本文關鍵詞：Hedgehog-Gli信號通路在骨髓基質細胞對急性髓系白血病細胞凋亡影響中的作用及機制研究

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【摘要】：目的:探索骨髓基質細胞HS-5對急性髓系白血病細胞HL-60凋亡的影響及其可能機制,為急性髓系白血病的治療提供理論依據。方法:(1)應用骨髓基質細胞HS-5與急性髓系白血病細胞HL-60建立體外共培養(yǎng)模型從而模擬體內骨髓微環(huán)境對白血病細胞凋亡的影響。應用CCK8試劑盒檢測不同實驗組間HL-60細胞增殖情況;Annexin V-FITC/PI雙染流式細胞儀檢測各組HL-60細胞凋亡率;PI單染流式細胞儀檢測各組HL-60細胞周期時相分布;應用掃描電鏡觀察共培養(yǎng)條件下HS-5骨髓基質細胞與HL-60急性髓系白血病細胞的位相特征;半定量RT-PCR等方法檢測各實驗組HL-60細胞Hedgehog信號通路組成成分GLI 1基因及凋亡基因BCL-2、BCL-XL表達情況;免疫熒光法檢測HL-60細胞GLI 1蛋白表達狀況。結果:(1)與HS-5細胞共培養(yǎng)的HL-60細胞增殖速度快,用以GLI為靶點的Hedgehog信號通路抑制劑GANT61處理共培養(yǎng)體系后HL-60細胞增殖速度減慢。(2)與HS-5細胞共培養(yǎng)的HL-60細胞凋亡率減少,用以GLI為靶點的Hedgehog信號通路抑制劑GANT61處理共培養(yǎng)體系后HL-60細胞凋亡率增加。(3)在共培養(yǎng)48h時,HL-60細胞阻滯于G0/G1期,G0/G1期的細胞比例明顯增多,此種情況持續(xù)到共培養(yǎng)72h。(4)骨髓基質細胞HS-5與急性髓系白血病細胞HL-60共培養(yǎng)時,HL-60細胞與骨髓基質細胞HS-5粘附生長,共培養(yǎng)條件下,掃描電鏡觀察見到部分HL-60細胞生長入骨髓基質細胞層。(5)RT-PCR凝膠電泳結果顯示,共培養(yǎng)體系中HL-60細胞GLI 1 m RNA表達上調,抑凋亡基因BCL-2和BCL-XL的m RNA表達上調。(6)免疫熒光法檢測GLI 1蛋白表達狀況:共培養(yǎng)體系中HL-60細胞GLI 1蛋白表達上調。結論:(1)骨髓基質細胞對急性髓系白血病細胞具有促進增殖作用。(2)骨髓基質細胞對急性髓系白血病細胞具有抑制凋亡作用。(3)骨髓基質細胞激活急性髓系白血病細胞中的Hedgehog信號通路進而上調下游靶基因BCL-2和BCL-XL。
【關鍵詞】：白血病 髓樣 急性 GANT61 Hedgehog-GLI信號通路
【學位授予單位】：石河子大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R733.71
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-7
• 英文縮略表7-11
• 前言 (Introduction)11-13
• 材料與方法（Materials & Methods）13-25
• 1 實驗材料13-16
• 1.1 主要儀器13
• 1.2 主要試劑13-14
• 1.3 主要試劑的配制14-15
• 1.4 實驗耗材15-16
• 2 實驗方法16-25
• 2.1 細胞株培養(yǎng)16-17
• 2.1.1 骨髓基質細胞HS-5 的換液、傳代及凍存16-17
• 2.1.1.1 骨髓基質細胞HS-5 的換液16
• 2.1.1.2 骨髓基質細胞HS-5 的傳代16
• 2.1.1.3 骨髓基質細胞HS-5 的凍存16-17
• 2.1.2 人急性早幼粒白血病細胞HL-60的換液、傳代及凍存17
• 2.1.2.1 人急性早幼粒白血病細胞HL-60的換液17
• 2.1.2.2 人急性早幼粒白血病細胞HL-60的傳代17
• 2.1.2.3 人急性早幼粒白血病細胞HL-60的傳代17
• 2.2 臺盼藍染色法計數細胞及鑒定細胞活力17-18
• 2.3 共培養(yǎng)體系的建立18
• 2.4 掃描電鏡觀察HL-60細胞和HS-5 細胞共培養(yǎng)的形態(tài)學表現(xiàn)18-19
• 2.5 骨髓基質細胞HS-5 對HL-60細胞增殖特性的影響19
• 2.6 AnnexinⅤ-FITC/PI雙染檢測HL-60細胞凋亡率19
• 2.7 PI染色法流式細胞儀檢測HL-60細胞周期19-20
• 2.8 RT-PCR檢測HL-60細胞BCL-2、BL-XL、GLI1 mRNA表達的變化20-23
• 2.9 免疫熒光檢測HL-60細胞GLI1蛋白的表達23-24
• 2.10 統(tǒng)計學分析24-25
• 結果（Result）25-35
• 3.1 骨髓基質細胞HS-5 和HL-60細胞共培養(yǎng)模型25-26
• 3.1.1 倒置顯微鏡觀察HL-60細胞與HS-5 細胞共培養(yǎng)形態(tài)25
• 3.1.2 掃描電鏡觀察HL-60細胞與HS-5 細胞共培養(yǎng)形態(tài)25-26
• 3.2 CCK8試劑盒檢測HL-60細胞增殖狀況26-27
• 3.3 HS-5 細胞對HL-60細胞凋亡率的影響27-30
• 3.4 HS-5 細胞對HL-60細胞周期的影響30-31
• 3.4.1 48h HS-5 細胞對HL-60細胞周期的影響30
• 3.4.2 72h HS-5 細胞對HL-60細胞周期的影響30-31
• 3.5 RT-PCR瓊脂糖凝膠電泳檢測結果31-33
• 3.5.1 總RNA電泳結果31-32
• 3.5.2 RT-PCR檢測HL60細胞中BCL-2、BCL-XL、GLI 1mRNA表達32-33
• 3.6 免疫細胞熒光檢測HL-60細胞GLI1蛋白的表達33-35
• 討論（Discussion）35-38
• 結論（Conclusion）38-39
• 參考文獻39-43
• 文獻綜述（Review）43-51
• 參考文獻48-51
• 致謝（Acknowledgements）51-52
• 作者簡介（Author Biography）52-53
• 導師評閱表53

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