本文關(guān)鍵詞：TMZ對(duì)膠質(zhì)瘤干細(xì)胞種植瘤Livin、MRP1和MRP3的影響

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【摘要】：目的膠質(zhì)瘤是顱內(nèi)常見(jiàn)且危害性極大的惡性腫瘤,患者確診后即使接受了積極的手術(shù)切除和放射、化學(xué)藥物治療后,膠質(zhì)母細(xì)胞瘤患者的中位生存時(shí)間仍只有12-18個(gè)月[1],即使低級(jí)別的膠質(zhì)瘤也沒(méi)有完全治愈的。膠質(zhì)瘤患者的不良預(yù)后是我們醫(yī)學(xué)工作者面臨的艱巨挑戰(zhàn),因此,深入研究膠質(zhì)瘤的病因、發(fā)病機(jī)制、化療耐藥等問(wèn)題具有重要的臨床和社會(huì)價(jià)值。近年來(lái),國(guó)內(nèi)外學(xué)者成功地從膠質(zhì)瘤細(xì)胞中分離獲得膠質(zhì)瘤干細(xì)胞[3,4-6],腫瘤干細(xì)胞被認(rèn)為是腫瘤發(fā)生、發(fā)展與維持的基礎(chǔ),與腫瘤的復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移和對(duì)藥物治療的抵抗有關(guān)[7,8]。現(xiàn)有研究表明[9],從膠質(zhì)瘤中分離出來(lái)的膠質(zhì)瘤干細(xì)胞,其耐藥性比較普通的膠質(zhì)瘤細(xì)胞顯著增強(qiáng),膠質(zhì)瘤化療耐藥的主要原因可能就在于膠質(zhì)瘤干細(xì)胞可以產(chǎn)生強(qiáng)烈的化療耐藥性,導(dǎo)致患者對(duì)化療藥物抵抗并最終導(dǎo)致腫瘤復(fù)發(fā)[1 0]。因此,以膠質(zhì)瘤細(xì)胞為載體模型揭示化療耐藥作用機(jī)制有局限性,以膠質(zhì)瘤干細(xì)胞為模型的研究才有可能最終揭示膠質(zhì)瘤發(fā)生和化療耐藥的機(jī)制,才有可能研制出對(duì)膠質(zhì)瘤干細(xì)胞敏感性高的治療藥物,從而實(shí)現(xiàn)對(duì)膠質(zhì)瘤的治療[11]。內(nèi)容本課題檢測(cè)了U251細(xì)胞及其干細(xì)胞種植瘤抗凋亡基因Livin及多重耐藥基因MRP1和MRP3的表達(dá)情況,分析了膠質(zhì)瘤化療耐藥的可能原因。為此,我們培養(yǎng)U251細(xì)胞并從中分離CD133陽(yáng)性膠質(zhì)瘤干細(xì)胞,制作U251細(xì)胞及其干細(xì)胞裸鼠腦內(nèi)種植瘤模型,研究替莫唑胺對(duì)U251細(xì)胞及其干細(xì)胞裸鼠腦內(nèi)種植瘤抗凋亡基因Livin及多重耐藥基因MRP1、MRP3表達(dá)的影響。方法1.應(yīng)用免疫磁珠法從U251細(xì)胞中分選獲取CDl33陽(yáng)性膠質(zhì)瘤干細(xì)胞。2.采取腦立體定向技術(shù)及微量進(jìn)樣技術(shù)構(gòu)建U251細(xì)胞及其干細(xì)胞裸鼠腦內(nèi)種植瘤模型。飼養(yǎng)荷瘤裸鼠12天后用不同濃度替莫唑胺連續(xù)干預(yù)6天,期間觀察裸鼠的體重及生長(zhǎng)行為學(xué)變化。3.處死荷瘤裸鼠,收集腫瘤標(biāo)本,行石蠟包埋、HE染色及切片以及免疫組織化學(xué)染色,觀察腫瘤的病理學(xué)特征。4.利用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)U251細(xì)胞及其干細(xì)胞種植瘤livin、MRP1和MRP3的表達(dá)。結(jié)果1.分選后的膠質(zhì)瘤干細(xì)胞在無(wú)血清干細(xì)胞培養(yǎng)基中呈懸浮、球狀生長(zhǎng),可以不斷自我更新、復(fù)制,具有典型的“干細(xì)胞”特征。膠質(zhì)瘤干細(xì)胞Nestin檢測(cè)呈陽(yáng)性表達(dá),GFAP、β-tubulin檢測(cè)為陰性。膠質(zhì)瘤干細(xì)胞在含胎牛血清培養(yǎng)基中進(jìn)行誘導(dǎo)分化,行GFAP、β-tubulin檢測(cè)為陽(yáng)性,Nestin檢測(cè)為陰性。2.U251干細(xì)胞種植瘤組裸鼠較U251細(xì)胞種植瘤組裸鼠體重下降更快、皮膚顏色變暗更明顯,表現(xiàn)出較強(qiáng)的惡病質(zhì)。3.U251干細(xì)胞裸鼠腦內(nèi)種植瘤與正常腦組織無(wú)明顯分界。U251細(xì)胞裸鼠腦內(nèi)種植瘤與正常腦組織有較為明顯的分界。U251干細(xì)胞種植瘤GFAP的表達(dá)強(qiáng)于U251細(xì)胞種植瘤。4.U251干細(xì)胞種植瘤livin基因m RNA表達(dá)量顯著高于U251細(xì)胞種植瘤,其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。U251干細(xì)胞種植瘤中多重耐藥基因MRP1 m RNA表達(dá)量顯著高于U251細(xì)胞種植瘤,其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)。U251干細(xì)胞種植瘤中多重耐藥基因MRP3 m RNA表達(dá)量顯著低于U251細(xì)胞種植瘤,其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)�；熕幬锔深A(yù)后,U251干細(xì)胞種植瘤多重耐藥基因MRP1、MRP3m RNA表達(dá)量增高,其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)。U251細(xì)胞種植瘤多重耐藥基因MRP1 m RNA的表達(dá)量增高,而多重耐藥基因MRP3 m RNA的表達(dá)量降低,其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)。結(jié)論1.U251干細(xì)胞種植瘤模型裸鼠比較U251細(xì)胞種植瘤模型裸鼠體重下降更快,皮膚變薄,皮色變暗更明顯,表現(xiàn)較強(qiáng)的惡病質(zhì),說(shuō)明U251干細(xì)胞種植瘤較U251細(xì)胞種植瘤具有更強(qiáng)的生物學(xué)惡性。2.U251干細(xì)胞種植瘤與正常腦組織無(wú)明顯分界,而U251細(xì)胞種植瘤與正常腦組織有較為明顯的分界,說(shuō)明U251干細(xì)胞種植瘤較U251細(xì)胞種植瘤具有更強(qiáng)的侵襲性。3.多重耐藥基因MRP1和MRP3在U251細(xì)胞及其干細(xì)胞種植瘤的化療耐藥機(jī)制中發(fā)揮著不同的作用。多重耐藥基因MRP1可能在U251細(xì)胞種植瘤化療耐藥中起著更為重要的作用。而U251干細(xì)胞種植瘤化療耐藥可能表現(xiàn)在多重耐藥基因MRP1與MRP3的協(xié)同作用上。
