本文關(guān)鍵詞：Rac1蛋白在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及其促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞運(yùn)動(dòng)機(jī)制的研究

  更多相關(guān)文章： 膠質(zhì)瘤 遷移 侵襲 Rac1 片狀偽足 黏著斑周轉(zhuǎn)

【摘要】：膠質(zhì)母細(xì)胞瘤(glioblastoma multiforme,GBM)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見、侵襲性最強(qiáng)的惡性膠質(zhì)瘤,屬人類難治性和預(yù)后極差的腫瘤之一。盡管采用規(guī)范的標(biāo)準(zhǔn)化治療,但膠質(zhì)母細(xì)胞瘤患者預(yù)后改善甚微。即使腫瘤實(shí)現(xiàn)影像學(xué)全切,但膠質(zhì)母細(xì)胞瘤術(shù)后常常復(fù)發(fā)于腫瘤周圍2cm范圍[1-3]。臨床和病理學(xué)證據(jù)表明膠質(zhì)瘤細(xì)胞常常沿著細(xì)長的解剖結(jié)構(gòu)浸潤播散,如腦白質(zhì)纖維束、微血管和無髓鞘軸突[4]。膠質(zhì)母細(xì)胞瘤侵襲遷移的特性是其不良預(yù)后的主要原因。因此,越來越多的人意識到靶向抑制調(diào)控膠質(zhì)瘤侵襲遷移的分子將為膠質(zhì)瘤的治療提供新方法。膠質(zhì)瘤細(xì)胞的遷移侵襲是一個(gè)完整和復(fù)雜的多步驟過程,其發(fā)生侵襲需要4個(gè)基本步驟,包括○1.腫瘤細(xì)胞脫離腫瘤實(shí)體;○2.與細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM)的黏附;○3.在基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)等作用下降解ECM;○4.細(xì)胞運(yùn)動(dòng)和收縮。在這些步驟中,最為關(guān)鍵的環(huán)節(jié)為細(xì)胞的遷移運(yùn)動(dòng)。作為重要的信號分子,肌動(dòng)蛋白骨架及其調(diào)控蛋白在膠質(zhì)瘤細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)中發(fā)揮了重要作用[5,6]。Rac1為Ras相關(guān)的C3肉毒素底物1的簡稱,其基因全長29 kb,包含7個(gè)外顯子,位于人染色體7p22,參與Ras基因的惡性轉(zhuǎn)型。Rac1作為Rho家族成員之一,存在Rac1-GDP(失活狀態(tài))和Rac1-GTP(激活狀態(tài))兩種形式,是細(xì)胞內(nèi)多條信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的關(guān)鍵分子。Rac1作為分子開關(guān)參與調(diào)節(jié)一系列的細(xì)胞功能,包括細(xì)胞增殖、凋亡,腫瘤細(xì)胞的侵襲遷移等。片狀偽足的形成和黏著斑的周轉(zhuǎn)作為細(xì)胞遷移的兩個(gè)關(guān)鍵步驟,在細(xì)胞的遷移中發(fā)揮重要作用。Rac1不僅參與細(xì)胞片狀偽足的形成,而且參與黏著斑的周轉(zhuǎn)調(diào)節(jié),被認(rèn)為是調(diào)控腫瘤細(xì)胞侵襲遷移的關(guān)鍵因子。相關(guān)研究表明,Rac1在上皮性卵巢癌、胃癌、肝細(xì)胞癌等腫瘤中過表達(dá)并與腫瘤惡性進(jìn)展密切相關(guān)[7-9]。本課題主要研究Rac1在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及其促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞運(yùn)動(dòng)機(jī)制的研究,包括三個(gè)部分:1.人膠質(zhì)瘤組織中Rac1的表達(dá)。為研究膠質(zhì)瘤中Rac1的表達(dá)及其與膠質(zhì)瘤病理分級的相關(guān)性,40例各級別的膠質(zhì)瘤標(biāo)本以及8例對照腦組織被用于實(shí)驗(yàn)研究。首先,我們運(yùn)用免疫組化檢測Rac1在不同標(biāo)本中的表達(dá),結(jié)果證實(shí),rac1在對照腦組織中不表達(dá),而在膠質(zhì)瘤組織標(biāo)本中其染色強(qiáng)度隨著腫瘤級別的升高而增強(qiáng)(f=105.225,p=0.000)。接下來,蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)被用于進(jìn)一步半定量評估rac1在各組織中的表達(dá),結(jié)果為對照腦組織中rac1的表達(dá)量為0.093±0.025(n=8),而whoii、whoiii和whoiv級膠質(zhì)瘤標(biāo)本中rac1表達(dá)量分別為0.22±0.031(n=8),0.38±0.031(n=12),0.61±0.025(n=20)。統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果表明,相比于對照腦組織,rac1在膠質(zhì)瘤中表達(dá)量升高(p0.01),且與膠質(zhì)瘤的病理分級呈正相關(guān)(r=0.92,p=0.012)。2.rac1在膠質(zhì)瘤細(xì)胞遷移和侵襲中的作用。我們使用rac1的特異性的小分子抑制劑nsc23766下調(diào)rac1的活性,探討rac1對膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵襲遷移的影響。u251和snb19細(xì)胞系用于體外實(shí)驗(yàn)研究,實(shí)驗(yàn)分為2組,即control組和nsc23766處理組。gstpull-down實(shí)驗(yàn)檢測rac1活性,mtt實(shí)驗(yàn)檢測nsc23766對膠質(zhì)瘤細(xì)胞活性的影響;transwell侵襲實(shí)驗(yàn)和劃痕實(shí)驗(yàn)分別用于檢測細(xì)胞的侵襲和遷移能力。結(jié)果:rac1的活性被明顯抑制(p0.01),抑制rac1的活性后膠質(zhì)瘤細(xì)胞的遷移侵襲能力明顯下降(p0.01)。3.rac1促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞遷移和侵襲的可能機(jī)制。為探究rac1促進(jìn)細(xì)胞運(yùn)動(dòng)的機(jī)制,rac1的小分子抑制劑nsc23766和rac1特異性的小干擾rna兩種方法被用于體外實(shí)驗(yàn)研究。細(xì)胞免疫熒光觀察細(xì)胞形態(tài)的變化及rac1與limk1在細(xì)胞內(nèi)的定位。westernblotting驗(yàn)證control、sirna-nc和rac1sirna組rac1的表達(dá)情況。westernblotting檢測不同處理組p-limk1(thr508)、limk1、mmp-2和mmp-9的表達(dá)變化。劃痕實(shí)驗(yàn)和transwell侵襲實(shí)驗(yàn)評價(jià)control、rac1sirna和limk1sirna組細(xì)胞遷移、侵襲能力的變化。結(jié)果:與control組相比,nsc23766處理組細(xì)胞片狀偽足明顯變小甚至不伸展,此外,nsc23766抑制黏著斑的周轉(zhuǎn),抑制limk1的磷酸化(p0.01)。westernblotting結(jié)果顯示,rac1sirna能明顯下調(diào)rac1蛋白的表達(dá)。相應(yīng)地,沉默rac1的表達(dá)可得到相似的結(jié)果。免疫熒光結(jié)果顯示rac1與limk1共定位于細(xì)胞前緣的片狀偽足處。抑制rac1的活性后mmp-2、mmp-9的表達(dá)明顯下調(diào)(p0.01)。與control組相比,rac1sirna與limk1sirna組細(xì)胞遷移和侵襲能力明顯下降(p0.01)。結(jié)論:1.與對照腦組織相比,Rac1在膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)明顯升高,且與膠質(zhì)瘤病理級別呈正相關(guān)。2.Rac1在膠質(zhì)瘤細(xì)胞的侵襲和遷移中發(fā)揮重要作用。3.Rac1通過調(diào)節(jié)片狀偽足的形成,黏著斑的周轉(zhuǎn)和基質(zhì)金屬蛋白酶-2和-9(MMP-2、MMP-9)的表達(dá)參與調(diào)控膠質(zhì)瘤細(xì)胞的遷移和侵襲。
【關(guān)鍵詞】：膠質(zhì)瘤 遷移 侵襲 Rac1 片狀偽足 黏著斑周轉(zhuǎn)
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R739.41
【目錄】：

