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HoxC6對(duì)胃癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及機(jī)制研究

發(fā)布時(shí)間:2017-07-30 11:20

  本文關(guān)鍵詞:HoxC6對(duì)胃癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及機(jī)制研究


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【摘要】:胃癌是全球高發(fā)的惡性腫瘤之一。我國胃癌發(fā)病率和死亡率仍高居世界第二位。胃癌的發(fā)生發(fā)展涉及微環(huán)境和基因改變,癌基因的活化是其重要機(jī)制。尋找新的癌基因并驗(yàn)證其對(duì)胃癌的作用,對(duì)確定生物學(xué)靶標(biāo)、干預(yù)癌變具有重要意義。課題組前期通過胃癌組織基因芯片篩選可能與胃癌相關(guān)的候選基因,HoxC6是其中的一個(gè)候選促癌基因。HoxC6屬同源盒基因家族(簡稱:Hox家族)成員,含有兩個(gè)啟動(dòng)子,轉(zhuǎn)錄兩條mRNA (HoxC6-1和HoxC6-2),其表達(dá)產(chǎn)物是重要的轉(zhuǎn)錄因子,在胚胎發(fā)育過程中對(duì)細(xì)胞分化和形態(tài)發(fā)育控制起重要作用,近年來研究發(fā)現(xiàn),Hox家族基因與多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展及預(yù)后密切相關(guān)。HoxC6與胃癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系值得深入研究。本研究將通過檢測胃癌組織及胃癌細(xì)胞株中HoxC6、HoxC6-1及HoxC6-2的表達(dá)水平,分析三者與患者臨床病理資料之間的相關(guān)性;通過siRNA干擾技術(shù),特異性降低HoxC6、HoxC6-1及HoxC6-2表達(dá),觀察其對(duì)胃癌細(xì)胞惡性生物學(xué)行為(細(xì)胞增殖、遷移、侵襲等)的影響,同時(shí)運(yùn)用生物信息學(xué)技術(shù)篩選HoxC6潛在調(diào)控的基因、核酸并進(jìn)行初步驗(yàn)證。研究內(nèi)容1、HoxC6、HoxC6-1及HoxC6-2在胃癌中的表達(dá),及其與胃癌臨床資料之間的相關(guān)性①實(shí)時(shí)定量PCR(qRT-PCR)檢測比對(duì)47對(duì)胃癌組織與配對(duì)正常胃組織中HoxC6、 HoxC6-1及HoxC6-2 mRNA表達(dá)水平;②結(jié)合胃癌患者臨床、病理資料,分析HoxC6、HoxC6-1及HoxC6-2 mRNA表達(dá)水平與各臨床、病理資料之間的相關(guān)性;③ qRT-PCR和Western Blot檢測7株胃癌細(xì)胞及1株正常胃粘膜上皮細(xì)胞中HoxC6、HoxC6-1及HoxC6-2的表達(dá)情況。2、特異性siRNA干擾HoxC6、HoxC6-1及HoxC6-2后胃癌細(xì)胞惡性生物學(xué)行為的變化①采用細(xì)胞活性實(shí)驗(yàn)(MTS)觀察siRNA干擾HoxC6、HoxC6-1及HoxC6-2對(duì)SGC-7901和BGC-823細(xì)胞增殖的影響;② Transwell遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)研究siRNA干擾HoxC6、HoxC6-1及HoxC6-2對(duì)SGC-7901和BGC-823細(xì)胞遷移、侵襲的影響;③采用流式細(xì)胞儀檢測siRNA干擾HoxC6、HoxC6-1及HoxC6-2后SGC-7901和BGC-823細(xì)胞的凋亡和細(xì)胞周期變化。3. HoxC6潛在調(diào)控基因、核酸的篩選及初步驗(yàn)證運(yùn)用生物信息學(xué)技術(shù)(TFSEARCH、TRANSFEC、MEME等軟件)預(yù)測HoxC6可能調(diào)控的基因或核酸,聯(lián)合genecards、pubmed、文獻(xiàn)等綜合得出基因、核酸的功能,結(jié)合前期實(shí)驗(yàn)中HoxC6在增殖、遷移、侵襲等方面的作用,篩選出HoxC6可能調(diào)控的有功能的基因、核酸,并分別在轉(zhuǎn)染HoxC6 siRNA的SGC-7901和BGC-823細(xì)胞中進(jìn)行qRT-PCR驗(yàn)證。研究結(jié)果:1、HoxC6、HoxC6-1及HoxC6-2在胃癌組織中表達(dá)量明顯增加,表達(dá)水平與胃癌患者腫瘤分期及淋巴結(jié)浸潤等呈不同程度相關(guān)①胃癌組織中HoxC6、HoxC6-1及HoxC6-2 mRNA水平較正常胃組織顯著上調(diào)(p0.01);②HoxC6、HoxC6-1及HoxC6-2 mRNA水平與胃癌患者腫瘤分期及淋巴結(jié)浸潤等呈不同程度相關(guān);③HoxC6、HoxC6-1及HoxC6-2在SGC-7901、BGC-823胃癌細(xì)胞株中表達(dá)量均相對(duì)較高(用升高倍數(shù)folds±方差SD表示)。HoxC6:2.76±0.02、4.21±0.06; HoxC6-1:2.39±0.35、1.81±0.07; HoxC6-2:2.65±0.29、5.41±0.21。2、siRNA干擾HoxC6、HoxC6-1及HoxC6-2能不同程度抑制胃癌細(xì)胞增殖,siRNA干擾HoxC6-2能顯著抑制胃癌細(xì)胞的遷移和侵襲。①建立了分別成功干擾HoxC6、HoxC6-1及HoxC6-2的胃癌細(xì)胞株系SGC-7901和BGC-823,通過qRT-PCR和Western Blot檢測進(jìn)行了驗(yàn)證;② siRNA分別干擾HoxC6、HoxC6-1及HoxC6-2能顯著抑制胃癌細(xì)胞的增殖(p0.01)(SGC-7901:抑制率IR依次為12.7%、9.76%、29.54%; BGC-823: IR依次為41.16%、38.08%、44.86%);③與空載組相比,干擾HoxC6-2能顯著抑制胃癌細(xì)胞的遷移(SGC-7901:抑制率IR= 65.62%、p0.01; BGC-823:IR=56.75%、p=0.04)和侵襲(SGC-7901: IR=55.72%、p=0.03; BGC-823:IR=46.07%、p0.01);總凋亡較空載組顯著增加(SGC-7901:5%±0.18%/7.94%±0.52%, p0.01; BGC-823: 5.2%±0.47%/10.25%±0.58%, p0.01)、顯著影響細(xì)胞周期(SGC-7901:G2期增加,p=0.02; BGC-823:G1期增加,p0.01);而干擾HoxC6、HoxC6-1時(shí),胃癌細(xì)胞的上述生物學(xué)行為受到影響,但沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)。3. HoxC6潛在調(diào)控基因、核酸的篩選及初步驗(yàn)證①運(yùn)用生物信息學(xué)技術(shù)預(yù)測到HoxC6可能調(diào)控的基因53個(gè)、micRNA和lncRNA共22個(gè);②篩選出重要的基因7個(gè)(JunD、BMP7、Bcl-2、MKI67、WIF1、CASP1、Spl); qRT-PCR證實(shí)siRNA干擾HoxC6后,JunD、BMP7、MKI67、CASP1、Spl mRNA水平顯著升高,而WIF1、Bcl-2mRNA水平明顯下降。③同時(shí)篩選到一個(gè)重要的長鏈非編碼RNA HOTAIR,發(fā)現(xiàn)HOTAIR在胃癌組織及多種胃癌細(xì)胞株中表達(dá)升高。siRNA干擾HoxC6后,HOTAIR的表達(dá)水平顯著降低。研究結(jié)論1. HoxC6、HoxC6-1及HoxC6-2在人胃癌組織中表達(dá)量增加;2、HoxC6、HoxC6-1及HoxC6-2的表達(dá)與胃癌患者腫瘤分期及淋巴結(jié)浸潤等呈不同程度相關(guān);3、干擾HoxC6、HoxC6-1及HoxC6-2可明顯抑制胃癌細(xì)胞的增殖,尤以干擾HoxC6-2時(shí)抑制作用最明顯,且對(duì)胃癌細(xì)胞遷移和侵襲有明顯抑制作用。研究結(jié)果提示HoxC6在胃癌的發(fā)生中可能扮演促癌基因的角色;4、HoxC6可能通過與長鏈非編碼RNA HOTAIR互作,從而促進(jìn)胃癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲。
【關(guān)鍵詞】:HoxC6 胃癌 RNA干擾 HOTAIR
【學(xué)位授予單位】:浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2015
【分類號(hào)】:R735.2
【目錄】:
  • 致謝4-6
  • 中文摘要6-10
  • 英文摘要10-14
  • 英文縮寫一覽表14-18
  • 引言18-20
  • 第一部分 HoxC6、HoxC6-1及HoxC6-2在胃癌中的表達(dá)、與胃癌臨床資料之間的相關(guān)性20-42
  • 1.1 材料和方法20-33
  • 1.2 結(jié)果33-39
  • 1.3 討論39-41
  • 1.4 結(jié)論41-42
  • 第二部分 特異性siRNA干擾HoxC6、HoxC6-1及HoxC6-2后胃癌細(xì)胞惡性生物學(xué)行為的變化42-71
  • 2.1 材料與方法42-51
  • 2.2 結(jié)果51-67
  • 2.3 討論67-70
  • 2.4 結(jié)論70-71
  • 第三部分 HoxC6潛在調(diào)控基因或核酸的初步篩選及驗(yàn)證71-82
  • 3.1 材料和方法72-75
  • 3.2 結(jié)果75-79
  • 3.3 討論79-81
  • 3.4 結(jié)論81-82
  • 全文總結(jié)82-83
  • 參考文獻(xiàn)83-90
  • 綜述90-100
  • 參考文獻(xiàn)97-100
  • 個(gè)人簡歷100

