本文關(guān)鍵詞：木犀草素對(duì)乳腺癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移和上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)換的作用及其機(jī)制研究

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【摘要】：目的:研究木犀草素(luteolin)對(duì)乳腺癌(breast cancer)細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移和上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)換的作用并探討其分子機(jī)制。方法:1.在體外實(shí)驗(yàn),用不同濃度木犀草素分別處理高侵襲轉(zhuǎn)移性人乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231細(xì)胞和BT549細(xì)胞。劃痕實(shí)驗(yàn)及transwell實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)乳腺癌細(xì)胞的遷移、侵襲能力,評(píng)價(jià)木犀草素對(duì)乳腺癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移效應(yīng)的影響;細(xì)胞微球體形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)乳腺癌細(xì)胞的成球能力和流式細(xì)胞術(shù)(flow cytometry,FCM)分析細(xì)胞表面CD24/CD44的表達(dá),評(píng)價(jià)木犀草素對(duì)乳腺癌細(xì)胞干性化特征的影響;免疫熒光細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)乳腺癌細(xì)胞間質(zhì)型表面標(biāo)記分子Vimentin和細(xì)胞骨架微絲肌動(dòng)蛋白F-actin的表達(dá)和分布,定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(quantitative real-time polymerase chain reaction,QRT-PCR)和免疫印跡實(shí)驗(yàn)(western blot,WB)分別檢測(cè)乳腺癌細(xì)胞中上皮型標(biāo)記分子E-cadherin、Claudin-1,間質(zhì)型標(biāo)記分子N-cadherin、Vimentin以及上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的轉(zhuǎn)錄因子Snail、Slug的m RNA及蛋白表達(dá)水平,評(píng)價(jià)木犀草素對(duì)乳腺癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)換的影響。2.不同濃度木犀草素分別處理高侵襲轉(zhuǎn)移性人乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231細(xì)胞和BT549細(xì)胞,定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)和免疫印跡實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)乳腺癌細(xì)胞中b-catenin m RNA和蛋白表達(dá)水平。另外,分別轉(zhuǎn)染MDA-MB-231細(xì)胞目的基因b-catenin的腺病毒載體Ad-b-catenin和對(duì)照腺病毒載體Ad-GFP,運(yùn)用劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)過(guò)表達(dá)b-catenin對(duì)木犀草素影響乳腺癌細(xì)胞遷移侵襲效應(yīng)的逆轉(zhuǎn)作用;定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)以及免疫印跡實(shí)驗(yàn)分析上皮型標(biāo)記分子E-cadherin、Claudin-1,間質(zhì)型標(biāo)記分子N-cadherin、Vimentin以及上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的轉(zhuǎn)錄因子Snail、Slug的m RNA及蛋白表達(dá)水平,評(píng)價(jià)過(guò)表達(dá)b-catenin對(duì)木犀草素影響乳腺癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)換過(guò)程的作用。3.在體內(nèi)實(shí)驗(yàn),4-5周齡裸鼠隨機(jī)分為4組,包括空白對(duì)照組,木犀草素干預(yù)組,Ad-GFP+木犀草素組和Ad-b-catenin+木犀草素組�？瞻捉M和木犀草素干預(yù)組以皮下注射乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231(1×106/只)建立裸鼠原位乳腺癌模型,Ad-GFP+木犀草素組以皮下注射轉(zhuǎn)染帶GFP標(biāo)記的空載病毒的乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231(1×106/只)建立裸鼠原位乳腺癌模型,Ad-b-catenin+木犀草素組以皮下注射轉(zhuǎn)染帶目的基因b-catenin的病毒的乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231(1×106/只)建立裸鼠過(guò)表達(dá)b-catenin的原位乳腺癌模型。待原位腫瘤長(zhǎng)至體積約1cm3(14天)后,木犀草素干預(yù)組、Ad-GFP+木犀草素組和Ad-b-catenin+木犀草素組每三天腹腔注射木犀草素(100 mg/kg),空白對(duì)照組不做任何干預(yù)措施。8周后,處死小鼠,肺結(jié)節(jié)數(shù)計(jì)數(shù)、HE染色和Ki67檢測(cè)木犀草素對(duì)乳腺癌細(xì)胞肺轉(zhuǎn)移的影響以及過(guò)表達(dá)b-catenin對(duì)此影響的作用;免疫組織化學(xué)(immunohistochemistry,IHC)和免疫熒光組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)裸鼠原位腫瘤組織中間質(zhì)型標(biāo)記分子Vimentin、轉(zhuǎn)錄因子Slug及b-catenin的表達(dá)情況,評(píng)價(jià)木犀草素對(duì)乳腺癌腫瘤細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)換過(guò)程的影響及過(guò)表達(dá)b-catenin對(duì)此影響的作用。結(jié)果:1.木犀草素能劑量依賴性地抑制乳腺癌細(xì)胞系中MDA-MB-231細(xì)胞及BT549細(xì)胞的遷移和侵襲能力。2.木犀草素顯著抑制乳腺癌細(xì)胞的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)換過(guò)程。木犀草素使乳腺癌細(xì)胞從間質(zhì)樣形態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)樯掀有螒B(tài),改變細(xì)胞骨架微絲肌動(dòng)蛋白F-actin的表達(dá)和分布狀態(tài);木犀草素劑量依賴性地上調(diào)乳腺癌細(xì)胞中上皮型標(biāo)記分子E-cadherin、Claudin-1的表達(dá),下調(diào)間質(zhì)型標(biāo)記分子N-cadherin,Vimentin以及轉(zhuǎn)錄因子Snail、Slug的表達(dá),其中Slug的變化較Snail顯著。3.木犀草素明顯抑制乳腺癌細(xì)胞的成球能力和細(xì)胞表面CD24~(low)/CD44~(high)干性化標(biāo)記分子的表達(dá)。4.木犀草素劑量依賴性地抑制乳腺癌細(xì)胞中b-catenin蛋白和m RNA表達(dá)水平。5.過(guò)表達(dá)的b-catenin逆轉(zhuǎn)木犀草素對(duì)轉(zhuǎn)移性乳腺癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移和上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)換過(guò)程的抑制作用。6.木犀草素明顯減輕裸鼠乳腺癌腫瘤的肺轉(zhuǎn)移和抑制原位腫瘤細(xì)胞的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)換過(guò)程,而過(guò)表達(dá)的?-catenin逆轉(zhuǎn)木犀草素的這一保護(hù)作用。肺結(jié)節(jié)數(shù)計(jì)數(shù)、HE染色和Ki67結(jié)果顯示,裸鼠經(jīng)木犀草素干預(yù)后,肺上腫瘤結(jié)節(jié)數(shù)減少,而腫瘤中?-catenin過(guò)表達(dá)后,肺上腫瘤結(jié)節(jié)數(shù)增加;免疫組織化學(xué)和免疫熒光組織化學(xué)結(jié)果顯示,裸鼠經(jīng)木犀草素干預(yù)后,裸鼠原位腫瘤中上皮型分子Vimentin、轉(zhuǎn)錄因子Slug及分子?-catenin表達(dá)減少,當(dāng)?-catenin過(guò)表達(dá)后,Vimentin、Slug及?-catenin表達(dá)呈上調(diào)趨勢(shì)。結(jié)論:木犀草素能抑制乳腺癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移。這種抑制作用可能與木犀草素通過(guò)下調(diào)乳腺癌細(xì)胞?-catenin的表達(dá),隨后抑制其下游上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的轉(zhuǎn)錄因子特別是Slug的表達(dá),進(jìn)而下調(diào)間質(zhì)型標(biāo)記分子Vimentin和N-cadherin,上調(diào)上皮型標(biāo)記分子E-cadherin和Claudin-1的表達(dá),抑制乳腺癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)換有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：木犀草素 乳腺癌 侵襲轉(zhuǎn)移 上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)換 ?-catenin
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.9
【目錄】：

