本文關(guān)鍵詞：PKGⅡ?qū)ξ赴┘?xì)胞VEGFR2介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響及分子機(jī)制

  更多相關(guān)文章： PKG Ⅱ VEGFR2 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 胃癌細(xì)胞

【摘要】：研究目的:研究II型cGMP依賴性蛋白激酶(Type II cGMP dependent protein kinase,PKG II)對(duì)人胃癌細(xì)胞血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2(Vascular endothelial growth factor receptor 2,VEGFR2)介導(dǎo)的主要信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路及生物學(xué)效應(yīng)的影響,探討其相關(guān)的分子機(jī)制。研究方法:用編碼PKG II cDNA的腺病毒(Ad-PKG II)感染胃癌細(xì)胞株HGC-27和AGS細(xì)胞,使其高表達(dá)PKG II,并用特異性激動(dòng)劑8-pCPT-cGMP激活PKG II,用血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子-A(vascular endothelial growth factor A,VEGF-A)激活VEGFR2,進(jìn)行如下檢測(cè):采用Western Blot方法檢測(cè)相關(guān)蛋白表達(dá)和磷酸化水平;采用MTT法、Transwell法、Annexin V-FITC/PI法和Matrigel血管生成實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)細(xì)胞增殖、遷移、凋亡及新生血管形成;采用免疫共沉淀法檢測(cè)PKG II與VEGFR2之間的相互作用;采用免疫沉淀法聯(lián)合Western Blot法檢測(cè)PKG II對(duì)VEGFR2絲/蘇氨酸的磷酸化作用;采用位點(diǎn)突變法將VEGFR2的393位蘇氨酸(Thr393)、439位蘇氨酸(Thr439)和1231位絲氨酸(Ser1231)突變成丙氨酸,進(jìn)而研究PKG II作用于VEGFR2的特異性磷酸化位點(diǎn)。研究結(jié)果:1.PKG II阻斷VEGF-A引起的胃癌細(xì)胞VEGFR2酪氨酸磷酸化/活化,并抑制VEGF-A/VEGFR2介導(dǎo)的ERK1/2、MEK、Akt和mTOR的磷酸化/活化。2.PKG II抑制VEGF-A的促細(xì)胞增殖、遷移和血管生成作用及抗細(xì)胞凋亡作用。3.PKG II與VEGFR2相互結(jié)合,使其發(fā)生絲/蘇氨酸磷酸化。4.PKG II磷酸化VEGFR2的Thr439和Ser1231位點(diǎn),進(jìn)而阻斷VEGF-A對(duì)VEGFR2的激活。研究結(jié)論:PKG II通過(guò)結(jié)合VEGFR2并使其Thr439和Ser1231位點(diǎn)發(fā)生磷酸化,進(jìn)而阻斷VEGF-A對(duì)VEGFR2的激活,抑制VEGF-A/VEGFR2啟動(dòng)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),最終抑制VEGF-A/VEGFR2誘導(dǎo)的胃癌細(xì)胞的增殖和遷移;PKG II對(duì)VEGF-A/VEGFR2誘導(dǎo)的新生血管形成也有抑制作用,并拮抗VEGF-A/VEGFR2的抗凋亡效應(yīng)。結(jié)果初步闡明PKG II為一有效的抗癌因子。
【關(guān)鍵詞】：PKG Ⅱ VEGFR2 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 胃癌細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.2
【目錄】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-12
• 英文縮寫索引12-13
• 第一章 緒論13-20
• 1.1 胃癌的分子靶向治療13-14
• 1.2 VEGFR2的現(xiàn)狀14-15
• 1.2.1 VEGFR2的結(jié)構(gòu)與功能14
• 1.2.2 VEGFR2與腫瘤的關(guān)系14-15
• 1.3 PKG Ⅱ的研究背景15-18
• 1.3.1 PKG的分類與分布15-16
• 1.3.2 PKG Ⅱ的結(jié)構(gòu)16
• 1.3.3 PKG Ⅱ活性的調(diào)節(jié)16-17
• 1.3.4 PKG Ⅱ的主要功能17
• 1.3.5 PKG Ⅱ與腫瘤的聯(lián)系17-18
