除小鼠MTEC細胞中p-EGFR和p-STAT3異常性高表達;HEK293T細胞中,GPRC5A的高表達能夠抑制EGF誘導(dǎo)的EGFR-STAT3信號通路的過度激活。3.GPRC5A的跨膜結(jié)構(gòu)域為抑制EGFR信號通路所必須;GPRC5A可與EGFR發(fā)生物理相互作用,該功能由其跨膜結(jié)構(gòu)域所介導(dǎo),二者在細胞膜上有共定位。4.Gprc5a-/-MTEC細胞對EGFR的3種抑制劑的敏感性都明顯高于Gprc5a+/+MTEC,其他信號通路的抑制劑對這兩種細胞增殖的抑制作用都相差不大。5.Gprc5a-/-小鼠的肺組織中p-EGFR和p-STAT3的表達明顯高于Gprc5a+/+小鼠。6.在人的非小細胞肺癌細胞系H1975和A549中過表達GPRC5A能抑制EGF誘導(dǎo)的或持續(xù)性激活的p-EGFR和p-STAT3;過表達GPRC5A能夠抑制A549細胞在裸鼠皮下的成瘤能力。結(jié)論1.Gprc5a-/-MTEC中,EGFR-STAT3信號通路發(fā)生失控性增強,GPRC5A能夠抑制EGFR-STAT3信號通路的過度激活。2.GPRC5A通過其跨膜結(jié)構(gòu)域?qū)GFR發(fā)揮抑制作用;GPRC5A能夠與EGFR發(fā)生直接或者間接的相互作用,該功能由其跨膜區(qū)域所介導(dǎo)。3.Gprc5a-/-小鼠MTEC細胞比野生型細胞更加依賴于EGFR信號通路。4.Gprc5a-/-小鼠的肺組織中EGFR和STAT3的信號通路是異常激活的。5.在人肺癌細胞系中高表達GPRC5A能夠抑制其EGFR信號通路的過度激活和裸鼠皮下成瘤能力。
【關(guān)鍵詞】：肺癌 動物模型 G蛋白偶聯(lián)受體C家族第5組成員A 表皮生長因子受體 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄活化因子3
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R734.2
【目錄】：

• 摘要6-9
• ABSTRACT9-14
• 縮略語表14-16
• 前言16-22
• 第一章 GPRC5A能夠抑制EGFR-STAT3信號通路的過度激活22-44
• 1.1 材料與方法24-34
• 1.1.1 材料24-26
• 1.1.2 方法26-34
• 1.2 結(jié)果34-41
• 1.2.1 mRNA芯片分析比較野生型與Gprc5a基因敲除小鼠氣管上皮細胞信號通路差異34-36
• 1.2.2 Gprc5a~(-/-) 小鼠氣管上皮細胞中EGFR-STAT3信號通路是失調(diào)的36-39
• 1.2.3 GPRC5A的高表達能夠抑制EGF誘導(dǎo)的EGFR-STAT3信號通路的過度激活39-41
• 1.3 討論41-44
• 第二章 GPRC5A抑制EGFR信號通路的作用機制44-58
• 2.1 材料與方法45-50
• 2.1.1 材料45
• 2.1.2 方法45-50
• 2.2 結(jié)果50-56
• 2.2.1 GPRC5A的跨膜結(jié)構(gòu)域?qū)τ谄湟种艵GFR的作用是必需的50-53
• 2.2.2 GPRC5A的跨膜結(jié)構(gòu)域能夠與EGFR發(fā)生物理的相互作用53-56
• 2.3 討論56-58
• 第三章 GPRC5A~(-/-)小鼠體內(nèi)EGFR- STAT3信號通路的異常激活58-70
• 3.1 材料與方法59-62
• 3.1.1 材料59-60
• 3.1.2 方法60-62
• 3.2 結(jié)果62-68
• 3.2.1 Gprc5a~(-/-)小鼠氣管上皮細胞依賴于EGFR信號通路62-65
• 3.2.2 Gprc5a~(-/-)小鼠的肺組織中EGFR和STAT3的信號通路是異常激活的65-68
• 3.3 討論68-70
• 第四章 高表達GPRC5A抑制人肺癌細胞系EGFR信號通路和其裸鼠體內(nèi)成瘤能力70-77
• 4.1 材料與方法71-74
• 4.1.1 主要試劑和藥品71
• 4.1.2 方法71-74
• 4.2 結(jié)果74-76
• 人肺癌細胞系中高表達GPRC5A能夠抑制EGFR信號通路和裸鼠成瘤能力74-76
• 4.3 討論76-77
• 全文結(jié)論77-78
• 參考文獻78-84
• 致謝84-86
• 攻讀碩士學(xué)位期間已發(fā)表或待發(fā)表的論文86

