本文關(guān)鍵詞：microRNA-150在膽管細胞性肝癌患者中的表達及其臨床意義

  更多相關(guān)文章： 膽管細胞性肝癌 腫瘤標志物 microRNA micro RNA-150

【摘要】：膽管細胞性肝癌(intrahepatic cholangiocarcinoma,ICC)是繼肝細胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)后第二種常見的原發(fā)性肝癌(primary liver cancer,PLC),又稱肝內(nèi)膽管癌。ICC占原發(fā)性肝癌發(fā)病率的10~15%,研究表明,近數(shù)十年來其發(fā)病率和死亡率在中國乃至世界范圍內(nèi)迅速增長,是威脅人類生命健康的主要惡性腫瘤之一。ICC發(fā)病隱匿,缺乏特異性臨床癥狀和體征,也沒有特異性好、靈敏度高的實驗室標記物可以用于早期診斷,病情進展快,大部分患者在首次就診時已經(jīng)處于疾病進展期,從而喪失了接受手術(shù)治療的最佳時機,預(yù)后極差;而極少數(shù)患者,在首次就診時尚處于早期,積極接受規(guī)范化治療,從而可以獲得相對較好的預(yù)后。因此,探索ICC有效的早期診斷及治療方式對改善ICC患者生存預(yù)后不可或缺。時至今日,用于診斷ICC的腫瘤分子標記物已經(jīng)達到十余種,但是這些標記物都存在靈敏度低或是特異度不足等問題,不能有效地用于早期診斷。改善ICC患者預(yù)后的關(guān)鍵在于早期診斷,而早期診斷ICC的關(guān)鍵在于高效的特異的篩查診斷手段,尋找準確性高、靈敏度好、特異度高的標記物在臨床研究中顯得尤為重要。Micro RNAs(mi RN As)是近年來人們發(fā)現(xiàn)的一類小的非編碼RNA分子,通過與靶基因m RNA 3’末端非翻譯區(qū)(3’untranslated region,3’UTR)的堿基配對結(jié)合而抑制靶基因的翻譯表達。mi RNA廣泛參與人體的生長、發(fā)育等各個階段,它的異常表達與多種良惡性疾病的發(fā)生發(fā)展進程密不可分。在生物體內(nèi)mi RNA既可以扮演癌基因角色,促進腫瘤發(fā)生發(fā)展等;也可以扮演抑癌基因角色,抑制腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移等。不同種類的腫瘤中mi RNA的表達水平具有顯著的差異性,并且能夠穩(wěn)定地被檢測,因此在未來的生命科學(xué)研究中將mi RNA作為新型標志物是很有希望的。本課題采用mi RNA芯片檢測、RT-q PCR分析、ROC曲線評價等研究方法,期望找到可以用于ICC診斷的特異性mi RNA。本課題主要包含以下四個研究部分:第一部分:收集整理病歷及標本資料,選擇入組患者方法:運用數(shù)據(jù)錄入管理軟件Epidata 3.1完善肝癌患者病歷資料數(shù)據(jù)庫,依據(jù)納入標準收集入組的膽管細胞性肝癌患者及對照者的臨床指標;運用統(tǒng)計學(xué)分析軟件SPSS 21.0檢測兩組患者臨床指標的均衡性。結(jié)果:膽管細胞性肝癌組患者血清ALB值為40.9 g/L±4.30 g/L,明顯低于對照組平均血清ALB值44.9 g/L±3.84 g/L,其組間差異存在統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.010);而轉(zhuǎn)氨酶、膽紅素等其它臨床指標間的差異均沒有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論:白蛋白在肝臟合成,是評定機體營養(yǎng)狀態(tài)的重要指標。慢性消耗性疾病如惡性腫瘤,白蛋白會有所降低。實驗組和對照者組間的臨床指標相似,一致性較好,具有可比性。第二部分:建立膽管細胞性肝癌mi RNA表達譜,選擇目標基因mi RNA-150方法:采用mi RNA芯片檢測技術(shù),建立膽管細胞性肝癌的mi RNA表達譜,經(jīng)過數(shù)據(jù)分析與文獻研究后選擇進一步研究的目標基因。結(jié)果:mi RNA芯片檢測顯示,膽管細胞性肝癌患者癌組織中表達水平明顯下調(diào)的mi RNA有:mi R-150、mi R-638、mi R-4459、mi R-4530及mi R-378c,而表達量明顯增高的mi RNA有:mi RNA-660、mi R-425、mi R-93、mi R-494以及mi RNA-574。經(jīng)研究文獻并討論后,最終選擇mi RNA-150為后續(xù)研究的目標基因。結(jié)論:本部分實驗通過mi RNA芯片所獲得的膽管細胞性肝癌的mi RNA表達譜與既往研究發(fā)現(xiàn)的表達譜不完全一致。個體樣本間的異質(zhì)性可能是出現(xiàn)這種現(xiàn)象的主要原因。同時也說明了膽管細胞性肝癌的發(fā)生發(fā)展具有復(fù)雜性和多樣性,涉及多個基因參與并調(diào)控。mi RNA-150在膽管細胞性肝癌中的作用尚無相關(guān)研究報道,選擇mi RNA-150作為進一步研究的目標基因符合該課題的研究目的,具備可行性。第三部分:運用RT-q PCR檢測組織與血漿標本mi RNA-150表達水平方法:對于癌組織及癌旁組織標本采用mi RNeasy#174;Mini試劑盒提取總RNA;對于血漿標本采用RN24-BLOODmisi試劑盒提取總RNA。采用分光光度計檢測得到的總RNA溶液的純度與濃度,運用RT-q PCR技術(shù)檢測標本中mi RNA-150的表達水平。