本文關(guān)鍵詞：利用外顯子組測序技術(shù)篩選肝內(nèi)膽管癌突變基因及驗(yàn)證USP17基因

  更多相關(guān)文章： 肝內(nèi)膽管癌 深度測序 全外顯子組 基因突變 Sanger測序 USP17

【摘要】：目的：利用深度測序技術(shù)探究腫瘤形成過程中相關(guān)的遺傳改變,希望找到與肝內(nèi)膽管癌形成和進(jìn)展相關(guān)的體細(xì)胞突變基因,為研究肝內(nèi)膽管癌病因,探尋合適的腫瘤診斷標(biāo)記物及治療靶點(diǎn)提供更多理論依據(jù)。方法：①收集中國人民解放軍總醫(yī)院肝膽外科2014年5月至2014年12月經(jīng)手術(shù)治療的5例肝內(nèi)膽管癌患者癌組織及相應(yīng)癌旁組織,進(jìn)行外顯子組捕獲測序,經(jīng)生物信息學(xué)分析后挑選出候選基因。②收集來自中國人民解放軍總醫(yī)院肝膽外科2014年5月-2015年9月的肝內(nèi)膽管癌手術(shù)切除49例癌組織以及對應(yīng)癌旁肝組織(含以上高通量測序標(biāo)本),其中肝外轉(zhuǎn)移組15例,非轉(zhuǎn)移組34例。設(shè)計(jì)引物,PCR擴(kuò)增目的片段后進(jìn)行Sanger測序,驗(yàn)證深度測序結(jié)果,比較轉(zhuǎn)移組與非轉(zhuǎn)移組中目的基因突變率差異。③采集中國人民解放軍總醫(yī)院病理科保存的2015年9月至2016年1月肝內(nèi)膽管癌術(shù)后標(biāo)本制成的蠟塊,癌組織及對應(yīng)癌旁組織各36例。采用免疫組化的方法觀察USP17蛋白表達(dá)水平在癌組織與癌旁組織,及癌組織轉(zhuǎn)移組與非轉(zhuǎn)移組當(dāng)中的差異。結(jié)果：經(jīng)過對5對樣本的深度測序及生物信息學(xué)分析,篩選出USP17L10.SPDYE1、 LRRC37A3、SIMC1、TPSD1、PRAMEF18、TBC1D3G、OBSCN等在肝內(nèi)膽管癌中新發(fā)現(xiàn)的8個(gè)基因的12個(gè)SNV位點(diǎn)作為候選突變基因位點(diǎn)。擴(kuò)大樣本量行Sanger測序發(fā)現(xiàn)在49例肝內(nèi)膽管癌組織DNA中發(fā)現(xiàn)7例發(fā)生了與深度測序突變位點(diǎn)相同的USP17L10點(diǎn)突變,突變頻率為14.3%,即在4號染色體基因組9213473位置(該基因序列1091位置,NM_001256852.1)發(fā)生GC點(diǎn)突變,為錯(cuò)義突變,AGT-→ACT,絲氨酸變?yōu)樘K氨酸,雜合子突變型。癌旁組織未見該突變。7例突變標(biāo)本中5例發(fā)生在15例轉(zhuǎn)移組中(33.3%),2例發(fā)生在34非轉(zhuǎn)移組中(5.9%),轉(zhuǎn)移組與非轉(zhuǎn)移組的突變率有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異(P0.05)。免疫組化顯示36例肝內(nèi)膽管癌組織中存在16例USP17陽性(44.4%),36例癌旁組織中5例陽性(13.9%),且兩者陽性率有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異(P0.05)。16例陽性癌組織中,6例屬轉(zhuǎn)移組,10例為非轉(zhuǎn)移組,兩者陽性率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:USP17基因突變可能與肝內(nèi)膽管癌發(fā)生發(fā)展相關(guān),并與腫瘤的肝外轉(zhuǎn)移關(guān)聯(lián)。USP17蛋白在癌組織中的表達(dá)水平高于癌旁組織。USP17基因突變在肝內(nèi)膽管癌中的作用機(jī)制尚有待進(jìn)一步深入研究。
【關(guān)鍵詞】：肝內(nèi)膽管癌 深度測序 全外顯子組 基因突變 Sanger測序 USP17
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.8
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 前言9-11
• 第一部分 全外顯子深度測序及數(shù)據(jù)分析11-25
• 1. 材料與方法11-19
• 2. 結(jié)果19-24
• 3. 小結(jié)24-25
• 第二部分 Sanger直接測序?qū)Y(jié)果驗(yàn)證25-33
• 1. 材料與方法25-29
• 2. 結(jié)果29-31
• 3. 小結(jié)31-33
• 第三部分 免疫組化探究蛋白水平變化33-37
• 1. 材料與方法33-35
• 2. 結(jié)果35-36
• 3. 小結(jié)36-37
• 討論37-39
• 參考文獻(xiàn)39-43
• 文獻(xiàn)綜述：肝內(nèi)膽管癌分子發(fā)病機(jī)制的研究進(jìn)展43-58
• 參考文獻(xiàn)48-58
• 中英文對照縮略詞表58-59
• 攻讀學(xué)位期間公開發(fā)表的論文59-60
• 致謝60-61

