本文關(guān)鍵詞：復(fù)方紫杉醇—拉帕替尼PEG-PLA膠束治療HER2陽(yáng)性乳腺癌的研究

  更多相關(guān)文章： 乳腺癌 HER2過表達(dá) PEG-PLA共聚物膠束 紫杉醇 拉帕替尼

【摘要】：高達(dá)30%的侵襲性乳腺癌患者過表達(dá)人表皮生長(zhǎng)因子受體2(HER2),這類乳腺癌患者的病情進(jìn)展較快,無(wú)瘤生存期及總生存期短。拉帕替尼臨床上主要用于治療復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移、對(duì)赫賽汀產(chǎn)生耐藥的HER2陽(yáng)性乳腺癌患者,具有諸多臨床優(yōu)勢(shì),但存在水溶性差的關(guān)鍵問題,難以制備注射劑；而目前口服拉帕替尼存在生物利用度低、給藥劑量大、頻次高等問題,導(dǎo)致患者的依從性降低。紫杉類藥物(紫杉醇、多西紫杉醇)是目前治療轉(zhuǎn)移性乳腺癌的主要用藥之一,但紫杉類藥物高度不溶于水,在注射劑制備時(shí)需要以聚氧乙烯蓖麻油及無(wú)水乙醇為助溶劑,由此可能誘發(fā)患者產(chǎn)生致命的過敏反應(yīng),也在一定程度上限制了紫杉類藥物的臨床應(yīng)用。兩類藥物均存在難溶性問題,且在臨床上有聯(lián)合應(yīng)用的需求。納米給藥系統(tǒng)的問世為臨床腫瘤的化學(xué)藥物治療創(chuàng)造了新的突破點(diǎn),以聚合物膠束作為載體既能解決藥物的溶解度問題,又能延長(zhǎng)藥物在體內(nèi)的循環(huán)時(shí)間；同時(shí)聚合物膠束的納米級(jí)粒徑能實(shí)現(xiàn)對(duì)腫瘤組織的被動(dòng)靶向作用。本文采用不同的處方工藝,制備了兩種復(fù)方紫杉醇-拉帕替尼的聚乙二醇-聚乳酸(PEG-PLA)膠束,以期增加藥物的溶解度,同時(shí)利用兩藥物的協(xié)同作用提高對(duì)HER2陽(yáng)性乳腺癌的治療效果。本文第一章將拉帕替尼與PEG-PLA結(jié)合制備LPT-PEG-PLA,再采用薄膜水化法制備L-PPM-PTX膠束,測(cè)得紫杉醇的載藥量與包封率分別為14.82-2.16%、84.21±9.83%,粒徑為25.80±0.47 nm,多分散指數(shù)為0.202±0.019。共聚焦熒光顯微鏡觀察見L-PPM-PTX能夠通過內(nèi)體進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)并釋放至胞質(zhì)。流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)藥物作用后L-PPM-PTX對(duì)于HER2過表達(dá)乳腺癌細(xì)胞株SKBr-3的抑制作用優(yōu)于PPM-PTX及L-PPM;而SKBr-3細(xì)胞周期分布結(jié)果提示其可以同時(shí)將細(xì)胞阻滯于G2/M及G1/S期。細(xì)胞核染色結(jié)果與流式細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果一致。為了解決薄膜水化法的不足,提高拉帕替尼的載藥量,第二章以DMSO為溶劑,采用透析法制備復(fù)方PPM-PL膠束。以膠束粒徑及載藥量為考察指標(biāo),在單因素考察的基礎(chǔ)上,采用星點(diǎn)設(shè)計(jì)-效應(yīng)面法對(duì)PPM-PL的處方和制備工藝進(jìn)行優(yōu)化,最優(yōu)處方工藝為：mPEG-PLA 50mg,拉帕替尼7.3 mg,紫杉醇7.3 mg,透析時(shí)間19.4 h。依據(jù)最優(yōu)處方制備的PPM-PL粒徑與多分散指數(shù)為20.05±0.09nm、0.193±0.01;拉帕替尼的載藥量與包封率為6.02±0.29%、43.88±2.21%,紫杉醇的載藥量與包封率為9.93±1.17%、75.60±9.85%。采用HER2過表達(dá)細(xì)胞株SKBr-3皮下注射構(gòu)建HER2陽(yáng)性乳腺癌裸鼠模型,利用小動(dòng)物活體成像系統(tǒng)考察游離DiR及載DiR膠束在荷瘤鼠體內(nèi)的分布情況,結(jié)果提示載DiR膠束組在荷瘤鼠腫瘤處的熒光強(qiáng)度顯著強(qiáng)于游離DiR組,說(shuō)明共聚物膠束的被動(dòng)靶向作用使其能在腫瘤部位蓄積,預(yù)示有利于抗腫瘤治療。通過腫瘤體積變化曲線考察PPM-PL對(duì)HER2陽(yáng)性乳腺癌的藥效學(xué),結(jié)果顯示PPM-PL的抗腫瘤效果優(yōu)于單藥或游離單藥聯(lián)合組。綜上所述,本文制備的PPM-PL提高了紫杉醇與拉帕替尼的溶解性,利用被動(dòng)靶向作用使藥物蓄積于腫瘤組織并緩慢釋放；將兩藥包裹于同一膠束中可以使其同時(shí)到達(dá)腫瘤組織發(fā)揮協(xié)同作用,提高藥物對(duì)HER2陽(yáng)性乳腺癌的治療效果。
【關(guān)鍵詞】：乳腺癌 HER2過表達(dá) PEG-PLA共聚物膠束 紫杉醇 拉帕替尼
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.9
【目錄】：