• 1.4 研究目的和研究意義18
• 1.4.1 研究目的18
• 1.4.2 研究意義18
• 1.5 研究?jī)?nèi)容和技術(shù)路線18-20
• 1.5.1 研究?jī)?nèi)容18-19
• 1.5.2 技術(shù)路線19-20
• 第二章 PKG Ⅱ抑制胃癌細(xì)胞VEGFR2的活化20-29
• 2.1 材料和方法20-24
• 2.1.1 材料20-23
• 2.1.2 方法23-24
• 2.2 結(jié)果24-27
• 2.2.1 VEGFR2在胃癌細(xì)胞HGC-27和AGS中高表達(dá)24-25
• 2.2.2 PKG Ⅱ阻斷VEGF-A誘導(dǎo)的VEGFR2酪氨酸1175位點(diǎn)磷酸化25-27
• 2.3 討論27-29
• 第三章 PKG Ⅱ抑制胃癌細(xì)胞VEGFR2介導(dǎo)的MAPK/ERK和PI3K/Akt信號(hào)通路29-39
• 3.1 材料和方法29-30
• 3.1.1 材料29-30
• 3.1.2 方法30
• 3.2 結(jié)果30-36
• 3.2.1 PKG II抑制胃癌細(xì)胞VEGF-A/VEGFR2啟動(dòng)的MAPK/ERK信號(hào)通路30-34
• 3.2.1.1 PKG Ⅱ抑制VEGF-A/VEGFR2-MAPK/ERK通路中ERK1/2 的磷酸化31-32
• 3.2.1.2 PKG Ⅱ抑制VEGF-A /VEGFR2-MAPK/ERK通路中MEK1/2 磷酸化32-34
• 3.2.2 PKG II抑制胃癌細(xì)胞VEGF-A/VEGFR2啟動(dòng)的PI3K/Akt信號(hào)通路34-36
• 3.2.2.1 PKG Ⅱ抑制VEGF-A/VEGFR2-PI3K/Akt通路中Akt的磷酸化34-35
• 3.2.2.2 PKG Ⅱ抑制VEGF-A /VEGFR2-PI3K/Akt通路中mTOR的磷酸化35-36
• 3.3 討論36-39
• 第四章 PKG II對(duì)VEGF-A/VEGFR2調(diào)控的胃癌細(xì)胞增殖、遷移、凋亡及血管形成的影響39-55
• 4.1 材料和方法39-42
• 4.1.1 材料39-40
• 4.1.2 方法40-42
• 4.2 結(jié)果42-51
• 4.2.1 PKG II對(duì)VEGF-A/VEGFR2介導(dǎo)的胃癌細(xì)胞增殖的影響42-45
• 4.2.1.1 PKG II抑制VEGF-A誘導(dǎo)的增殖活動(dòng)42-43
• 4.2.1.2 PKG II抑制VEGF-A誘導(dǎo)的PCNA表達(dá)增加43-45
• 4.2.2 PKG II對(duì)VEGF-A/VEGFR2介導(dǎo)的胃癌細(xì)胞遷移活動(dòng)的影響45-48
• 4.2.2.1 PKG II抑制VEGF-A誘導(dǎo)的細(xì)胞遷移45-46
• 4.2.2.2 PKG II抑制VEGF-A引起的MMP2蛋白表達(dá)增加46-48
• 4.2.3 PKG II對(duì)胃癌細(xì)胞VEGF-A/VEGFR2介導(dǎo)的抗凋亡效應(yīng)的抑制48-50
• 4.2.3.1 PKG II抑制VEGF-A誘導(dǎo)的抗凋亡效應(yīng)48
• 4.2.3.2 PKG II對(duì)VEGF-A介導(dǎo)的Bcl-2 和Bax表達(dá)的影響48-50
• 4.2.4 PKG II拮抗VEGF-A誘導(dǎo)的新生血管生成50-51
• 4.3 討論51-55
• 4.3.1 PKG II抑制VEGF-A誘導(dǎo)的胃癌細(xì)胞增殖51-52
• 4.3.2 PKG II拮抗VEGF-A誘導(dǎo)的胃癌細(xì)胞遷移52
• 4.3.3 PKG II抑制VEGF-A誘導(dǎo)的抗凋亡效應(yīng)52-54
• 4.3.4 PKG II拮抗VEGF-A誘導(dǎo)的新生血管生成54-55
• 第五章 PKG II阻斷VEGFR2活化的分子機(jī)制的研究55-67
• 5.1 材料和方法55-60
• 5.1.1 材料55-57
• 5.1.2 方法57-60
• 5.2 結(jié)果60-64
• 5.2.1 PKG II與VEGFR2相互作用60-61
• 5.2.2 PKG II誘導(dǎo)VEGFR2絲/蘇氨酸磷酸化61-62
• 5.2.3 PKG II不能誘導(dǎo)突變體VEGFR2-T439A和VEGFR2-S1231A發(fā)生絲/蘇氨酸磷酸化62-63
• 5.2.4 PKG II通過(guò)磷酸化VEGFR2的T439和S1231來(lái)抑制其活化63-64
• 5.3 討論64-67
• 第六章 結(jié)論和展望67-68
• 6.1 主要結(jié)論67
• 6.2 展望67-68
• 參考文獻(xiàn)68-80
• 致謝80-81
• 攻讀碩士期間發(fā)表的論文81

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