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1 王春梅,姜濤,周春燕;誘導(dǎo)心臟發(fā)生的早期信號通路[J];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報;2004年05期

2 解文博;葉玲;;p38絲裂原活化蛋白激酶信號通路的部分研究方法[J];牙體牙髓牙周病學(xué)雜志;2009年10期

3 黎增輝;廖愛軍;;JNK信號通路[J];國際病理科學(xué)與臨床雜志;2010年03期

4 李林;;Wnt信號通路及其與骨形成的關(guān)系[J];臨床和實驗醫(yī)學(xué)雜志;2010年20期

5 李鳳賀;辛世杰;楊棟;惠林萍;楊昱;張健;段志泉;;SHH信號通路在血小板源性生長因子誘導(dǎo)的血管平滑肌細胞增殖中的作用研究[J];中國血管外科雜志(電子版);2010年04期

6 陳建勇;王聰;王娟;曹禮榮;;MAPK信號通路研究進展[J];中國醫(yī)藥科學(xué);2011年08期

7 李寶新;李玉坤;;Wnt信號通路對骨調(diào)節(jié)研究新進展[J];國際骨科學(xué)雜志;2008年03期

8 李佳殷;林麗珠;;JNK信號通路在惡性腫瘤中的研究進展[J];實用中醫(yī)內(nèi)科雜志;2012年18期

9 張玉婷;劉立新;;胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白在相關(guān)信號通路中的作用研究進展[J];中華消化病與影像雜志(電子版);2012年05期

10 席曉慧;王福文;牟艷玲;;Wnt信號通路與心血管疾病的研究進展[J];食品與藥品;2014年01期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 程華;王文;;經(jīng)典Wnt信號通路抑制劑[A];2011全國老年癡呆與衰老相關(guān)疾病學(xué)術(shù)會議第三屆山東省神經(jīng)內(nèi)科醫(yī)師（學(xué)術(shù)）論壇論文匯編[C];2011年

2 蔣瑩;程華;張麗;艾厚喜;王文;;經(jīng)典Wnt信號通路抑制劑[A];第一屆全國麻醉藥理專業(yè)委員會第二次學(xué)術(shù)會議論文集[C];2011年

3 蔣瑩;程華;張麗;艾厚喜;王文;;經(jīng)典Wnt信號通路抑制劑[A];中國成人醫(yī)藥教育論壇（4）[C];2011年

4 蔣瑩;程華;張麗;艾厚喜;王文;;經(jīng)典Wnt信號通路抑制劑[A];中國藥理學(xué)會補益藥藥理專業(yè)委員會成立大會暨人參及補益藥學(xué)術(shù)研討會會議論文集[C];2011年

5 李艷菲;艾厚喜;孫芳玲;張麗;蔣瑩;王文;;Wnt信號通路研究新進展[A];2013年中國藥學(xué)大會暨第十三屆中國藥師周論文集[C];2013年

6 李艷菲;艾厚喜;孫芳玲;張麗;蔣瑩;王文;;Wnt信號通路研究新進展[A];2013年全國老年性癡呆與相關(guān)疾病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2013年

7 李艷菲;艾厚喜;孫芳玲;張麗;蔣瑩;王文;;Wnt信號通路研究新進展[A];第三屆中國藥理學(xué)會補益藥藥理專業(yè)委員會學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2013年

8 季宇彬;胡哲清;鄒翔;;MAPK信號通路及其研究進展[A];轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研討會論文集[C];2010年