結(jié)果:與癌旁組織標本相比,mi RNA-150在膽管細胞性肝癌癌組織標本中表達水平顯著降低;與對照者的血漿標本相比,mi RNA-150在ICC患者血漿中表達明顯上調(diào)。結(jié)論:mi RNA-150在ICC患者癌組織中下調(diào)表達,然而在其血漿中上調(diào)表達。也有研究報道m(xù)i RNA-150在其他腫瘤組織中上調(diào)或是下調(diào)表達,因此我們認為它在不同腫瘤中具有不同的表達譜,其異常表達是惡性腫瘤中的普遍現(xiàn)象。對于其在組織及血液中相反的表達結(jié)果,分析認為mi RNA-150在ICC中可能扮演著抑癌基因角色,通過負反饋調(diào)節(jié)的作用使得血液中mi RNA-150表達水平增高。第四部分:膽管細胞性肝癌患者血漿mi RNA-150的臨床意義分析方法:以15例膽管細胞性肝癌患者血漿mi RNA-150的表達水平及其各項臨床指標為基礎(chǔ),使用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS 21.0分析mi RNA-150的臨床意義,當P值小于0.05時認為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果:血漿mi RNA-150可以用來作為診斷膽管細胞性肝癌的分子標志物,當mi RN A-150與血清CA19-9聯(lián)合應(yīng)用時,診斷的靈敏度及特異度分別可以達到80%和100%、而AUC可以達到0.920。根據(jù)15例ICC患者血漿m RNA-150的平均表達量,將血漿中mi RNA-150表達量小于等于-0.507的8名ICC患者歸為低表達組,將mi RN A-150表達量大于-0.507的7名患者歸為高表達組。統(tǒng)計分析顯示:膽管細胞性肝癌患者血漿mi RNA-150表達水平與其腫瘤大小、CA19-9、腫瘤分期以及GGT等各項臨床指標無相關(guān)性。結(jié)論:mi RNA-150單獨診斷ICC具有較高的靈敏度,達到93.3%,但特異度相對較低,AUC為0.791。因此,我們將mi RNA-150與CA19-9聯(lián)合應(yīng)用于診斷膽管細胞性肝癌,其靈敏度、特異度以及準確性得到不同程度改善。與此同時,研究還發(fā)現(xiàn)ICC患者血漿mi RNA-150表達水平與腫瘤大小、CA19-9、腫瘤分期、GGT等指標無相關(guān)性。這也說明mi RNA-150在膽管細胞性肝癌中表達穩(wěn)定,有望成為特異性ICC標記物。
【關(guān)鍵詞】：膽管細胞性肝癌 腫瘤標志物 microRNA micro RNA-150
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 縮略語表6-8
• 中文摘要8-12
• Abstract12-17
• 前言17-19
• 文獻回顧19-26
• 第一部分：收集整理病歷及標本資料，選擇入組患者26-32
• 引言26-27
• 1 材料27-28
• 1.1 研究對象27
• 1.2 研究工具27-28
• 2 方法28-29
• 2.1 完善病歷資料數(shù)據(jù)庫28
• 2.2 普通外科實驗室標本數(shù)據(jù)庫核查標本信息28
• 2.3 均衡性檢驗分析28-29
• 3 結(jié)果29-30
• 4 討論30-32
• 第二部分：建立膽管細胞性肝癌microRNA表達譜，選擇目標基因micro RNA-15032-39
• 引言32-33
• 1 材料33-34
• 1.1 研究對象33
• 1.2 研究工具33-34
• 2 方法34-35
• 2.1 建立膽管細胞性肝癌患者的miRNA表達譜34-35
• 2.2 查閱文獻，，選擇目標miRNA35
• 3 結(jié)果35-36
• 3.1 miRNA芯片檢測結(jié)果35-36
• 3.2 選擇目標基因為micro RNA-15036
• 4 討論36-39
• 第三部分：RT-qPCR檢測多個組織及血漿標本中miRNA-150 表達量39-54
• 引言39
• 1 材料39-43
• 1.1 實驗對象39-40
• 1.2 實驗儀器40
• 1.3 實驗試劑及耗材40-43
• 2 方法43-49
• 2.1 癌組織及癌旁組織標本總RNA提取43-44
• 2.2 血漿樣本總RNA提取44-45
• 2.3 RNA濃度及純度檢測45-46
• 2.4 反轉(zhuǎn)錄（Reverse Transcription, RT）46-47
• 2.5 實時定量聚合酶鏈式反應(yīng)47-49
• 2.6 實驗結(jié)果整理和統(tǒng)計學(xué)分析49
• 3 結(jié)果49-52
• 3.1 相比于NT組，miRNA-150 在CT組下調(diào)表達49-50
• 3.2 相比于MPS組，miRNA-150 在PS組上調(diào)表達50-52
• 4 討論52-54
• 第四部分：膽管細胞性肝癌患者血漿中miRNA-150 的臨床意義54-61
• 引言54
• 1 材料54
• 2 方法54-55
• 2.1 檢驗血漿miRNA-150 的診斷能力54
• 2.2 組間臨床指標差異分析54-55
• 3 結(jié)果55-59
• 3.1 血漿miRNA-150 可作為診斷ICC的特異性標志物55-57
• 3.2 血漿miRNA-150 不同表達水平組之間臨床資料的分析57-59
• 4 討論59-61
• 小結(jié)61-62
• 參考文獻62-69
• 個人簡歷和研究成果69-71
• 致謝71