• 中文摘要3-6
• Abstract6-12
• 縮略語/符號說明12-13
• 前言13-15
• 研究現(xiàn)狀、成果13-14
• 研究目的、方法14-15
• 一、Rac1蛋白在不同級別膠質(zhì)瘤中的表達(dá)情況15-24
• 1.1 對象和方法16-20
• 1.1.1 病例資料16
• 1.1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑與儀器（見表 1.1）16
• 1.1.3 實(shí)驗(yàn)方法16-20
• 1.2 結(jié)果20-22
• 1.3 討論22-23
• 1.4 小結(jié)23-24
• 二、Rac1蛋白在膠質(zhì)瘤細(xì)胞遷移和侵襲中的作用24-35
• 2.1 對象和方法24-29
• 2.1.1 主要實(shí)驗(yàn)試劑與儀器（見表 2.1）24-25
• 2.1.2 細(xì)胞培養(yǎng)及實(shí)驗(yàn)分組25-29
• 2.2 結(jié)果29-32
• 2.3 討論32-34
• 2.4 小結(jié)34-35
• 三、Rac1蛋白促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞遷移和侵襲的可能機(jī)制35-51
• 3.1 對象和方法35-39
• 3.1.1 主要實(shí)驗(yàn)試劑與儀器（見表 3.1）35-36
• 3.1.2 免疫熒光染色36-39
• 3.2 結(jié)果39-48
• 3.3 討論48-50
• 3.4 小結(jié)50-51
• 結(jié)論51-52
• 參考文獻(xiàn)52-57
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明57-59
• 綜述59-70
• 綜述參考文獻(xiàn)64-70
• 致謝70

