本文關(guān)鍵詞：TWEAK通過外泌體介導(dǎo)巨噬細(xì)胞對卵巢癌轉(zhuǎn)移調(diào)控的研究

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【摘要】：第一部分TWEAK通過外泌體途徑介導(dǎo)巨噬細(xì)胞抑制上皮性卵巢癌的轉(zhuǎn)移目的:探討TWEAK是否可通過外泌體途徑介導(dǎo)巨噬細(xì)胞對上皮性卵巢癌轉(zhuǎn)移的調(diào)控作用。方法:1.PMA誘導(dǎo)人單核細(xì)胞系THP-1為貼壁的巨噬細(xì)胞,TWEAK刺激巨噬細(xì)胞24h后抽提外泌體,透射電鏡觀察其形態(tài);2.將THP-1來源的巨噬細(xì)胞分泌的外泌體用PKH67(green fluorescent membrane linker-dye)染料標(biāo)記,染料標(biāo)記后的外泌體刺激上皮性卵巢癌細(xì)胞株SKOV3 12h,DAPI染核后,用激光共聚焦顯微鏡觀察熒光的分布和強(qiáng)度;3.分別將PBS、巨噬細(xì)胞分泌的外泌體、TWEAK刺激后巨噬細(xì)胞分泌的外泌體與上皮性卵巢癌細(xì)胞株SKOV3、HO-8910PM共培養(yǎng)48h后,通過transwell實(shí)驗(yàn)檢測其遷移、侵襲能力。結(jié)果:透射電鏡可見巨噬細(xì)胞分泌的外泌體呈圓形,直徑在30-100nm;激光共聚焦顯微鏡結(jié)果示,PKH67標(biāo)記的外泌體主要分布在胞質(zhì),尤其圍繞核周分布;Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果示,與PBS空白對照組相比,巨噬細(xì)胞分泌的外泌體可提高卵巢癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力,而tweak刺激巨噬細(xì)胞后,其分泌的外泌體則可降低卵巢癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力。結(jié)論:THP-1來源的巨噬細(xì)胞分泌的外泌體可被卵巢癌細(xì)胞內(nèi)化,TWEAK可通過外泌體途徑逆轉(zhuǎn)巨噬細(xì)胞對上皮性卵巢癌的促轉(zhuǎn)移作用。第二部分分析TWEAK作用前后巨噬細(xì)胞釋放的外泌體包裹的mi RNA的表達(dá)譜,明確差異表達(dá)的mi RNA目的:明確TWEAK作用前后巨噬細(xì)胞釋放的外泌體中差異表達(dá)的mi RNA方法:用PMA誘導(dǎo)人單核細(xì)胞THP-1為巨噬細(xì)胞后,將TWEAK(0,200ng/ml)分別作用于巨噬細(xì)胞24小時(shí)后,取上清液抽提外泌體,沉淀后抽提RNA,用agilent人的mi RNA芯片進(jìn)行差異譜檢測。結(jié)果:芯片結(jié)果示TWEAK作用于巨噬細(xì)胞后,巨噬細(xì)胞釋放的外泌體中有55種mi RNA表達(dá)上調(diào),17種mi RNA表達(dá)下調(diào)。文獻(xiàn)報(bào)道證實(shí)有功能的表達(dá)上調(diào)的mi RNA有15種,其中包括mir-7、mir-148a、mir-140、mir-625等,表達(dá)下調(diào)的mi RNA有4種。結(jié)論:TWEAK作用前后巨噬細(xì)胞釋放的外泌體中包裹的mi RNA表達(dá)譜有差異,并選擇mir-7作為繼續(xù)研究的對象。第三部分研究TWEAK作用后巨噬細(xì)胞釋放的外泌體運(yùn)輸mi RNA抑制上皮性卵巢癌轉(zhuǎn)移的機(jī)制目的:探究TWEAK作用后巨噬細(xì)胞釋放的外泌體通過傳遞mi RNA抑制上皮性卵巢癌轉(zhuǎn)移的具體機(jī)制。方法:1.PMA誘導(dǎo)人單核細(xì)胞系THP-1為貼壁的巨噬細(xì)胞,TWEAK刺激巨噬細(xì)胞24h后抽提外泌體,分別將PBS、巨噬細(xì)胞分泌的外泌體、TWEAK刺激后巨噬細(xì)胞分泌的外泌體與上皮性卵巢癌細(xì)胞系SKOV3、HO-8910PM共培養(yǎng);2.共培養(yǎng)24h后分別提取兩細(xì)胞株的RNA,采用Real-time PCR方法檢測TWEAK刺激前后,巨噬細(xì)胞分泌的外泌體作用后上皮性卵巢癌細(xì)胞系中mir-7的表達(dá)情況;3.共培養(yǎng)48h后分別提取兩細(xì)胞株的蛋白質(zhì),采用Western Blot方法檢測上皮性卵巢癌細(xì)胞株中EGFR蛋白的表達(dá)情況,及其下游信號通路AKT和ERK蛋白的磷酸化及非磷酸化的表達(dá)情況。結(jié)果:Real-time PCR結(jié)果示TWEAK作用于巨噬細(xì)胞后,其分泌的外泌體與SKOV3、HO-8910PM細(xì)胞株共培養(yǎng)24h后,兩卵巢癌細(xì)胞株中mir-7的表達(dá)水平高于TWEAK作用前;Western Blot結(jié)果示TWEAK作用于巨噬細(xì)胞后,其分泌的外泌體與SKOV3、HO-8910PM細(xì)胞株共培養(yǎng)48h后,兩卵巢癌細(xì)胞株中EGFR蛋白表達(dá)下調(diào),且其下游信號通路AKT和ERK蛋白的磷酸化水平也降低,而總的AKT和ERK的表達(dá)則沒有改變。結(jié)論:TWEAK作用于巨噬細(xì)胞后,其分泌的外泌體可上調(diào)上皮性卵巢癌細(xì)胞系SKOV3、HO-8910PM中mir-7的表達(dá),下調(diào)mir-7靶蛋白EGFR的表達(dá)及其下游AKT和ERK信號通路的活化。
【關(guān)鍵詞】：TWEAK 外泌體 微小RNA 卵巢癌 巨噬細(xì)胞 轉(zhuǎn)移
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.31
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• ABSTRACT8-13
• 縮略詞表13-14
• 前言14-21
• 第一部分 TWEAK通過外泌體途徑介導(dǎo)巨噬細(xì)胞抑制上皮性卵巢癌的轉(zhuǎn)移21-37
• 引言21-22
• 材料與方法22-31
• 結(jié)果31-35
• 討論35-37
• 第二部分 分析TWEAK作用前后巨噬細(xì)胞釋放的外泌體包裹的miRNA的表達(dá)譜，明確差異表達(dá)的miRNA37-55
• 引言37-38
• 材料與方法38-46
• 結(jié)果46-52
• 討論52-55
• 第三部分 研究TWEAK作用后巨噬細(xì)胞釋放的外泌體運(yùn)輸miRNA抑制上皮性卵巢癌轉(zhuǎn)移的機(jī)制55-71
• 引言55-56
• 材料與方法56-65
• 結(jié)果65-69
• 討論69-71
• 結(jié)論71-72
• 參考文獻(xiàn)72-81
• 致謝81-85
• 碩士期間發(fā)表及待發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄85

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8 本報(bào)記者 侯嘉 通訊員 何新鄉(xiāng);今天你補(bǔ)硒了嗎[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2003年

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