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉博;肖雪媛;何大澄;黃志強;;肝門部膽管癌細胞系FRH 0201與正常肝細胞系L02蛋白質(zhì)組學(xué)差異分析[J];癌變·畸變·突變;2010年05期

2 程文;黃道中;;肝臟惡性腫瘤超聲造影不典型表現(xiàn)及相關(guān)病理基礎(chǔ)[J];當代醫(yī)學(xué);2009年19期

3 吳耀初;周偉文;陳俏倩;符有文;張揚貴;全國彪;;肝內(nèi)周圍型膽管細胞癌的CT動態(tài)增強掃描與病理基礎(chǔ)[J];中國CT和MRI雜志;2013年03期

4 Hong Zheng;Jia-Yu Liu;Feng-Ju Song;Ke-Xin Chen;;Advances in circulating microRNAs as diagnostic and prognostic markers for ovarian cancer[J];Cancer Biology & Medicine;2013年03期

5 周黎光;梁波;于泳;陳波;;超聲造影輔助射頻消融在肝癌治療中的應(yīng)用現(xiàn)狀及進展[J];腹腔鏡外科雜志;2013年11期

6 趙華群;楊紅;何云;彭金波;吳玉泉;申金金;;肝臟局灶性炎性病變的灰階超聲及超聲造影圖像特征[J];廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2013年06期

7 朱凌云;李文穎;謝斯思;閔璐;;微小RNA及其軍事應(yīng)用[J];國防科技;2013年06期

8 樊靜;章建全;李穎如;蔣曉春;朱再生;陳捷游;王戲丹;;雙重超聲造影診斷上尿路梗阻性疾病的方法與價值[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2014年02期

