本文關(guān)鍵詞：莪術(shù)醇聯(lián)合氟尿嘧啶對裸鼠胃癌移植瘤生長及PCNA和P27表達影響的研究

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【摘要】：目的:胃癌是目前最常見的惡性腫瘤之一,由于早期的診斷率低,患者在就診時大多已處于進展期。目前化療已經(jīng)成為進展期胃癌及術(shù)后復發(fā)轉(zhuǎn)移胃癌的主要治療手段,有的病人對化療不能耐受,而中藥具有毒副作用低,可提高機體免疫力等優(yōu)點,中藥聯(lián)合化療治療胃癌逐漸被應用于臨床。本實驗以人胃癌BGC823細胞建立裸鼠皮下移植瘤為研究模型,觀察莪術(shù)醇及氟尿嘧啶對于腫瘤增殖的影響并對其機制進行探討。方法:1建立人胃癌BGC823細胞皮下移植裸鼠模型收集體外培養(yǎng)的對數(shù)生長期BGC823細胞,配制成濃度為5×106/ml的細胞懸液后進行裸鼠皮下注射,獲得人胃癌裸鼠皮下移植瘤模型。2對人胃癌BGC823細胞裸鼠皮下移植瘤進行藥物干預。當皮下移植瘤生長至10mm時,將其隨機分為4組,對照組、莪術(shù)醇組、氟尿嘧啶組、聯(lián)合用藥組。對照組給予生理鹽水;莪術(shù)醇組給予莪術(shù)醇;氟尿嘧啶組給予氟尿嘧啶;聯(lián)合用藥組給予氟尿嘧啶和莪術(shù)醇,每隔4天給予藥物瘤體內(nèi)注射,與末次藥物干預4天后脫頸處死裸鼠。3對人胃癌BGC823細胞裸鼠皮下移植瘤體積和重量的檢測。每次藥物干預前和處死裸鼠后測量移植瘤的最長徑(A)及最短徑(B),根據(jù)公式:腫瘤體積(mm3)=1/2(A×B2),計算腫瘤的近似體積。處死各組裸鼠后,完全剝離瘤體并測量瘤重、計算抑瘤率。腫瘤抑瘤率=(對照組瘤重-實驗組瘤重)/對照組瘤重×100%。4應用MTT法檢測0h、24h、48h、72h移植瘤細胞的增殖。用機械法將四組不同處理因素的瘤體制備成懸浮細胞,測定各組在0h、24h、48h、72h時的OD值,計算細胞的增殖抑制率。5應用q RT-PCR方法檢測人胃癌BGC823細胞裸鼠皮下移植瘤組織中PCNA、P27m RNA的表達。6應用免疫組織化學法(S-P法)檢測人胃癌BGC823細胞裸鼠皮下移植瘤組織中PCNA、P27蛋白的表達。結(jié)果:1人胃癌BGC823細胞裸鼠皮下移植瘤模型的建立成功建立人胃癌BGC823細胞裸鼠皮下移植瘤模型,成瘤率100%(20/20)。2莪術(shù)醇及氟尿嘧啶對人胃癌BGC823細胞裸鼠皮下移植瘤的影響2.1移植瘤的體積各實驗組腫瘤終體積分別為:莪術(shù)醇組(1795.48±56.86)mm3、氟尿嘧啶組(1439.50±31.13)mm3、聯(lián)合用藥組(1363±37.54)mm3,對照組腫瘤終體積(2195.83±54.00)mm3。各實驗組腫瘤終體積均明顯小于對照組腫瘤終體積,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05);與莪術(shù)醇組相比,聯(lián)合用藥組腫瘤終體積明顯減小,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05);與氟尿嘧啶組相比,聯(lián)合用藥組腫瘤終體積有減小趨勢,但無統(tǒng)計學差異(P0.05)。2.2移植瘤的抑瘤率各實驗組腫瘤體積分別為:莪術(shù)醇組(1.51±0.99)g、氟尿嘧啶組(1.27±0.02)g、聯(lián)合用藥組(1.05±0.10)g,對照組腫瘤的重量(1.88±0.09)g。各實驗組腫瘤重量均明顯小于對照組腫瘤重量,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05);與莪術(shù)醇組相比,聯(lián)合用藥組腫瘤重量明顯減小,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05);與氟尿嘧啶組相比,聯(lián)合用藥組腫瘤重量有減小趨勢,但無統(tǒng)計學差異(P0.05)。3莪術(shù)醇及氟尿嘧啶對人胃癌BGC823細胞裸鼠皮下移植腫瘤細胞增殖的影響MTT結(jié)果顯示:0小時的對照組、莪術(shù)醇組、氟尿嘧啶組、聯(lián)合用藥組的OD值分別為0.129±0.023、0.131±0.019、0.126±0.020、0.128±0.021;24小時的對照組、莪術(shù)醇組、氟尿嘧啶組、聯(lián)合用藥組組的OD值分別為0.236±0.054、0.232±0.041、0.238±0.037、0.234±0.050;48小時的對照組、莪術(shù)醇組、氟尿嘧啶組、聯(lián)合用藥組的OD值分別為0.512±0.056、0.416±0.068、0.382±0.069、0.358±0.067;72小時的對照組、莪術(shù)醇組、氟尿嘧啶組、聯(lián)合用藥組的OD值分別為0.702±0.051、0.623±0.058、0.562±0.061、0.519±0.082。