本文關(guān)鍵詞：EBV感染的B-NHL細(xì)胞系IGVH基因分子特征及抗原選擇

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【摘要】：B-NHL分類極其復(fù)雜,占淋巴瘤的70-80%,其發(fā)病的分子機(jī)制一直是研究熱點(diǎn)。EBV是一種γ-1型皰疹病毒,與多種腫瘤有關(guān),如B-NHL中的伯基特淋巴瘤(BL)及DLBCL中的亞型-老年性EBV陽(yáng)性DLBCL都有較高的EBV感染率。EBV的致病機(jī)制極其復(fù)雜,它可能通過(guò)自身基因組整合到宿主細(xì)胞基因組中或者表達(dá)其基因產(chǎn)物,直接或間接的引起宿主細(xì)胞的異常。p53基因是迄今為止發(fā)現(xiàn)的與人類多種腫瘤相關(guān)性最高的基因。作為一種腫瘤抑制基因,野生型p53基因常常通過(guò)突變或缺失導(dǎo)致P53蛋白功能異常而誘導(dǎo)腫瘤發(fā)生。在惡性淋巴瘤中,p53突變的發(fā)生率達(dá)5-25%。在DLBCL患者中,p53突變會(huì)降低患者的完全緩解率,且對(duì)總體生存率有顯著負(fù)效應(yīng)。 作為成熟B細(xì)胞正常表達(dá)的基因,免疫球蛋白重鏈(IGH)基因包括三個(gè)框架區(qū)(FRs)和三個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)(CDRs)。在生發(fā)中心遭遇抗原識(shí)別后,IGH發(fā)生體細(xì)胞超突變(SHM),即IG基因的V段產(chǎn)生高頻點(diǎn)突變,致使B細(xì)胞產(chǎn)生高親合力的IG分子。這個(gè)過(guò)程易受內(nèi)、外因素(如個(gè)體遺傳差異、病毒感染等)干擾而出現(xiàn)差異,構(gòu)成了淋巴瘤發(fā)生的重要高危因素。我們前期研究還發(fā)現(xiàn)不同的淋巴瘤類型患者攜帶的IGVH基因片段有偏向性[4],且與某些淋巴瘤的預(yù)后相關(guān)。EBV作為淋巴瘤相關(guān)病毒,是否作為一種特定抗原,在淋巴瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起作用?其可能的機(jī)制有哪些? 我們選取了8株B-NHL細(xì)胞系(分別來(lái)自BL, DLBCL和MCL),分別用PCR、原位雜交和IHC方法檢測(cè)8株細(xì)胞系中LMP1、LMP2、EBER基因和蛋白表達(dá),發(fā)現(xiàn)5株細(xì)胞系(Raji、Daudi、Namalwa、OCI-ly10和OCI-ly19)攜帶EBV�；蛲蛔儥z測(cè)分析發(fā)現(xiàn)8株B-NHL細(xì)胞p53基因突變主要集中于7號(hào)外顯子,所有突變均為點(diǎn)突變,攜帶EBV的B-NHL細(xì)胞系攜帶3個(gè)p53突變熱點(diǎn)及4個(gè)Loop-L3位點(diǎn)突變,提示預(yù)后不良。同時(shí),我們用PCR-GeneScan、測(cè)序及突變分析IGVH基因重排、突變、基因片段的使用情況及互補(bǔ)決定區(qū)(CDR3)的分子特征。發(fā)現(xiàn)除Pfeiffer擴(kuò)增陰性外,其余7株均為克隆重排。測(cè)序成功的7株細(xì)胞株中,除Jeko-1未發(fā)生突變外,其余均攜帶突變型IGVH基因,主要是點(diǎn)突變和核苷酸的替換,突變頻率在2.4%至21.2%之間,平均為10.7%；而且EBV陽(yáng)性的2株細(xì)胞(Daudi和OCI-ly19)呈現(xiàn)抗原選擇(R/S1.5)。同時(shí)發(fā)現(xiàn)7株細(xì)胞系偏向性使用VH3(3/7)和VH4(3/7)基因家族,以VH3-21(2/7)和VH4-4(2/7)為主；D片段和J片段則偏向性使用D3和J4片段。偏向使用VH3-21的兩株EBV陽(yáng)性細(xì)胞系(Raji與OCI-ly19)兩者CDR3區(qū)的堿基序列及其編碼的氨基酸一致；另兩株EBV陽(yáng)性細(xì)胞系(Namalwa和OCI-ly10)偏向使用VH4-4,也具有相同的互補(bǔ)決定區(qū)。 綜上所述,本研究發(fā)現(xiàn)8株B-NHL細(xì)胞系p53基因突變主要集中于7號(hào)外顯子,且EBV陽(yáng)性的B-NHL細(xì)胞系存在3個(gè)p53突變熱點(diǎn)及4個(gè)Loop-L3位點(diǎn)突變。EBV陽(yáng)性的B-NHL細(xì)胞系攜帶突變型IGVH基因,存在抗原選擇；同時(shí)偏向性使用VH3-21和VH4-4片段,并且具有特征性的互補(bǔ)決定區(qū),提示特定抗原(可能是EB病毒)在淋巴瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的被識(shí)別和驅(qū)動(dòng)作用,為淋巴瘤發(fā)病的分子機(jī)制和靶向治療提供了線索和依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：B-NHL EBV p53基因 IGVH基因 克隆重排 CDR3突變 偏向性/抗原選擇
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R733.1
【目錄】：

• 致謝4-5
• 中文摘要5-7
• Abstract7-10
• 縮略詞表10-12
• 目次12-13
• 1 前言13-19
• 2 主要的儀器設(shè)備、試劑及技術(shù)路線19-29
• 3 實(shí)驗(yàn)方法29-43
• 4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果43-58
• 5 討論58-63
• 6 結(jié)論63-64
• 參考文獻(xiàn)64-71
• 綜述71-78
• 參考文獻(xiàn)76-78
• 作者簡(jiǎn)歷及在讀期間所取得的科研成果78

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 譚運(yùn)年;EB病毒編碼的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)模擬分子研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(生理、病理科學(xué)與臨床分冊(cè));2003年06期

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本文編號(hào)：580179