本文關(guān)鍵詞：標簽蛋白MBP納米抗體的制備以及miR-4293、miR-608多態(tài)性與ESCC易感性的研究

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【摘要】：隨著功能基因組學及蛋白質(zhì)組學的快速發(fā)展,標簽蛋白以及納米抗體都各自發(fā)揮著重要的作用。MBP(麥芽糖結(jié)合蛋白)是現(xiàn)代分子克隆中一種常用的標簽蛋白,目前該蛋白不僅被用于蛋白純化中來增加易形成包涵體的目的蛋白的溶解性,而且還被用來與目的蛋白融合后利用pull-down等實驗方法來研究蛋白互作功能;納米抗體則因其具有穩(wěn)定性高、特異性高、溶解性好等優(yōu)點而廣泛應(yīng)用于生物及醫(yī)學方面的多個領(lǐng)域。鑒于MBP標簽的重要功能及納米抗體所具有的多種優(yōu)點,我們希望能夠獲得針對MBP蛋白的納米抗體。在該項研究中,我們首先將純化的抗原MBP蛋白免疫健康雙峰駝,以雙峰駝的外周血為材料建立納米抗體的免疫文庫,然后利用噬菌體展示技術(shù),通過“吸附-洗脫-擴增”的親和篩選路線來對特異抗體進行淘選、富集,通過ELISA來獲得與MBP能特異結(jié)合的陽性克隆,最后利用pull-down方法來驗證我們得到的納米抗體是否能與抗原MBP具有相互作用的功能。通過以上方法,我們成功構(gòu)建了雙峰駝的納米抗體文庫,最終篩選并鑒定出能夠與MBP相互作用的納米抗體�；趯嶒炇业牧硗庖粋�研究方向,我們還進行了基因多態(tài)性與癌癥易感型的關(guān)聯(lián)研究。目前我國食管癌的發(fā)病率是全球平均發(fā)病率的7倍多,居世界第一位,其中90%以上是食管鱗狀細胞癌(Esophageal Squamous Cell Carcinoma,ESCC),而遺傳因素是影響ESCC的重要原因。由于microRNA及其多態(tài)性在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用,我們通過數(shù)據(jù)庫及文獻搜索后確定了miR-4293種子區(qū)SNP位點rs12220909 GC及miR-608成熟區(qū)非種子區(qū)的SNP位點rs4919510 CG,擬通過病例-對照的研究方法來確定這兩個功能性MirSNPs與ESCC易感性的關(guān)系。結(jié)果發(fā)現(xiàn),在我們所研究的773例ESCC病例和882例正常對照人群中,rs12220909 GC位點與ESCC的發(fā)病風險具有顯著相關(guān)性:突變基因型GC/CC能夠顯著降低ESCC的發(fā)病風險(adjusted OR=0.77,95%CI:0.61-0.96);等位基因模型顯示,突變等位基因C與野生型的等位點基因G相比,使ESCC的發(fā)病風險降低了23%(95%CI:0.63-0.93);對遺傳模型進行的分層分析顯示,吸煙及飲酒因素對該位點具有不同的影響。但是對于已被證明與多種癌癥相關(guān)的mi R-608rs4919510 CG位點,在我們所研究的遺傳模型中并未觀察到其與ESCC的發(fā)生具有相關(guān)性。我們的結(jié)果為進一步探究miR-4293在ESCC中所起的功能作用打下了基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：MBP 納米抗體 噬菌體展示 ESCC MirSNP
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.1
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 第一部分 標簽蛋白MBP納米抗體的制備10-57
• 第一章 序言10-18
• 1.1 抗體10-12
• 1.2 納米抗體12-17
• 1.3 標簽蛋白MBP17-18
• 第二章 抗原蛋白MBP的制備18-25
• 2.1 材料與方法18-23
• 2.2 實驗結(jié)果23-24
• 2.3 討論24-25
• 第三章 單域重鏈抗體噬菌體展示文庫的構(gòu)建25-38
• 3.1 材料與方法26-34
• 3.2 實驗結(jié)果34-37
• 3.3 討論37-38
• 第四章 抗MBP單域重鏈抗體的淘選及鑒定38-48
• 4.1 材料與方法38-43
• 4.2 實驗結(jié)果43-46
• 4.3 討論46-48
• 第五章 結(jié)論48-49
• 參考文獻49-57
• 第二部分MIR-4293、MIR-608多態(tài)性與ESCC易感性的關(guān)聯(lián)研究57-79
• 第一章 緒論57-62
• 1.1 我國食管癌的現(xiàn)狀57-58
• 1.2 microRNA簡介58-61
• 1.3 miR-608及miR-4293的相關(guān)SNP研究61-62
• 第二章 MIR-608 RS4919510及MIR-4293 RS12220909與ESCC易感性的研究62-73
• 2.1 材料與方法62-68
• 2.2 實驗結(jié)果68-71
• 2.3 討論71-73
• 2.4 結(jié)論73
• 參考文獻73-79
• 碩士期間發(fā)表論文79-80
• 致謝80-81

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本文編號：569978