9 程華;孫芳玲;艾厚喜;張麗;蔣瑩;王文;;Wnt信號通路與血管發(fā)生[A];全國第三次麻醉藥理學(xué)術(shù)會議論文集[C];2012年

10 李林;;利用小分子探針研究經(jīng)典Wnt信號通路的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制[A];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)會第十一次會員代表大會暨2014年全國學(xué)術(shù)會議論文集——專題報告七[C];2014年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 劉海英;美發(fā)現(xiàn)兩種細胞信號通路互動機制[N];科技日報;2009年

2 記者 劉海英;英發(fā)現(xiàn)細胞信號通路新“剎車”蛋白[N];科技日報;2012年

3 衣曉峰　陳英云 記者 李麗云;結(jié)腸癌發(fā)生中新的信號通路找到[N];科技日報;2009年

4 記者 許琦敏;減肥信號受控于腦中“通訊員”[N];文匯報;2008年

5 記者 劉海英;一種蛋白決定人的抗壓能力[N];科技日報;2011年

6 通訊員 喬蕤琳 記者 衣曉峰 聶松義;癌癥中小分子和微小核苷酸有關(guān)聯(lián)[N];健康報;2012年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王森;乙型肝炎病毒表面抗原抑制TLR2和TLR4信號通路的機制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

2 尚果果;NRF2抗氧化應(yīng)激信號通路的活化在糖尿病腎病中的保護作用及其機制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

3 孫鼎琪;Akt信號通路在膀胱腫瘤的進展及化療敏感性的實驗研究[D];山東大學(xué);2015年

4 白秀峰;新基因Gsdma3對小鼠毛囊周期及Wnt/β-catenin信號通路作用的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

5 張俊波;PI3K/Akt信號通路調(diào)控胞內(nèi)布魯氏菌16M存活的分子機制研究[D];石河子大學(xué);2014年

6 成旭東;黃芪活性物質(zhì)篩選及基于PKC-ERK信號通路抑制肺癌的作用機理研究[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2015年

7 路康;STAT3信號通路介導(dǎo)CLL和MCL發(fā)生組蛋白去乙�；敢种苿┠退幍臋C制研究[D];山東大學(xué);2015年

8 趙睿;Wnt信號通路在臂叢神經(jīng)根性撕脫傷誘發(fā)的神經(jīng)病理性痛中的作用機制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

9 劉海燕;Sonic hedgehog信號通路對正常角質(zhì)形成細胞增殖及凋亡的影響及其分子機制[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

10 祁義軍;胃腸道間質(zhì)瘤中Shh信號通路作用的實驗研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李玉娟;Hedgehog信號通路在大鼠急性胰腺炎中的作用及其對TNF-α、IL-10的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

2 趙玲玲;FLCN與PAT1相互作用調(diào)控mTORC1信號通路的機理研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2015年

3 程志芬;Hedgehog信號通路相關(guān)因子在TCA舌癌細胞株中的表達及其意義[D];延邊大學(xué);2013年

4 陳丹丹;Neurexin通過Gbb信號通路調(diào)控果蠅神經(jīng)肌肉接頭突觸生長[D];東南大學(xué);2015年

5 馬會彥;胃癌中HSulf-1與Hedgehog信號通路的關(guān)系研究[D];浙江理工大學(xué);2011年

6 胡磊;Cdc25A抑制RIG-Ⅰ介導(dǎo)的信號通路機制研究[D];安徽大學(xué);2014年

7 楊鑫娜;NOTCH信號通路在慢性阻塞性肺疾病免疫失衡中的作用及機制研究[D];蘭州大學(xué);2015年

8 劉寧;�；臍�-β-咔啉類化合物通過靶向USP15進而調(diào)控TGFβ信號通路活性的結(jié)構(gòu)優(yōu)化與探究[D];華東師范大學(xué);2015年

9 楊明;TLR3/TRIF信號通路在帕金森病模型炎癥反應(yīng)中的作用及機制研究[D];成都醫(yī)學(xué)院;2016年

10 周杰;黑米花青素通過FAK信號通路抗HER-2陽性乳腺癌轉(zhuǎn)移及EMT效應(yīng)的體外研究[D];成都醫(yī)學(xué)院;2016年

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