【關(guān)鍵詞】：膠質(zhì)瘤 干細(xì)胞 Livin MRP1 MRP3
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R739.41
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語(yǔ)/符號(hào)說(shuō)明10-11
• 前言11-13
• 研究現(xiàn)狀、成果11-12
• 研究目的、方法12-13
• 一、CD133+膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)與鑒定13-21
• 1.1 對(duì)象和方法13-17
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)材料13
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)器材13-14
• 1.1.3 培養(yǎng)基和試劑的配制14
• 1.1.4 U251細(xì)胞的復(fù)蘇14-15
• 1.1.5 U251細(xì)胞的培養(yǎng)15
• 1.1.6 U251細(xì)胞的凍存15
• 1.1.7 免疫磁珠法分選CD133陽(yáng)性膠質(zhì)瘤干細(xì)胞15-16
• 1.1.8 膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的培養(yǎng)16
• 1.1.9 膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的鑒定16-17
• 1.2 結(jié)果17-19
• 1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)及CD133+膠質(zhì)瘤干細(xì)胞分選17-18
• 1.2.2 膠質(zhì)瘤干細(xì)胞鑒定18-19
• 1.3 討論19-20
• 1.4 小結(jié)20-21
• 二、TMZ對(duì)U251細(xì)胞及其干細(xì)胞種植瘤Livin、MRP1、MRP3的影響21-40
• 2.1 對(duì)象與方法21-29
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料21
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)器材21-22
• 2.1.3 培養(yǎng)基和試劑的配制22-23
• 2.1.4 實(shí)驗(yàn)分組23
• 2.1.5 U251細(xì)胞培養(yǎng)23
• 2.1.6 膠質(zhì)瘤干細(xì)胞培養(yǎng)23
• 2.1.7 收集細(xì)胞23-24
• 2.1.8 細(xì)胞計(jì)數(shù)24
• 2.1.9 接種液配制24
• 2.1.10 裸鼠腦內(nèi)種植瘤模型的制作24
• 2.1.11 藥物干預(yù)及生長(zhǎng)行為學(xué)觀察24-25
• 2.1.12 腦組織樣本的收集25
• 2.1.13 HE染色25-26
• 2.1.14 GFAP免疫組織化學(xué)染色26
• 2.1.15 RT-PCR檢測(cè)U251細(xì)胞及其干細(xì)胞種植瘤Livin、MRP1、MRP3表達(dá)量26-29
• 2.1.16 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法29
• 2.2 結(jié)果29-36
• 2.2.1 裸鼠體重變化及行為學(xué)觀察29-31
• 2.2.2 腦組織病理學(xué)觀察31-32
• 2.2.3 GFAP免疫組織化學(xué)染色結(jié)果32-34
• 2.2.4 RT-PCR檢測(cè)結(jié)果34-36
• 2.3 討論36-39
• 2.4 小結(jié)39-40
• 結(jié)論40-41
• 參考文獻(xiàn)41-46
• 發(fā)表論文和參加科研情況說(shuō)明46-47
• 綜述 膠質(zhì)瘤干細(xì)胞及其化療耐藥47-61
• 綜述參考文獻(xiàn)55-61
• 致謝61

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 方靜;譚衛(wèi)紅;;來(lái)自銀杏提取物的抗腫瘤化合物的研究進(jìn)展[J];生物質(zhì)化學(xué)工程;2008年05期

2 仇笳熙;卿晨;;腫瘤多藥耐藥機(jī)制的研究進(jìn)展[J];中國(guó)民族民間醫(yī)藥;2010年05期

3 劉瑞娟;孫長(zhǎng)崗;姜真;莊靜;劉麗娟;;逆轉(zhuǎn)膠囊對(duì)人乳腺癌MCF-7/ADR細(xì)胞中P-gp和MRP表達(dá)的影響[J];山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào);2013年01期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 孫長(zhǎng)崗;化痰散結(jié)方對(duì)人乳腺癌耐藥細(xì)胞的影響及機(jī)制[D];山東中醫(yī)藥大學(xué);2011年

2 于金慧;南方紅豆杉聚戊烯醇的分離純化與抗肝纖維化作用研究[D];浙江大學(xué);2012年

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本文編號(hào)：540637