本文關(guān)鍵詞：黑色素瘤抗原蛋白D1促進口腔鱗癌細胞凋亡的機制研究

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【摘要】：口腔鱗狀細胞癌(oral squamous cell carcinoma, OSCC)是最為常見的一種上皮源性惡性腫瘤,嚴重影響著人類的生命健康。近年來,對黑色素瘤抗原蛋白D1 (melanoma antigen D-1, MageD1)的研究越來越多,大量的數(shù)據(jù)表明其功能主要為調(diào)節(jié)細胞的凋亡,促進成骨發(fā)生及牙髓細胞的再生,并參與調(diào)節(jié)生理節(jié)律等,然而主要的研究對象是神經(jīng)系統(tǒng)和少數(shù)腫瘤如乳腺腺癌,食道癌,腸癌等,MageD1在口腔鱗癌中的研究尚未有報道。因此,我們以口腔鱗狀細胞癌為研究對象,觀察了MageD1在口腔鱗狀細胞癌中抑制細胞生長、促進凋亡等方面的生物學(xué)功能及其相關(guān)作用機制。研究目的：明確MageD1在口腔鱗狀細胞癌中是否具有促進細胞凋亡等方面的生物學(xué)功能并初步探討其相關(guān)作用機制。材料與方法：首先,我們收集了口腔鱗狀細胞癌的臨床組織,培養(yǎng)了口腔鱗狀細胞癌細胞系,通過實時熒光定量PCR、免疫蛋白印記、免疫熒光和免疫組化的方法檢測了MageD1在口腔鱗狀細胞癌臨床組織和細胞系中的表達情況；其次,我們選擇一種口腔鱗癌細胞系作為研究對象,通過慢病毒轉(zhuǎn)染,抗生素篩選的方法得到穩(wěn)定的MageD1過表達細胞系,在此基礎(chǔ)上,利用5-氟尿嘧啶(5-FU)構(gòu)建細胞凋亡模型,并通過CCK8、流式細胞儀、免疫蛋白印記的方法檢測了MageD1過表達后腫瘤細胞的凋亡、增殖、細胞周期等方面的變化。并在此基礎(chǔ)上,我們利用MageD1過表達細胞系,通過裸鼠皮下成瘤、免疫組化、HE染色的方法檢測了MageD1在動物體內(nèi)的的促腫瘤細胞凋亡功能；最后,我們通過免疫蛋白印記、蛋白質(zhì)免疫共沉淀的方法探究了NF-κB和p75NTR在MageD1介導(dǎo)的口腔鱗癌細胞凋亡中的具體機制。結(jié)果：首先,我們觀察到MageD1在口腔鱗狀細胞癌臨床組織和細胞系中,無論在蛋白質(zhì)水平還是mRNA水平,都呈異常低表達；其次,我們成功建立了穩(wěn)定的MageDl過表達細胞系Lv-MageD1-HN6.結(jié)合CCK8實驗,結(jié)果表明Lv-MageD1-HN6細胞的增殖能力弱于其對照組HN6細胞。5-FU處理后,Lv-MageD1-HN6細胞的凋亡明顯高于對照組細胞,并且Lv-MageD1-HN6細胞表現(xiàn)出G2期阻滯,有絲分裂減少等細胞周期改變的現(xiàn)象。進一步的動物實驗發(fā)現(xiàn)Lv-MageD1-HN6細胞形成的腫瘤和對照組細胞形成的相比,瘤體體積小而重量輕。免疫印跡的結(jié)果表明Lv-MageD1-HN6細胞中p75NTR的表達明顯高于對照組細胞,并且MageD1的過表達改變了NF-kB在細胞核內(nèi)外的表達量,而且MageD1能與NF-kB發(fā)生蛋白質(zhì)免疫共沉淀,這可能與Lv-MageD1-HN6細胞中凋亡相關(guān)蛋白的表達上升有關(guān)。結(jié)論：1. MageD1在口腔鱗癌細胞系和臨床標(biāo)本中異常低表達,并且這種低表達與腫瘤惡性程度呈負相關(guān)。2. MageD1在口腔鱗癌細胞中具有促進細胞凋亡的作用,這種作用是通過與p75NTR相互作用這條經(jīng)典信號通路產(chǎn)生的。同時,它能調(diào)節(jié)口腔鱗癌細胞周期變化,干擾了DNA的復(fù)制和有絲分裂的進程。這提示將MageD1作為腫瘤生物治療的靶點具有現(xiàn)實的可行性。3. MageD1在口腔鱗癌細胞中具有調(diào)節(jié)NF-kB的作用,并且這種作用是通過兩者蛋白間直接相互作用產(chǎn)生的。MageD1在口腔鱗癌中的促進細胞凋亡的作用是通過p75NTR實現(xiàn)的,并有可能通過NF-kB的信號通路實現(xiàn)。
【關(guān)鍵詞】：黑色素瘤抗原蛋白D1 口腔鱗狀細胞癌 細胞凋亡 NF-κB
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R739.8
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 前言9-12
• 第一部分：MageDl在口腔淲癌中的表達及臨床意義12-28
• 1 材料與方法12-22
• 2 結(jié)果22-26
• 3 討論26-27
• 4 結(jié)論27-28
• 第二部分 MageDl過表達對口腔淲癌細胞調(diào)亡及細胞周期的影響28-48
• 1 材料與方法28-37
• 2 結(jié)果37-45
• 3 討論45-47
• 4 結(jié)論47-48
• 第三部分 NF-kB和P75NTR在MageDl介導(dǎo)的口腔淲癌細胞調(diào)亡中的相關(guān)機制48-56
• 1 材斜與方法48-51
• 2 結(jié)果51-54
• 3 討論54-55
• 4 結(jié)論55-56
• 參考文獻56-65
• 全文總結(jié)65-66
• 綜述66-78
• 參考文獻73-78
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況78
• 攻讀學(xué)位期間獲獎情況78-79
• 致謝79

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1 毛靜芳,韓枋;819例口腔鱗癌病理臨床分析[J];診斷病理學(xué)雜志;2000年02期

2 保森竹,孫[?[?,翁巧鳳,陳永賢;341例口腔鱗癌病例臨床分析[J];青海醫(yī)藥雜志;2001年07期

3 張雷,唐f展，

本文編號：591048