本文關(guān)鍵詞：共載長春新堿和神經(jīng)酰胺的脂質(zhì)體的抗肝癌作用研究

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【摘要】：納米技術(shù)是化療領(lǐng)域的重大突破,也是當前的研究熱點,針對納米載體的修飾克服普通化療藥物細胞毒性強和體內(nèi)循環(huán)時間短的缺點。長春新堿是一種肝癌常用的化療藥物,它能夠抑制細胞自噬,損壞細胞的保護性自噬過程。Ceramide能夠引起線粒體性自噬,促進功能障礙的線粒體通過自噬降解,兩者聯(lián)用可以使細胞自噬阻斷,使細胞死亡。本研究在體外對兩種游離藥物對自噬蛋白的影響進行了測定,發(fā)現(xiàn)VCR能夠抑制LC3和p62的表達,證明其抑制自噬過程的成熟,而ceramide能夠使LC3表達增加,p62表達下降,說明可以誘導(dǎo)自噬過程的發(fā)生。利用兩種藥物在體外的聯(lián)合殺傷實驗結(jié)果,我們設(shè)計了脂質(zhì)體配方。然后,利用乙醇注入法和p H梯度法實現(xiàn)了長春新堿和ceramide的共載,對制備的脂質(zhì)體進行納米表征的測定,判斷脂質(zhì)體穩(wěn)定性。體外細胞毒性實驗實驗發(fā)現(xiàn)納米藥物Lip-VCR-Cer及Lip-VCR對肝癌細胞的殺傷效果較游離VCR和游離VCR+ceramide的效果而言要弱。而對于不同處理時間的細胞存活率,不存在統(tǒng)計學差異。與游離藥物不同,脂質(zhì)體通過細胞內(nèi)吞作用進入細胞緩慢釋放發(fā)揮作用,到達腫瘤細胞的VCR和ceramide濃度增加,使藥物的利用率上升,增加對細胞的作用,而游離細胞對細胞的作用快速而短暫,細胞毒性作用迅速體現(xiàn)。Lip-VCR-Cer的殺傷作用大于Lip-VCR,游離VCR+Ceramide的殺傷作用大于游離VCR,這可能與Ceramide對細胞發(fā)揮的作用有關(guān),Ceramide在細胞內(nèi)能夠通過特定信號通路誘導(dǎo)自噬,引起自噬蛋白LC3的表達增加,自噬流標志蛋白p62表達降低,發(fā)揮誘導(dǎo)細胞自噬的保護性作用。Ceramide通過不同的機制誘導(dǎo)保護性自噬和致死性自噬,保護性自噬實質(zhì)為線粒體自噬。線粒體能夠通過某種自噬的形式選擇性降解功能受損的線粒體,避免功能異常的線粒體產(chǎn)生活性氧物質(zhì)增多,不利于細胞生長,這種保護性自噬使腫瘤細胞能夠適應(yīng)內(nèi)外環(huán)境刺激,促進腫瘤的生長,而VCR的存在使其誘導(dǎo)的保護性作用抑制,使細胞不能適應(yīng)環(huán)境刺激,發(fā)生死亡。這種自噬誘導(dǎo)劑的存在使腫瘤細胞對化療藥敏感性增強,使VCR與Ceramide聯(lián)用產(chǎn)生了更強的殺傷效果。結(jié)論:Lip-VCR-Cer與Lip-VCR在基本表征,體外釋放和體外細胞毒性方面不存在統(tǒng)計學意義的差異。在體外殺傷效果弱于游離VCR和游離VCR+ceramide的細胞殺傷效果,四種藥物處理組的殺傷效果VCR+CeramideVCRLip-VCR-CerLip-VCR。VCR與Ceramide聯(lián)用增強了細胞殺傷效果,這可能與VCR抑制了ceramide誘導(dǎo)的保護性自噬作用有關(guān)。四種藥物處理方法在體內(nèi)抑制腫瘤的效果區(qū)別需要通過后續(xù)的體內(nèi)實驗進行驗證。
【關(guān)鍵詞】：脂質(zhì)體 長春新堿 ceramide 自噬
【學位授予單位】：第二軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 縮略詞表9-10
• 前言10-13
• 第一部分 游離藥物影響肝癌自噬蛋白的表達及體外細胞毒性研究13-25
• 一、實驗材料及儀器13-16
• 二、實驗方法16-19
• 三、實驗結(jié)果19-23
• 四、小結(jié)及結(jié)果討論23-25
• 第二部分 共載長春新堿和神經(jīng)酰胺的脂質(zhì)體的制備及基本表征25-35
• 一、實驗材料及儀器25-27
• 二、實驗方法27-30
• 三、實驗結(jié)果30-33
• 四、小結(jié)與結(jié)果討論33-35
• 第三部分 共載VCR和CERAMIDE脂質(zhì)體的體外細胞毒性35-40
• 一、實驗儀器和材料35-36
• 二、實驗方法36-37
• 三、實驗結(jié)果37-38
• 四、小結(jié)及結(jié)果討論38-40
• 全文小結(jié)40-42
• 參考文獻42-45
• 綜述 自噬在肝癌中的作用：分子機制和潛在的治療靶點45-76
• 參考文獻58-76
• 在讀期間發(fā)表論文和參加工作情況說明76-77
• 致謝77

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本文編號：543955