其中0小時和24小時,各實驗組與對照組相比無明顯差異(P0.05),而48小時和72小時時,各實驗組明顯低于對照組(P0.05)。4人胃癌BGC823細胞裸鼠皮下移植瘤組織中PCNA、P27 m RNA的表達4.1 PCNA m RNA的表達各實驗組裸鼠胃癌移植瘤組織中PCNAm RNA的相對表達量分別為:莪術(shù)醇組(0.8673±0.0452)、氟尿嘧啶組(0.7553±0.0460)及聯(lián)合用藥組(0.5327±0.0284),與對照組(1.001±0.0682)相比顯著降低,差異具有統(tǒng)計學差異(P0.05);與莪術(shù)醇組相和氟尿嘧啶組比,聯(lián)合用藥組PCNAm RNA的相對表達量明顯降低,差異具有統(tǒng)計學差異(P0.05)。4.2 P27 m RNA的表達各實驗組裸鼠胃癌移植瘤組織中P27m RNA的相對表達量分別為:莪術(shù)醇組(1.8037±0.3175)、氟尿嘧啶組(2.0274±0.2319)及聯(lián)合用藥組(2.5566±0.3268),與對照組(1.010±0.1746)相比顯著升高,差異具有統(tǒng)計學差異(P0.05);與莪術(shù)醇組相比,聯(lián)合用藥組P27m RNA的相對表達量明顯升高,差異具有統(tǒng)計學差異;與氟尿嘧啶組相比,聯(lián)合用藥組P27m RNA的相對表達量有升高趨勢,但無統(tǒng)計學差異(P0.05)。5人胃癌BGC823細胞裸鼠皮下移植瘤組織PCNA、P27蛋白表達。5.1對照組、莪術(shù)醇組、氟尿嘧啶組、聯(lián)合用藥組PCNA蛋白陽性百分比分別為:(73.56±2.26)%、(56.94±2.58)%、(44.05±1.70)%、(40.17±2.90)%。與對照組相比均,各實驗組PCNA陽性表達率明顯降低,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05);與莪術(shù)醇組相比,聯(lián)合用藥組PCNA陽性表達率明顯降低,差異具有統(tǒng)計學差異;與氟尿嘧啶組相比,聯(lián)合用藥組PCNA陽性表達率有降低趨勢,但無統(tǒng)計學差異(P0.05)。5.2對照組、莪術(shù)醇組、氟尿嘧啶組、聯(lián)合用藥組P27蛋白陽性百分比分別為:(33.67±2.36)%、(51.06±1.98)%、(60.28±2.01)%、(71.67±2.29)%。與對照組相比,各實驗組P27蛋白陽性百分比明顯升高差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05);與莪術(shù)醇組和氟尿嘧啶組相比,聯(lián)合用藥組P27陽性表達率明顯升高,差異具有統(tǒng)計學差異(P0.05)。結(jié)論:1莪術(shù)醇能抑制人胃癌BGC823細胞裸鼠皮下移植瘤的生長,使其生長速度減慢。2莪術(shù)醇可抑制人胃癌BGC823細胞裸鼠皮下移植瘤細胞的增殖,有效降低了人胃癌BGC823細胞的增殖。3莪術(shù)醇聯(lián)合氟尿嘧啶能抑制人胃癌BGC823細胞裸鼠皮下移植瘤的生長,較單用莪術(shù)醇相比具有顯著統(tǒng)計學差異。4莪術(shù)醇聯(lián)合氟尿嘧啶能抑制人胃癌BGC823細胞裸鼠皮下移植瘤的生長,但較單用氟尿嘧啶相比無顯著統(tǒng)計學差異。5莪術(shù)醇抑制人胃癌BGC823細胞裸鼠皮下移植瘤的生長,其機制可能與PCNA基因表達下調(diào)、P27基因表達上調(diào)有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：莪術(shù)醇 胃癌細胞株 裸鼠皮下移植瘤 增殖細胞核抗原 P27
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.2
【目錄】：

• 中文摘要4-8
• 英文摘要8-13
• 英文縮寫13-14
• 前言14
• 材料與方法14-22
• 結(jié)果22-25
• 附圖25-32
• 附表32-34
• 討論34-36
• 結(jié)論36-37
• 參考文獻37-39
• 綜述 中藥提純物對胃癌的治療現(xiàn)狀39-49
• 參考文獻45-49
• 致謝49-50
• 個人簡歷50

【參考文獻】

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本文編號：540931