• 摘要8-10
• Abstract10-12
• 縮略詞表12-13
• 研究背景13-16
• 第一章 拉帕替尼-PEG-PLA紫杉醇膠束的制備、表征及其抗腫瘤效應(yīng)的體外研究16-33
• 第一節(jié) 拉帕替尼-PEG-PLA紫杉醇膠束的制備及表征16-23
• 1. 儀器和材料16-17
• 1.1 儀器16-17
• 1.2 材料17
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法17-19
• 2.1 復(fù)方紫杉醇-拉帕替尼PEG-PLA膠束(PPM-PL)制備工藝的探索17
• 2.2 PPM-PL粒徑測(cè)定17
• 2.3 PPM-PTX、L-PPM、L-PPM-PTX的制備17-18
• 2.4 L-PPM-PTX、PPM-PTX載藥量與包封率的測(cè)定18-19
• 2.4.1 紫杉醇HPLC分析的色譜條件18
• 2.4.2 載藥量與包封率的測(cè)定18-19
• 2.5 L-PPM-PTX、PPM-PTX的表征19
• 2.5.1 粒徑、Zeta電位測(cè)定19
• 2.5.2 透射電子顯微鏡鑒定19
• 2.6 體外釋放19
• 3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果19-23
• 3.1 復(fù)方紫杉醇-拉帕替尼PEG-PLA膠束(PPM-PL)制備工藝的探索19-20
• 3.2 L-PPM-PTX、PPM-PTX的載藥量與包封率20
• 3.3 L-PPM-PTX的表征20-22
• 3.3.1 粒徑與Zeta電位20-21
• 3.3.1.1 粒徑20-21
• 3.3.1.2 Zeta電位21
• 3.3.2 透射電鏡21-22
• 3.4 體外釋放22-23
• 第二節(jié) 拉帕替尼-PEG-PLA紫杉醇復(fù)方膠束抗腫瘤效應(yīng)的體外研究23-31
• 1. 儀器及材料23-24
• 1.1 儀器23
• 1.2 材料23-24
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法24-27
• 2.1 細(xì)胞復(fù)蘇24
• 2.2 細(xì)胞傳代24
• 2.3 細(xì)胞內(nèi)分布24
• 2.4 細(xì)胞毒作用(MTT法)24-25
• 2.4.1 分組設(shè)計(jì)24-25
• 2.4.2 實(shí)驗(yàn)操作25
• 2.5 細(xì)胞核染色25
• 2.5.1 分組設(shè)計(jì)25
• 2.5.2 實(shí)驗(yàn)操作25
• 2.6 細(xì)胞周期與凋亡分析(流式細(xì)胞技術(shù))25-26
• 2.6.1 細(xì)胞凋亡分析25-26
• 2.6.1.1 分組設(shè)計(jì)25-26
• 2.6.1.2 實(shí)驗(yàn)操作26
• 2.6.2 細(xì)胞周期阻滯分析26
• 2.6.2.1 分組設(shè)計(jì)26
• 2.6.2.2 碘化丙啶染色液的配制26
• 2.6.2.3 實(shí)驗(yàn)操作26
• 2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析26-27
• 3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果27-31
• 3.1 細(xì)胞內(nèi)分布27
• 3.2 細(xì)胞毒性27-28
• 3.3 細(xì)胞核染色28-29
• 3.4 細(xì)胞周期與凋亡分析(流式細(xì)胞技術(shù))29-31
• 3.4.1 細(xì)胞凋亡分析29-30
• 3.4.2 細(xì)胞周期分析30-31
• 本章討論與小結(jié)31-33
• 1. 討論31-32
• 2. 小結(jié)32-33
• 第二章 復(fù)方紫杉醇-拉帕替尼PEG-PLA膠束的工藝優(yōu)化及其在荷瘤鼠體內(nèi)分布和藥效的初步研究33-51
• 第一節(jié) 復(fù)方紫杉醇-拉帕替尼PGE-PLA膠束的制備工藝優(yōu)化及表征33-45
• 1. 儀器與材料33-34
