本文關(guān)鍵詞：Hedgehog-Gli信號通路在骨髓基質(zhì)細胞對急性髓系白血病細胞凋亡影響中的作用及機制研究

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【摘要】：目的:探索骨髓基質(zhì)細胞HS-5對急性髓系白血病細胞HL-60凋亡的影響及其可能機制,為急性髓系白血病的治療提供理論依據(jù)。方法:(1)應(yīng)用骨髓基質(zhì)細胞HS-5與急性髓系白血病細胞HL-60建立體外共培養(yǎng)模型從而模擬體內(nèi)骨髓微環(huán)境對白血病細胞凋亡的影響。應(yīng)用CCK8試劑盒檢測不同實驗組間HL-60細胞增殖情況;Annexin V-FITC/PI雙染流式細胞儀檢測各組HL-60細胞凋亡率;PI單染流式細胞儀檢測各組HL-60細胞周期時相分布;應(yīng)用掃描電鏡觀察共培養(yǎng)條件下HS-5骨髓基質(zhì)細胞與HL-60急性髓系白血病細胞的位相特征;半定量RT-PCR等方法檢測各實驗組HL-60細胞Hedgehog信號通路組成成分GLI 1基因及凋亡基因BCL-2、BCL-XL表達情況;免疫熒光法檢測HL-60細胞GLI 1蛋白表達狀況。結(jié)果:(1)與HS-5細胞共培養(yǎng)的HL-60細胞增殖速度快,用以GLI為靶點的Hedgehog信號通路抑制劑GANT61處理共培養(yǎng)體系后HL-60細胞增殖速度減慢。(2)與HS-5細胞共培養(yǎng)的HL-60細胞凋亡率減少,用以GLI為靶點的Hedgehog信號通路抑制劑GANT61處理共培養(yǎng)體系后HL-60細胞凋亡率增加。(3)在共培養(yǎng)48h時,HL-60細胞阻滯于G0/G1期,G0/G1期的細胞比例明顯增多,此種情況持續(xù)到共培養(yǎng)72h。(4)骨髓基質(zhì)細胞HS-5與急性髓系白血病細胞HL-60共培養(yǎng)時,HL-60細胞與骨髓基質(zhì)細胞HS-5粘附生長,共培養(yǎng)條件下,掃描電鏡觀察見到部分HL-60細胞生長入骨髓基質(zhì)細胞層。(5)RT-PCR凝膠電泳結(jié)果顯示,共培養(yǎng)體系中HL-60細胞GLI 1 m RNA表達上調(diào),抑凋亡基因BCL-2和BCL-XL的m RNA表達上調(diào)。(6)免疫熒光法檢測GLI 1蛋白表達狀況:共培養(yǎng)體系中HL-60細胞GLI 1蛋白表達上調(diào)。結(jié)論:(1)骨髓基質(zhì)細胞對急性髓系白血病細胞具有促進增殖作用。(2)骨髓基質(zhì)細胞對急性髓系白血病細胞具有抑制凋亡作用。(3)骨髓基質(zhì)細胞激活急性髓系白血病細胞中的Hedgehog信號通路進而上調(diào)下游靶基因BCL-2和BCL-XL。
【關(guān)鍵詞】：白血病 髓樣 急性 GANT61 Hedgehog-GLI信號通路
【學(xué)位授予單位】：石河子大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R733.71
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-7
• 英文縮略表7-11
• 前言 (Introduction)11-13
• 材料與方法（Materials & Methods）13-25
• 1 實驗材料13-16
• 1.1 主要儀器13
• 1.2 主要試劑13-14
• 1.3 主要試劑的配制14-15
• 1.4 實驗耗材15-16
• 2 實驗方法16-25
• 2.1 細胞株培養(yǎng)16-17
• 2.1.1 骨髓基質(zhì)細胞HS-5 的換液、傳代及凍存16-17
• 2.1.1.1 骨髓基質(zhì)細胞HS-5 的換液16
• 2.1.1.2 骨髓基質(zhì)細胞HS-5 的傳代16
• 2.1.1.3 骨髓基質(zhì)細胞HS-5 的凍存16-17
• 2.1.2 人急性早幼粒白血病細胞HL-60的換液、傳代及凍存17
• 2.1.2.1 人急性早幼粒白血病細胞HL-60的換液17
• 2.1.2.2 人急性早幼粒白血病細胞HL-60的傳代17
• 2.1.2.3 人急性早幼粒白血病細胞HL-60的傳代17
• 2.2 臺盼藍染色法計數(shù)細胞及鑒定細胞活力17-18
• 2.3 共培養(yǎng)體系的建立18
• 2.4 掃描電鏡觀察HL-60細胞和HS-5 細胞共培養(yǎng)的形態(tài)學(xué)表現(xiàn)18-19
• 2.5 骨髓基質(zhì)細胞HS-5 對HL-60細胞增殖特性的影響19
• 2.6 AnnexinⅤ-FITC/PI雙染檢測HL-60細胞凋亡率19
• 2.7 PI染色法流式細胞儀檢測HL-60細胞周期19-20
• 2.8 RT-PCR檢測HL-60細胞BCL-2、BL-XL、GLI1 mRNA表達的變化20-23
• 2.9 免疫熒光檢測HL-60細胞GLI1蛋白的表達23-24
• 2.10 統(tǒng)計學(xué)分析24-25
• 結(jié)果（Result）25-35
• 3.1 骨髓基質(zhì)細胞HS-5 和HL-60細胞共培養(yǎng)模型25-26
• 3.1.1 倒置顯微鏡觀察HL-60細胞與HS-5 細胞共培養(yǎng)形態(tài)25
• 3.1.2 掃描電鏡觀察HL-60細胞與HS-5 細胞共培養(yǎng)形態(tài)25-26
• 3.2 CCK8試劑盒檢測HL-60細胞增殖狀況26-27
• 3.3 HS-5 細胞對HL-60細胞凋亡率的影響27-30
• 3.4 HS-5 細胞對HL-60細胞周期的影響30-31
• 3.4.1 48h HS-5 細胞對HL-60細胞周期的影響30
• 3.4.2 72h HS-5 細胞對HL-60細胞周期的影響30-31
• 3.5 RT-PCR瓊脂糖凝膠電泳檢測結(jié)果31-33
• 3.5.1 總RNA電泳結(jié)果31-32
• 3.5.2 RT-PCR檢測HL60細胞中BCL-2、BCL-XL、GLI 1mRNA表達32-33
• 3.6 免疫細胞熒光檢測HL-60細胞GLI1蛋白的表達33-35
• 討論（Discussion）35-38
• 結(jié)論（Conclusion）38-39
• 參考文獻39-43
• 文獻綜述（Review）43-51
• 參考文獻48-51
• 致謝（Acknowledgements）51-52
• 作者簡介（Author Biography）52-53
• 導(dǎo)師評閱表53

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