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3 仝海波,江澄川,唐鎮(zhèn)生,金一尊;膠質(zhì)瘤細(xì)胞化學(xué)增敏作用實(shí)驗(yàn)研究[J];山西臨床醫(yī)藥;2000年07期

4 李嗍,王楓,繆珊,駱文靜;過量鋅對鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞體外生長的影響[J];解放軍預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志;2001年04期

5 梁一鳴,郭國慶,鄭少俊,沈偉哉;膠質(zhì)瘤血管內(nèi)皮生長因子表達(dá)的調(diào)節(jié)[J];臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志;2001年02期

6 曲元明,韓韜,李桂林,王成偉;血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子抗體對膠質(zhì)瘤生長的影響[J];山東醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2001年02期

7 黃強(qiáng),董軍;膠質(zhì)瘤的分子外科治療[J];中國微侵襲神經(jīng)外科雜志;2001年04期

8 葉明,周岱,周幽心,王瑋,傅建新,黃煜倫;血管內(nèi)皮生長因子在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)[J];腫瘤;2002年06期

9 顧宇翔,陳銜城,王宇倩;膠質(zhì)瘤對親細(xì)胞非均質(zhì)分子脂質(zhì)和幾種藥物敏感性的比較[J];復(fù)旦學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2003年02期

10 王成偉 ,劉福生 ,曲元明 ,李桂林;血管內(nèi)皮生長因子抗體抑制膠質(zhì)瘤生長的實(shí)驗(yàn)研究[J];中華神經(jīng)外科雜志;2003年01期

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1 李飛;李梅;盧佳友;朱剛;林江凱;孟輝;吳南;陳志;馮華;;脂質(zhì)微區(qū)干擾劑甲基-β-環(huán)糊精影響C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵襲和遷移的體外實(shí)驗(yàn)研究[A];中國醫(yī)師協(xié)會(huì)神經(jīng)外科醫(yī)師分會(huì)第四屆全國代表大會(huì)論文匯編[C];2009年

2 吳安華;王運(yùn)杰;Ohlfest JR;Wei Chen;Low WC;;膠質(zhì)瘤的生物治療-從實(shí)驗(yàn)室到臨床[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)神經(jīng)外科學(xué)分會(huì)第九次學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2010年

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10 黃強(qiáng);;膠質(zhì)瘤生成細(xì)胞研究[A];第三屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會(huì)教育論文集[C];2004年

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1 衣曉峰　馮宇曦;中藥三氧化二砷有望成為治療膠質(zhì)瘤新藥[N];中國醫(yī)藥報(bào);2011年

2 記者 匡遠(yuǎn)深;讓膠質(zhì)瘤干細(xì)胞不再“繁殖”[N];健康報(bào);2011年

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4 白毅;人腦膠質(zhì)瘤基礎(chǔ)與應(yīng)用研究喜結(jié)“九大碩果”[N];中國醫(yī)藥報(bào);2006年

5 王德江；劉藏；王貴懷；曹勇；王新生；肖新如;交流最新進(jìn)展 提高診治水平[N];中國醫(yī)藥報(bào);2005年

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1 董軍;CUL4B在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤中的作用研究[D];山東大學(xué);2015年

2 張睿;循環(huán)miR-221/222在膠質(zhì)瘤診斷與預(yù)后中的價(jià)值與基于CED的中樞神經(jīng)系統(tǒng)給藥新方法的研究[D];山東大學(xué);2015年

3 許森林;ALDH1A1在膠質(zhì)瘤侵襲和結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移中的作用和機(jī)制[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

4 王嘯;靶向嵌段共聚物膠束在膠質(zhì)瘤磁共振成像、藥物輸送及治療的應(yīng)用[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

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1 張大慶;單核細(xì)胞趨化蛋白-1在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向膠質(zhì)瘤細(xì)胞趨化中的作用研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2012年

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本文編號：586472