• 英漢縮略語(yǔ)名詞對(duì)照4-6
• 中文摘要6-10
• 英文摘要10-15
• 前言15-17
• 1 材料和方法17-34
• 1.1 材料17-24
• 1.2 方法24-34
• 2 結(jié)果34-48
• 2.1 木犀草素對(duì)乳腺癌細(xì)胞遷移的影響34-35
• 2.2 木犀草素對(duì)乳腺癌細(xì)胞侵襲的影響35-37
• 2.3 木犀草素對(duì)乳腺癌細(xì)胞形態(tài)的影響37
• 2.4 木犀草素對(duì)乳腺癌細(xì)胞中Vimentin及F-actin表達(dá)的影響37-38
• 2.5 木犀草素對(duì)乳腺癌細(xì)胞中上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)分子表達(dá)的影響38-40
• 2.6 木犀草素對(duì)乳腺癌細(xì)胞成球能力和細(xì)胞表面CD24~(low)/CD44~(high)表達(dá)的影響40-41
• 2.7 木犀草素對(duì)乳腺癌細(xì)胞中 b-catenin蛋白和m RNA表達(dá)的影響41-42
• 2.8 過(guò)表達(dá) b-catenin對(duì)木犀草素抑制乳腺癌細(xì)胞遷移作用的影響42-43
• 2.9 過(guò)表達(dá) b-catenin對(duì)木犀草素抑制乳腺癌細(xì)胞侵襲作用的影響43-44
• 2.10 過(guò)表達(dá) b-catenin對(duì)木犀草素抑制乳腺癌細(xì)胞中上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)分子蛋白水平和mRNA水平表達(dá)作用的影響44-45
• 2.11 木犀草素對(duì)裸鼠乳腺癌腫瘤肺轉(zhuǎn)移情況的影響45-47
• 2.12 木犀草素對(duì)裸鼠原位乳腺癌腫瘤中Vimentin、Slug及 b-catenin表達(dá)的影響47-48
• 3 討論48-52
• 結(jié)論52-53
• 參考文獻(xiàn)53-59
• 文獻(xiàn)綜述59-72
• 參考文獻(xiàn)66-72
• 致謝72-73
• 碩士期間發(fā)表的論文73

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 姜英;謝鯤鵬;霍洪楠;王麗夢(mèng);鄒偉;謝明杰;;木犀草素下調(diào)AEG-1和MMP-2的表達(dá)對(duì)血管生成和乳腺癌細(xì)胞侵襲性的抑制作用[J];生理學(xué)報(bào);2013年05期

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本文編號(hào)：556527