本文關(guān)鍵詞：米非司酮對人腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞活性的作用及機(jī)理的研究

  更多相關(guān)文章： 膠質(zhì)瘤 米非司酮 18kDa轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白 線粒體凋亡

【摘要】：目的米非司酮(Mifepristone,RU486)是由人工合成的一種19-去甲類固醇激素,能夠有效的和孕酮受體、糖皮質(zhì)激素受體結(jié)合,并對上述激素有很強(qiáng)的拮抗作用,是臨床上一種常見的甾體類抗孕激素藥物。近期研究發(fā)現(xiàn),米非司酮對腫瘤的生長有較好的抑制作用,而其對孕酮和糖皮質(zhì)激素拮抗效應(yīng)也受到了廣泛關(guān)注。然而,米非司酮對腫瘤的作用機(jī)制仍存在很大的爭論。正常體內(nèi)孕酮激素和糖皮質(zhì)激素合成在線粒體完成,原料為膽固醇,通過線粒體膜表面的18 kDa轉(zhuǎn)位分子蛋白(18 kDa translocator protein,TSPO),轉(zhuǎn)運(yùn)至線粒體內(nèi),合成孕酮和糖皮質(zhì)激素。此過程中,TSPO的數(shù)量和活性對于孕酮和糖皮質(zhì)激素合成起到至關(guān)重要的作用,反過來,體內(nèi)孕酮和糖皮質(zhì)激素濃度對TSPO也存在負(fù)反饋?zhàn)饔?即孕酮和糖皮質(zhì)激素濃度高,負(fù)反饋調(diào)節(jié)TSPO表達(dá)下降,活性降低,從而減少膽固醇運(yùn)輸,減少孕酮和糖皮質(zhì)激素合成,反之亦然。TSPO是線粒體凋亡途徑(Mitochondrial apoptosis pathway)中關(guān)鍵調(diào)節(jié)蛋白,激活后可通過啟動細(xì)胞凋亡,在腫瘤生長過程中發(fā)揮抑制作用。因此,本研究的假說為:米非司酮通過抑制孕酮和糖皮質(zhì)激素活性,減少孕酮和糖皮質(zhì)激素對TSPO負(fù)反饋?zhàn)饔?增加TSPO表達(dá)及活性,通過線粒體凋亡途徑,增加細(xì)胞凋亡,抑制腫瘤生長。本實(shí)驗(yàn)通過米非司酮對人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U251體外實(shí)驗(yàn)研究,探討米非司酮是否對U251細(xì)胞株具有抑制細(xì)胞增殖活性作用,并觀察米非司酮對U251細(xì)胞凋亡的影響和TSPO、Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表達(dá)的變化,初步探討米非司酮誘導(dǎo)U251細(xì)胞凋亡的相關(guān)作用機(jī)制,為新型抗腫瘤藥物研發(fā)提供基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法第一部分使用CCK-8微板比色法檢測不同濃度的米非司酮(2.5、5、10、20、40μmol/L)組中U251細(xì)胞活性,臺盼蘭染色法檢測細(xì)胞死亡率。第二部分根據(jù)第一部分的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,選取米非司酮5、10、20 umol/L三個濃度組,通過Hoechst33258染色、流式細(xì)胞儀檢測U251細(xì)胞凋亡,采用蛋白印跡法和免疫熒光染色法檢測U251細(xì)胞中TSPO,Bcl-2、Bax、Caspase-3等凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)。結(jié)果第一部分細(xì)胞活性檢測結(jié)果顯示:與對照組比較,5、10、20、40(μmol/L)米非司酮組細(xì)胞存活率明顯降低,且與藥物濃度成正比,有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。低濃度米非司酮(2.5μmol/L)組對細(xì)胞存活率影響不明顯,與對照組相比無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。死亡細(xì)胞檢測結(jié)果顯示:米非司酮組U251細(xì)胞死亡率較對照組均有所增加,且與藥物濃度成正比。但當(dāng)米非司酮濃度增加至20、40μmol/L時,各組間抑制作用已無明顯差異。第二部分細(xì)胞凋亡檢測顯示,與對照組相比,米非司酮組細(xì)胞凋亡率增加明顯,且一定范圍內(nèi)與藥物濃度成正比,其中10μmol/L米非司酮濃度組TSPO的表達(dá)增加最明顯(P0.05)。凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3在米非司酮各濃度組中均有表達(dá),其中20μmol/L濃度組Bcl-2蛋白表達(dá)明顯低于對照組(P0.05),而Bax、Caspase-3蛋白表達(dá)在20μmol/L濃度組中明顯高于對照組(P0.05)。結(jié)論(1)米非司酮在適當(dāng)濃度范圍內(nèi)對膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞有增殖抑制作用,促進(jìn)細(xì)胞凋亡的作用;(2)米非司酮對膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞有促凋亡作用,其機(jī)制可能與促進(jìn)TSPO表達(dá),啟動線粒體凋亡途徑有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：膠質(zhì)瘤 米非司酮 18kDa轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白 線粒體凋亡
【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R739.41
【目錄】：

• 中英文縮寫對照詞表6-7
• 中文摘要7-9
• Abstract9-12
• 引言12-18
• 參考文獻(xiàn)14-18
• 第一部分 米非司酮對膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞增殖的影響18-28
• 1 材料19-21
• 1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞19-20
• 1.2 主要試劑20
• 1.3 主要儀器20-21
• 1.4 主要試劑配制21
• 2 方法21-23
• 2.1 細(xì)胞培養(yǎng)21-22
• 2.2 CCK-8 微板比色法檢測細(xì)胞活性22-23
• 2.3 臺盼蘭染色法檢測細(xì)胞死亡率23
• 2.4 統(tǒng)計學(xué)分析23
• 3 結(jié)果23-25
• 3.1 細(xì)胞活性檢測結(jié)果23-24
• 3.2 死亡細(xì)胞檢測結(jié)果24-25
• 4 討論25-26
• 參考文獻(xiàn)26-28
• 第二部分 米非司酮誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞凋亡及機(jī)理28-46
• 1 材料29-31
• 1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞29
• 1.2 主要試劑29-30
• 1.3 主要儀器30-31
• 1.4 主要試劑配制31
• 2 方法31-35
• 2.1 細(xì)胞培養(yǎng)31
• 2.2 Hoechst33258染色法觀察細(xì)胞核染色形態(tài)31-32
• 2.3 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡(Annexin V-FITC/PI雙標(biāo)法)32
• 2.4 免疫細(xì)胞化學(xué)染色法及免疫印跡法檢測TSPO蛋白表達(dá)32-34
• 2.5 免疫印跡法檢測Bcl-2、Bax、Caspase-3 蛋白表達(dá)34-35
• 2.6 統(tǒng)計學(xué)分析35
• 3 結(jié)果35-42
• 3.1 凋亡細(xì)胞核形態(tài)檢測結(jié)果35
• 3.2 細(xì)胞凋亡率檢測結(jié)果35-37
• 3.3 細(xì)胞TSPO蛋白表達(dá)檢測結(jié)果37-39
• 3.4 Bcl-2、Bax、Caspase-3 凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)檢測結(jié)果39-42
• 4 討論42-43
• 參考文獻(xiàn)43-46
• 綜述46-64
• 參考文獻(xiàn)55-64
• 致謝64-65
• 攻讀碩士期間發(fā)表的論文65

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本文編號：582312