• 1.1 儀器33-34
• 1.2 材料34
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法34-36
• 2.1 PPM-PL、PPM-LPT的制備34
• 2.2 膠束包封率和載藥量的測(cè)定34-35
• 2.3 PPM-PL制備工藝的單因素考察35
• 2.4 星點(diǎn)設(shè)計(jì)-效應(yīng)面法優(yōu)化處方35-36
• 2.4.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)35-36
• 2.4.2 模型擬合36
• 2.5 PPM-PL的表征36
• 3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果36-45
• 3.1 處方工藝單因素考察36-40
• 3.1.1 有機(jī)溶劑的選擇36-37
• 3.1.2 透析時(shí)間的影響37-38
• 3.1.3 溶劑體積的影響38-39
• 3.1.4 投藥量的影響39-40
• 3.2 星點(diǎn)設(shè)計(jì)-效應(yīng)面法優(yōu)化處方40-43
• 3.3 PPM-PL的表征43-45
• 3.3.1 粒徑與Zeta電位43
• 3.3.2 載藥量與包封率43-44
• 3.3.3 透射電鏡44-45
• 第二節(jié) 復(fù)方紫杉醇-拉帕替尼PGE-PLA膠束體內(nèi)藥效的初步研究45-49
• 1. 儀器與材料45-46
• 1.1 儀器45
• 1.2 材料45-46
• 1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物46
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法46-47
• 2.1 SKBr-3細(xì)胞的培養(yǎng)46
• 2.2 乳腺癌模型鼠的建立46
• 2.3 載DiR膠束在模型鼠體內(nèi)分布46
• 2.3.1 載DiR膠束的制備46
• 2.3.2 載DiR膠束在乳腺癌模型鼠體內(nèi)分布46
• 2.4 復(fù)方膠束體內(nèi)藥效學(xué)研究46-47
• 2.4.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)46-47
• 2.4.2 實(shí)驗(yàn)方法47
• 3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果47-49
• 3.1 載DiR膠束在乳腺癌模型鼠體內(nèi)分布47-48
• 3.2 復(fù)方膠束體內(nèi)藥效學(xué)研究48-49
• 本章討論與小結(jié)49-51
• 1. 討論49
• 2. 小結(jié)49-51
• 全文總結(jié)51-52
• 參考文獻(xiàn)52-56
• 綜述 人表皮生長(zhǎng)因子受體2(HER2)在腫瘤診斷治療中作用研究進(jìn)展56-73
• 參考文獻(xiàn)66-73
• 發(fā)表論文73-74
• 致謝74

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 吳昕;膀胱上皮腫瘤尿液差異蛋白的篩選[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2009年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 殷祥瑞;雙歧桿菌介導(dǎo)HSV-tk/GCV治療大鼠膀胱癌的實(shí)驗(yàn)研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2013年

2 馮旭;TURBT聯(lián)合羥基喜樹堿與吡柔比星膀胱灌注治療SBC的療效觀察及與臨床特征的關(guān)系[D];濟(jì)南大學(xué);2013年

3 汪向海;肺癌患者血清EMMPRIN、HER-2的檢測(cè)及臨床意義[D];皖南醫(yī)學(xué)院;2014年

，

本文編號(hào)：558589