本文關(guān)鍵詞：標(biāo)簽蛋白GST納米抗體的制備以及rs11614913、rs2910164多態(tài)性與ESCC易感性的關(guān)聯(lián)研究

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【摘要】：駱駝血清中存在著一種天然缺失輕鏈的重鏈抗體,克隆其可變區(qū)獲得目前所知的最小抗原結(jié)合片段稱為納米抗體。納米抗體與傳統(tǒng)的抗體相比,具有分子量小、穩(wěn)定性好,易于表達(dá)等獨特的性質(zhì)。在抗體藥物的開發(fā)、醫(yī)學(xué)檢測、蛋白親和純化等方面具有廣闊的發(fā)展前景。谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶(GST)融合標(biāo)簽是目前應(yīng)用最為廣泛的融合標(biāo)簽之一。該標(biāo)簽蛋白不僅被應(yīng)用于蛋白質(zhì)的親和純化,還被應(yīng)用于融合蛋白的檢測以及蛋白質(zhì)之間的相互作用的檢測。鑒于GST標(biāo)簽蛋白的重要功能以及納米抗體所具有的特性,我們希望能夠獲得具有自主知識產(chǎn)權(quán)的GST蛋白特異性的納米抗體。本研究采用原核系統(tǒng)表達(dá)并純化抗原GST蛋白,免疫健康雙峰駝,以其外周血為材料建立納米抗體初級免疫文庫。然后利用噬菌體展示技術(shù)篩選富集抗原特異性的納米抗體,并通過ELISA獲得與GST蛋白特異性結(jié)合的陽性單克隆。最后利用GST pull-down技術(shù)來驗證我們得到的納米抗體與抗原GST之間是否能夠相互結(jié)合,以擴(kuò)展其后期的應(yīng)用。通過以上技術(shù),我們成功構(gòu)建了GST特異性的納米抗體文庫,并最終篩選獲得該蛋白特異性的納米抗體。此外,基于實驗室的另外一個研究方向,我們還進(jìn)行了基因多態(tài)性與癌癥易感性的關(guān)聯(lián)研究。食管癌是世界常見的惡性腫瘤之一,我國食管癌的發(fā)病類型主要以食管鱗狀細(xì)胞癌(Esophageal Squamous Cell Carcinoma,ESCC)為主。microRNA(mi RNA)是一種非編碼RNA,可在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控基因的表達(dá),與癌癥的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。位于miRNA上的SNP位點可以通過改變其表達(dá)量或結(jié)構(gòu)來影響腫瘤的發(fā)生與發(fā)展。本研究通過數(shù)據(jù)庫選定兩個位于miRNA前體成熟區(qū)域的SNP位點miRNA-146a rs2910164(C/G)和miRNA-196a rs11614913(C/U)為研究對象,通過病例-對照的研究方法來檢測這兩個MirSNPs與ESCC易感性的關(guān)系。研究結(jié)果表明:在我們所研究的1400例ESCC病例和2185例正常對照人群中,rs11614913 TC位點與ESCC的發(fā)病風(fēng)險具有顯著相關(guān)性:與野生基因型TT相比,CC基因型能夠顯著增加ESCC的風(fēng)險(OR=1.11,95%CI:1.01-1.22,P=0.049);在純合子模型和隱性模型下進(jìn)行分層分析顯示,在非飲酒組中,CC基因型都能夠顯著增加ESCC的風(fēng)險(純合模型下:OR=1.14,95%CI:1.00-1.30,P=0.046,隱性模型下OR=1.13,95%CI:1.01-1.27,P=0.029)。但是對于已被證明與多種癌癥相關(guān)的miRNA-146a rs2910164(C/G)位點,在我們的研究中未發(fā)現(xiàn)該位點與ESCC之間存在顯著的相關(guān)性。
【關(guān)鍵詞】：GST 納米抗體 噬菌體展示 ESCC MirSNP
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：Q503;R735.1
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 第一部分 標(biāo)簽蛋白GST納米抗體的制備10-49
• 第一章 序言10-16
• 1.1 抗體及抗體庫技術(shù)10-11
• 1.2 納米抗體技術(shù)的研究進(jìn)展11-15
• 1.3 谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶（GST）在生物研究領(lǐng)域的應(yīng)用15-16
• 第二章 抗原蛋白GST的表達(dá)與純化16-22
• 2.1 材料與方法17-20
• 2.2 實驗結(jié)果20-21
• 2.3 討論21-22
• 第三章 納米抗體噬菌體展示文庫的構(gòu)建22-35
• 3.1 材料與方法23-31
• 3.2 實驗結(jié)果31-34
• 3.3 討論34-35
• 第四章 抗GST納米抗體的富集篩選及純化鑒定35-44
• 4.1 材料與方法35-39
• 4.2 實驗結(jié)果39-43
• 4.3 討論43-44
• 第五章 結(jié)論44-45
• 參考文獻(xiàn)45-49
• 第二部分 rs11614913、rs2910164多態(tài)性與ESCC易感性的關(guān)聯(lián)研究49-68
• 第一章 緒論49-52
• 1.1 食管癌的現(xiàn)狀49
• 1.2 單核苷酸多態(tài)性與microRNA49-50
• 1.3 食管癌相關(guān)的microRNA50-51
• 1.4 rs11614913、rs2910164的分析現(xiàn)狀51-52
• 第二章 rs11614913、rs2910164與ESCC易感性的分析52-63
• 2.1 材料與方法52-57
• 2.2 實驗結(jié)果57-61
• 2.3 討論61-63
• 2.4 結(jié)論63
• 參考文獻(xiàn)63-68
• 攻讀碩士期間發(fā)表論文68-69
• 致謝69-70

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