本文關(guān)鍵詞：miR-146a對(duì)去勢(shì)抵抗性前列腺癌自噬的調(diào)控及其調(diào)控通路的初步探討

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【摘要】：目的本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀(guān)察去勢(shì)抵抗性前列腺癌患者標(biāo)本中癌組織內(nèi)自噬相關(guān)蛋白的表達(dá),并在體外實(shí)驗(yàn)中研究miR-146a對(duì)去勢(shì)抵抗性前列腺癌的白噬水平的影響,并初步探討miR-146a對(duì)去勢(shì)抵抗性前列腺癌調(diào)控自噬的分子機(jī)制。方法1、應(yīng)用脂質(zhì)體Lipofactmin2000轉(zhuǎn)染miR-146a和miRNA陰性對(duì)照(negative control, NC)至去勢(shì)抵抗性前列腺癌細(xì)胞系(DU-145和PC3細(xì)胞系),分別收集處理后6h、12h、24h、48h、72h的前列腺癌細(xì)胞,制成電鏡標(biāo)本觀(guān)察實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組細(xì)胞的自噬超微結(jié)構(gòu),并進(jìn)行對(duì)比。2、將發(fā)生自噬時(shí)間段的前列腺癌細(xì)胞系培養(yǎng)并提取蛋白,運(yùn)用Western blotting檢測(cè)微管相關(guān)蛋白1輕鏈3(LC3)的胞漿型(LC3-I)和膜型(LC3-II)的表達(dá)量改變3、臨床收集去勢(shì)抵抗性前列腺癌(castration resistant prostate cancer,CRPC)患者經(jīng)尿道前列腺電切病理標(biāo)本共6例,按照Gleason評(píng)分等于7分的1例和等于8分的3例以及大于8分的2例,用免疫組化的方法觀(guān)察6例標(biāo)本癌組織和癌旁組織自噬相關(guān)蛋白表達(dá)的改變4、應(yīng)用脂質(zhì)體Lipofactmin2000轉(zhuǎn)染分別miR-146a和對(duì)照的miRNA到相應(yīng)前列腺癌細(xì)胞系,應(yīng)用免疫熒光檢測(cè)自噬相關(guān)蛋白LC3的表達(dá)。結(jié)果1、將轉(zhuǎn)染miR-146a后6h、12h、24h、48h、72h的DU-145和PC3細(xì)胞系制成電鏡標(biāo)本發(fā)現(xiàn)DU-145轉(zhuǎn)染miR-146a24小時(shí)后實(shí)驗(yàn)組自噬體明顯增加,提示miR-146a對(duì)DU-145細(xì)胞系有促進(jìn)自噬的作用,PC-3細(xì)胞系各個(gè)時(shí)間段都無(wú)明顯差別。2、轉(zhuǎn)染24小時(shí)后DU-145細(xì)胞系的LC3-Ⅱ/Ⅰ的比值是對(duì)照組兩倍,提示自噬水平增強(qiáng)。3、將6例去勢(shì)抵抗性前列腺癌患者的標(biāo)本進(jìn)行免疫組化檢測(cè)發(fā)現(xiàn)癌組織的自噬水平較癌旁組織低,提示去勢(shì)抵抗性前列腺癌miR-146a的低水平導(dǎo)致自噬水平低。4、在熒光顯微鏡下檢測(cè)轉(zhuǎn)染,miR-146a的前列腺癌細(xì)胞系(DU-145)觀(guān)察到LC3表達(dá)增加。結(jié)論：1、miR-146a對(duì)去勢(shì)抵抗性前列腺癌細(xì)胞系DU-145有促進(jìn)自噬的作用,自噬發(fā)生的高峰時(shí)期在24小時(shí)左右。2、組織標(biāo)本中去勢(shì)抵抗性前列腺癌細(xì)胞因低表達(dá)miR-146a,因此自噬水平較癌旁組織低,側(cè)面提示1miR-146a能促進(jìn)CRPC自噬水平。
【關(guān)鍵詞】：去勢(shì)抵抗性前列腺癌 miR-146a 自噬
【學(xué)位授予單位】：東南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R737.25
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-9
• 縮略詞9-10
• 前言10-12
• 文獻(xiàn)綜述12-15
• 第一部分 材料和方法15-32
• 第二部分 實(shí)驗(yàn)結(jié)果32-36
• 第三部分 討論36-41
• 第四部分 結(jié)論41-42
• 致謝42-43
• 參考文獻(xiàn)43-47
• 作者簡(jiǎn)介47

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本文編號(hào)：557634