9 趙珊;姚德生;陳軍瑩;丁楠;;血清miR-203與宮頸癌臨床病理特征的關(guān)系[J];重慶醫(yī)學(xué);2014年08期

10 周耕;盧川;朱海云;;PET/CT及超聲造影對兔VX2肉瘤射頻療效評估的實驗研究[J];功能與分子醫(yī)學(xué)影像學(xué)(電子版);2013年03期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 Zhengrong Li;Yi Cao;Zhigang Jie;Yi Liu;Yingliang Li;Junhe Li;Guoming Zhu;Zhengren Liu;Yi Tu;Gen Peng;;MiR-495 and miR-551a inhibit cell migration and invasion of SGC7901 human gastric cancer cell line via direct PRL-3 regulation[A];江西省第二屆胃腸外科學(xué)術(shù)會議暨江西省第十二次中西醫(yī)結(jié)合普通外科學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2012年

2 姜敏;張偉;;Micro-RNA作為人類上皮組織惡性腫瘤診斷和預(yù)后生物標記物的應(yīng)用價值[A];江西省第二次中西醫(yī)結(jié)合呼吸疾病學(xué)術(shù)會議論文集[C];2012年

3 張逸寅;顧康生;;彌漫大B細胞淋巴瘤預(yù)后分子標志物研究進展[A];中國腫瘤內(nèi)科進展 中國腫瘤醫(yī)師教育（2014）[C];2014年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 邵耘;MicroRNA-101與環(huán)氧化酶-2在胃癌組織中的表達及意義[D];南京醫(yī)科大學(xué);2013年

2 黃素麗;血漿microRNA與急性心梗發(fā)病風險和焦爐工心率變異性改變的關(guān)聯(lián)研究[D];華中科技大學(xué);2013年

3 王飛;低氧對神經(jīng)干細胞中miR-210的表達調(diào)控及功能研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2013年

4 賈雙征;子宮內(nèi)膜異位癥患者生命質(zhì)量及microRNA表達譜的初步研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

5 王升儒;中國漢族先天性脊柱側(cè)凸患者與正常人群血清miRNA的對比研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

6 戴楠;雙功能基因APE1與miRNAs相互調(diào)控介導(dǎo)骨肉瘤放療敏感性的機制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2013年

7 楊守梅;miR-21在胃癌細胞化療耐藥中的作用及其機制研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2013年

8 賈叢偉;hsa-miR-125a-5p在胰腺癌中表達及功能的初步驗證及新型腫瘤標志物HAb18G/CD147在胰腺神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤中表達的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

9 江文洋;miR-155表達的下調(diào)對肺腺癌的抑制作用及機制研究[D];華中科技大學(xué);2013年

10 宋廣忠;乙型肝炎重癥化過程中microRNA-210的改變及功能研究[D];浙江大學(xué);2013年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 程文;超聲造影對肝臟腫瘤病變的診斷及評估肝臟原發(fā)惡性腫瘤動靜脈瘺[D];華中科技大學(xué);2010年

2 趙凱;COX-2、Bcl-2、微血管密度與肝內(nèi)膽管癌發(fā)生發(fā)展關(guān)系的臨床研究[D];青島大學(xué);2005年

3 王猛;CK7/CK20在肝內(nèi)膽管結(jié)石旁膽管組織及肝內(nèi)膽管癌中的表達及臨床意義[D];青島大學(xué);2006年

4 張春;肝內(nèi)膽管結(jié)石并肝內(nèi)膽管癌臨床病理特征及生存分析[D];山東大學(xué);2012年

5 孫久政;膽囊切除術(shù)與術(shù)后原發(fā)性肝內(nèi)膽管結(jié)石關(guān)系的回顧性臨床研究[D];山東大學(xué);2012年

6 雷曉鋒;肝內(nèi)膽管細胞癌與肝細胞癌臨床特征的對比研究并40例肝內(nèi)膽管細胞癌報告[D];山東大學(xué);2012年

7 張尚武;CEA聯(lián)合miR-17-3p在結(jié)腸癌中的診斷作用研究[D];蘇州大學(xué);2013年

8 申璐;miR-21與MAPKs信號通路反饋調(diào)控在亞砷酸鈉所致HELF細胞惡性轉(zhuǎn)化中的作用[D];南京醫(yī)科大學(xué);2013年

9 楊偉;TPM1在膽管癌中的表達及其調(diào)控機制研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2013年

10 樊智彬;microRNA-224在大腸癌中的表達及其功能研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2013年

本文編號：543708