本文關(guān)鍵詞：莪術(shù)醇聯(lián)合氟尿嘧啶對(duì)裸鼠胃癌移植瘤生長(zhǎng)及PCNA和P27表達(dá)影響的研究

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【摘要】：目的:胃癌是目前最常見的惡性腫瘤之一,由于早期的診斷率低,患者在就診時(shí)大多已處于進(jìn)展期。目前化療已經(jīng)成為進(jìn)展期胃癌及術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移胃癌的主要治療手段,有的病人對(duì)化療不能耐受,而中藥具有毒副作用低,可提高機(jī)體免疫力等優(yōu)點(diǎn),中藥聯(lián)合化療治療胃癌逐漸被應(yīng)用于臨床。本實(shí)驗(yàn)以人胃癌BGC823細(xì)胞建立裸鼠皮下移植瘤為研究模型,觀察莪術(shù)醇及氟尿嘧啶對(duì)于腫瘤增殖的影響并對(duì)其機(jī)制進(jìn)行探討。方法:1建立人胃癌BGC823細(xì)胞皮下移植裸鼠模型收集體外培養(yǎng)的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期BGC823細(xì)胞,配制成濃度為5×106/ml的細(xì)胞懸液后進(jìn)行裸鼠皮下注射,獲得人胃癌裸鼠皮下移植瘤模型。2對(duì)人胃癌BGC823細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤進(jìn)行藥物干預(yù)。當(dāng)皮下移植瘤生長(zhǎng)至10mm時(shí),將其隨機(jī)分為4組,對(duì)照組、莪術(shù)醇組、氟尿嘧啶組、聯(lián)合用藥組。對(duì)照組給予生理鹽水;莪術(shù)醇組給予莪術(shù)醇;氟尿嘧啶組給予氟尿嘧啶;聯(lián)合用藥組給予氟尿嘧啶和莪術(shù)醇,每隔4天給予藥物瘤體內(nèi)注射,與末次藥物干預(yù)4天后脫頸處死裸鼠。3對(duì)人胃癌BGC823細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤體積和重量的檢測(cè)。每次藥物干預(yù)前和處死裸鼠后測(cè)量移植瘤的最長(zhǎng)徑(A)及最短徑(B),根據(jù)公式:腫瘤體積(mm3)=1/2(A×B2),計(jì)算腫瘤的近似體積。處死各組裸鼠后,完全剝離瘤體并測(cè)量瘤重、計(jì)算抑瘤率。腫瘤抑瘤率=(對(duì)照組瘤重-實(shí)驗(yàn)組瘤重)/對(duì)照組瘤重×100%。4應(yīng)用MTT法檢測(cè)0h、24h、48h、72h移植瘤細(xì)胞的增殖。用機(jī)械法將四組不同處理因素的瘤體制備成懸浮細(xì)胞,測(cè)定各組在0h、24h、48h、72h時(shí)的OD值,計(jì)算細(xì)胞的增殖抑制率。5應(yīng)用q RT-PCR方法檢測(cè)人胃癌BGC823細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤組織中PCNA、P27m RNA的表達(dá)。6應(yīng)用免疫組織化學(xué)法(S-P法)檢測(cè)人胃癌BGC823細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤組織中PCNA、P27蛋白的表達(dá)。結(jié)果:1人胃癌BGC823細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤模型的建立成功建立人胃癌BGC823細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤模型,成瘤率100%(20/20)。2莪術(shù)醇及氟尿嘧啶對(duì)人胃癌BGC823細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤的影響2.1移植瘤的體積各實(shí)驗(yàn)組腫瘤終體積分別為:莪術(shù)醇組(1795.48±56.86)mm3、氟尿嘧啶組(1439.50±31.13)mm3、聯(lián)合用藥組(1363±37.54)mm3,對(duì)照組腫瘤終體積(2195.83±54.00)mm3。各實(shí)驗(yàn)組腫瘤終體積均明顯小于對(duì)照組腫瘤終體積,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與莪術(shù)醇組相比,聯(lián)合用藥組腫瘤終體積明顯減小,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與氟尿嘧啶組相比,聯(lián)合用藥組腫瘤終體積有減小趨勢(shì),但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。2.2移植瘤的抑瘤率各實(shí)驗(yàn)組腫瘤體積分別為:莪術(shù)醇組(1.51±0.99)g、氟尿嘧啶組(1.27±0.02)g、聯(lián)合用藥組(1.05±0.10)g,對(duì)照組腫瘤的重量(1.88±0.09)g。各實(shí)驗(yàn)組腫瘤重量均明顯小于對(duì)照組腫瘤重量,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與莪術(shù)醇組相比,聯(lián)合用藥組腫瘤重量明顯減小,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與氟尿嘧啶組相比,聯(lián)合用藥組腫瘤重量有減小趨勢(shì),但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。3莪術(shù)醇及氟尿嘧啶對(duì)人胃癌BGC823細(xì)胞裸鼠皮下移植腫瘤細(xì)胞增殖的影響MTT結(jié)果顯示:0小時(shí)的對(duì)照組、莪術(shù)醇組、氟尿嘧啶組、聯(lián)合用藥組的OD值分別為0.129±0.023、0.131±0.019、0.126±0.020、0.128±0.021;24小時(shí)的對(duì)照組、莪術(shù)醇組、氟尿嘧啶組、聯(lián)合用藥組組的OD值分別為0.236±0.054、0.232±0.041、0.238±0.037、0.234±0.050;48小時(shí)的對(duì)照組、莪術(shù)醇組、氟尿嘧啶組、聯(lián)合用藥組的OD值分別為0.512±0.056、0.416±0.068、0.382±0.069、0.358±0.067;72小時(shí)的對(duì)照組、莪術(shù)醇組、氟尿嘧啶組、聯(lián)合用藥組的OD值分別為0.702±0.051、0.623±0.058、0.562±0.061、0.519±0.082。