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2 張敏杰,王成友,鄭凱,倪勇,程樹榜;肝內(nèi)膽管癌的診斷與治療(附12例報(bào)告)[J];中華肝膽外科雜志;2004年08期

3 上官惠敏,胡育前;肝內(nèi)膽管癌18例臨床分析[J];肝膽胰外科雜志;2005年02期

4 王麗杰;孟凡榮;;肝內(nèi)膽管癌的超聲診斷價(jià)值[J];臨床超聲醫(yī)學(xué)雜志;2008年01期

5 俞穎;譚潘麗;錢麗麗;;肝內(nèi)膽管癌患者血清蛋白指紋圖譜的檢測及其意義[J];中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志;2010年04期

6 湯天平;許紅蓮;李秀軍;耿建利;;肝內(nèi)膽管癌38例臨床分析[J];中華實(shí)用診斷與治療雜志;2010年07期

7 張克新;王云慧;;早期肝內(nèi)膽管癌9例超聲診斷分析[J];中國誤診學(xué)雜志;2012年06期

8 王凱,李延青;肝內(nèi)膽管癌[J];臨床肝膽病雜志;1994年03期

9 李介秋;原發(fā)性肝內(nèi)膽管結(jié)石與肝內(nèi)膽管癌8例報(bào)告[J];當(dāng)代醫(yī)師雜志;1996年01期

10 ;肝內(nèi)膽管癌[J];國外醫(yī)學(xué).外科學(xué)分冊;1997年05期

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1 周信達(dá);湯釗猷;樊嘉;周儉;吳志全;欽倫秀;馬曾辰;孫惠川;邱雙健;余耀;任寧;葉青海;王魯;葉勝龍;;手術(shù)切除272例原發(fā)性肝內(nèi)膽管癌的臨床病理分析[A];第十二屆全國肝癌學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2009年

2 周彥明;李濱;楊甲梅;;肝內(nèi)膽管癌肝外淋巴轉(zhuǎn)移特點(diǎn)的初探[A];中國抗癌協(xié)會膽道腫瘤專業(yè)委員會成立大會暨第一屆全國膽道腫瘤學(xué)術(shù)會議論文集[C];2009年

3 左朝暉;歐陽永忠;羅建紅;譚春祁;陳菊英;周德善;周征宇;莫?jiǎng)俅?;肝內(nèi)膽管癌的治療和預(yù)后因素的分析[A];中國抗癌協(xié)會膽道腫瘤專業(yè)委員會成立大會暨第一屆全國膽道腫瘤學(xué)術(shù)會議論文集[C];2009年

4 ;中國抗癌協(xié)會肝內(nèi)膽管癌診治指南(討論稿)[A];中國抗癌協(xié)會膽道腫瘤專業(yè)委員會第二屆全國膽道腫瘤學(xué)術(shù)會議論文集[C];2011年

5 劉辰;于勇;祝路民;姜小清;;1例聯(lián)合中肝靜脈中段切除的半肝切除肝內(nèi)膽管癌手術(shù)報(bào)告[A];中國抗癌協(xié)會膽道腫瘤專業(yè)委員會第二屆全國膽道腫瘤學(xué)術(shù)會議論文集[C];2011年

6 董猛;;肝內(nèi)膽管癌的臨床進(jìn)展[A];中國腫瘤內(nèi)科進(jìn)展 中國腫瘤醫(yī)師教育（2014）[C];2014年

7 顏樹宏;鄭笑娟;陳麗萍;史曉龍;周國平;;實(shí)時(shí)超聲造影對海島地區(qū)肝內(nèi)膽管癌的診斷[A];第二屆長三角超聲醫(yī)學(xué)論壇暨2009年浙江省超聲醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2009年

8 蔣健松;羅建生;;肝膽管結(jié)石合并肝內(nèi)膽管癌21例臨床分析[A];2012年浙江省外科學(xué)學(xué)術(shù)年會論文集[C];2012年

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1 李建偉;miR-605靶向調(diào)控PSMD10在肝內(nèi)膽管癌中的作用及機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

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3 畢超;肝內(nèi)膽管癌行手術(shù)切除后的生存分析及Beclin 1、ARID1A、IDH1和CA9表達(dá)情況及臨床意義分析[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2016年

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1 蔣添翼;探討PTEN作為肝內(nèi)膽管癌個(gè)性化治療靶標(biāo)的研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

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4 張楊;Hh信號通路抑制劑對肝內(nèi)膽管癌RBE細(xì)胞生物學(xué)行為的影響研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2016年

5 陳超;KRAS基因第12、13號密碼子突變與肝內(nèi)膽管癌臨床病理的關(guān)系[D];湖南師范大學(xué);2016年

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7 李殿啟;肝內(nèi)膽管癌臨床特征的初步探討[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2008年

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10 匡銘;血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子及其受體在肝內(nèi)膽管癌發(fā)生和血管生成中的作用[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2002年

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