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 劉夢(mèng)玲;查運(yùn)紅;;HOX基因的受體信號(hào)改變?cè)谀[瘤中作用的研究進(jìn)展[J];廣東醫(yī)學(xué);2014年21期

2 牛苗苗;戰(zhàn)軍;張宏權(quán);;HOX基因在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中的作用[J];解剖學(xué)報(bào);2014年03期

3 劉逸;陳名華;陳德鑫;朱文奕;王丹;周軍;;結(jié)直腸癌中同源盒基因B9的表達(dá)及臨床意義[J];中國熱帶醫(yī)學(xué);2014年04期

4 袁夢(mèng);何志旭;舒莉萍;袁家侃;劉豐;李燕;;基于CRISPR/Cas9系統(tǒng)對(duì)斑馬魚hoxb4基因的編輯及其突變體基因型的初篩[J];生物技術(shù)通報(bào);2015年10期

5 林飛燕;吳愛華;張培麗;蔣磊;李紹堂;;HoxB8對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞生長遷移的影響[J];溫州醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2015年11期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 商冰雪;CT45A1作為新的原癌基因促進(jìn)腫瘤發(fā)生和腫瘤轉(zhuǎn)移[D];蘇州大學(xué);2014年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 龔麗;HoxA9EC對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞在高糖環(huán)境下所受損傷的修復(fù)作用[D];浙江大學(xué);2013年

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本文編號(hào):593984

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