其中0小時(shí)和24小時(shí),各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比無明顯差異(P0.05),而48小時(shí)和72小時(shí)時(shí),各實(shí)驗(yàn)組明顯低于對(duì)照組(P0.05)。4人胃癌BGC823細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤組織中PCNA、P27 m RNA的表達(dá)4.1 PCNA m RNA的表達(dá)各實(shí)驗(yàn)組裸鼠胃癌移植瘤組織中PCNAm RNA的相對(duì)表達(dá)量分別為:莪術(shù)醇組(0.8673±0.0452)、氟尿嘧啶組(0.7553±0.0460)及聯(lián)合用藥組(0.5327±0.0284),與對(duì)照組(1.001±0.0682)相比顯著降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);與莪術(shù)醇組相和氟尿嘧啶組比,聯(lián)合用藥組PCNAm RNA的相對(duì)表達(dá)量明顯降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。4.2 P27 m RNA的表達(dá)各實(shí)驗(yàn)組裸鼠胃癌移植瘤組織中P27m RNA的相對(duì)表達(dá)量分別為:莪術(shù)醇組(1.8037±0.3175)、氟尿嘧啶組(2.0274±0.2319)及聯(lián)合用藥組(2.5566±0.3268),與對(duì)照組(1.010±0.1746)相比顯著升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);與莪術(shù)醇組相比,聯(lián)合用藥組P27m RNA的相對(duì)表達(dá)量明顯升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;與氟尿嘧啶組相比,聯(lián)合用藥組P27m RNA的相對(duì)表達(dá)量有升高趨勢(shì),但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。5人胃癌BGC823細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤組織PCNA、P27蛋白表達(dá)。5.1對(duì)照組、莪術(shù)醇組、氟尿嘧啶組、聯(lián)合用藥組PCNA蛋白陽性百分比分別為:(73.56±2.26)%、(56.94±2.58)%、(44.05±1.70)%、(40.17±2.90)%。與對(duì)照組相比均,各實(shí)驗(yàn)組PCNA陽性表達(dá)率明顯降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與莪術(shù)醇組相比,聯(lián)合用藥組PCNA陽性表達(dá)率明顯降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;與氟尿嘧啶組相比,聯(lián)合用藥組PCNA陽性表達(dá)率有降低趨勢(shì),但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。5.2對(duì)照組、莪術(shù)醇組、氟尿嘧啶組、聯(lián)合用藥組P27蛋白陽性百分比分別為:(33.67±2.36)%、(51.06±1.98)%、(60.28±2.01)%、(71.67±2.29)%。與對(duì)照組相比,各實(shí)驗(yàn)組P27蛋白陽性百分比明顯升高差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與莪術(shù)醇組和氟尿嘧啶組相比,聯(lián)合用藥組P27陽性表達(dá)率明顯升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。結(jié)論:1莪術(shù)醇能抑制人胃癌BGC823細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤的生長(zhǎng),使其生長(zhǎng)速度減慢。2莪術(shù)醇可抑制人胃癌BGC823細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤細(xì)胞的增殖,有效降低了人胃癌BGC823細(xì)胞的增殖。3莪術(shù)醇聯(lián)合氟尿嘧啶能抑制人胃癌BGC823細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤的生長(zhǎng),較單用莪術(shù)醇相比具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。4莪術(shù)醇聯(lián)合氟尿嘧啶能抑制人胃癌BGC823細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤的生長(zhǎng),但較單用氟尿嘧啶相比無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。5莪術(shù)醇抑制人胃癌BGC823細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤的生長(zhǎng),其機(jī)制可能與PCNA基因表達(dá)下調(diào)、P27基因表達(dá)上調(diào)有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：莪術(shù)醇 胃癌細(xì)胞株 裸鼠皮下移植瘤 增殖細(xì)胞核抗原 P27
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.2
【目錄】：

• 中文摘要4-8
• 英文摘要8-13
• 英文縮寫13-14
• 前言14
• 材料與方法14-22
• 結(jié)果22-25
• 附圖25-32
• 附表32-34
• 討論34-36
• 結(jié)論36-37
• 參考文獻(xiàn)37-39
• 綜述 中藥提純物對(duì)胃癌的治療現(xiàn)狀39-49
• 參考文獻(xiàn)45-49
• 致謝49-50
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷50

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：540931