發(fā)布時(shí)間：2017-07-07 19:17

  本文關(guān)鍵詞：ICOS miR-SNP與結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展及其機(jī)制的初步研究

  更多相關(guān)文章： 結(jié)直腸癌 ICOS 單核苷酸多態(tài)性 microRNA

【摘要】：第一部分ICOS miR-SNP與結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展的相關(guān)性研究[目的]探討ICOS基因3’-UTR內(nèi)的miR-SNP與結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展的相關(guān)性。[方法]1、運(yùn)用生物信息學(xué)軟件篩選出位于ICOS基因3'-UTR內(nèi)的SNP位點(diǎn)及可能存在的miRNA結(jié)合位點(diǎn)；選擇位于預(yù)測(cè)的miRNA結(jié)合位點(diǎn)內(nèi)的,且較小等位基因頻率(MAF)大于10%的SNP進(jìn)行研究。2、收集382例結(jié)直腸癌患者及714例正常人的外周血樣本,從中提取DNA,通過(guò)高通量SNP基因分型來(lái)檢測(cè)SNP的基因型分布。3、分析不同基因型與結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展及臨床病理參數(shù)的關(guān)系。[結(jié)果]1、從SNP數(shù)據(jù)庫(kù)中找到符合條件的SNP有：rs10183087、rs4404254,rs1559931和rs4675379；能與之結(jié)合的miRNA分別有：rs10183087位點(diǎn)位于miR-587和miR-3180-5p的結(jié)合靶點(diǎn)內(nèi)；rs4404254位點(diǎn)位于miR-186-5p、miR-520d-5p、 miR-524-5p、miR-548b-3p、miR-1276和miR-3133的結(jié)合靶點(diǎn)內(nèi)；rs1559931位點(diǎn)位于miR-587、miR-1279和miR-3692-3p的結(jié)合靶點(diǎn)內(nèi)；rs4675379位點(diǎn)位于miR-182-3p、miR-323b-5p、miR-2117、miR-2355-3p和miR-4279的結(jié)合靶點(diǎn)內(nèi)。2、成功檢測(cè)到基因型分布的SNP有：rs4404254 TC, rs1559931 GA和rs4675379 GC。3、數(shù)據(jù)分析顯示,在結(jié)直腸癌患者中,rs4404254的CC型純合子所占比例明顯低于占主導(dǎo)地位的TT型純合子(0.8%vs 2.1%；OR=0.35),而TC雜合子(21.3%vs 27.6%；OR=0.70)和C等位基因攜帶者(22.1% vs 29.7%；OR=0.58)所占比例同樣明顯低于TT型純合子。rs1559931的AA純合子所占比例明顯低于占主導(dǎo)地位的GG型純合子(1.1% vs 2.2%；OR=0.46),而GA雜合子(21.0% vs 27.2%；OR=0.70)和A等位基因攜帶者(22.1% vs 29.4%；OR=0.60)所占比例明顯低于GG型純合子。與GG純合子相較,rs4675379的A等位基因攜帶者在患者組中明顯少見(jiàn)(18.0%vs 22.0%；OR=0.66)。ICOS miR-SNPs與結(jié)直腸癌的臨床病理參數(shù)間無(wú)相關(guān)性。[結(jié)論]SNP位點(diǎn)rs4404254、rs 1559931和rs4675379與結(jié)直腸癌的發(fā)生顯著相關(guān),其C等位基因,A等位基因和C等位基因可能是結(jié)直腸癌的保護(hù)性因素。第二部分ICOS miR-SN P對(duì)ICOS表達(dá)調(diào)控機(jī)制的研究[目的]研究ICOS基因3'-UTR上的SNP位點(diǎn)對(duì)miRNA的調(diào)控作用。[方法]1、構(gòu)建野生型ICOS/3'-UTR/pGL3重組熒光素酶表達(dá)載體和突變型ICOS/3'-UTR/pGL3重組熒光素酶表達(dá)載體：(rs4404254 CC型、rs1559931AA型和rs4675379 CC型)。2、將構(gòu)建好的載體和各自相對(duì)應(yīng)miRNA共同轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞,并用雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)測(cè)定基因活性。3、運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析各SNP位點(diǎn)對(duì)miRNA的調(diào)控作用。4、通過(guò)western blot進(jìn)一步驗(yàn)證miR-SN P對(duì)于miRNA的調(diào)控作用。[結(jié)果]1、rs4404254T等位基因特異性的ICOS/3'-UTR/pGL3載體的表達(dá)被miR-186-5p顯著抑制(p=0.0072)。rs1559931 G等位基因特異性的ICOS/3'-UTR/pGL3載體的表達(dá)能被niR-1279 (p=0.0026)和miR-3692-3p (p=0.0023)顯著抑制。rs4675379 C等位基因特異性的ICOS/3'-UTR/pGL3載體的表達(dá)能被,niR-323b-5p(p= 8.27×105)顯著抑制；而rs4675379 G等位基因特異性的ICOS/3'-UTR/pGL3載體的表達(dá)能被miR-2117(p=0.03)顯著抑制。[結(jié)論]ICOS基因3’-UTR內(nèi)的SNP位點(diǎn)rs4404254TC, rsl559931 GA 和rs4675379GC在一定程度上可通過(guò)由1niR-186-5p, miR-323b-5p, miR-1279, miR-2117 和miR-3692-3p介導(dǎo)的調(diào)控機(jī)制來(lái)影響ICOS分子的表達(dá),從而改變結(jié)直腸癌的易感性。[結(jié)論]SNP位點(diǎn)rs4404254、rs 1559931和rs4675379與結(jié)直腸癌的發(fā)生顯著相關(guān),其C等位基因,A等位基因和C等位基因可能是結(jié)直腸癌的保護(hù)性因素。第二部分ICOS miR-SN P對(duì)ICOS表達(dá)調(diào)控機(jī)制的研究[目的]研究ICOS基因3'-UTR上的SNP位點(diǎn)對(duì)miRNA的調(diào)控作用。[方法]1、構(gòu)建野生型ICOS/3'-UTR/pGL3重組熒光素酶表達(dá)載體和突變型ICOS/3'-UTR/pGL3重組熒光素酶表達(dá)載體：(rs4404254 CC型、rs1559931AA型和rs4675379 CC型)。2、將構(gòu)建好的載體和各自相對(duì)應(yīng)miRNA共同轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞,并用雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)測(cè)定基因活性。3、運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析各SNP位點(diǎn)對(duì)miRNA的調(diào)控作用。4、通過(guò)western blot進(jìn)一步驗(yàn)證miR-SN P對(duì)于miRNA的調(diào)控作用。[結(jié)果]1、rs4404254T等位基因特異性的ICOS/3'-UTR/pGL3載體的表達(dá)被miR-186-5p顯著抑制(p=0.0072)。rs1559931 G等位基因特異性的ICOS/3'-UTR/pGL3載體的表達(dá)能被niR-1279 (p=0.0026)和miR-3692-3p (p=0.0023)顯著抑制。rs4675379 C等位基因特異性的ICOS/3'-UTR/pGL3載體的表達(dá)能被,niR-323b-5p(p= 8.27×105)顯著抑制；而rs4675379 G等位基因特異性的ICOS/3'-UTR/pGL3載體的表達(dá)能被miR-2117(p=0.03)顯著抑制。[結(jié)論]ICOS基因3’-UTR內(nèi)的SNP位點(diǎn)rs4404254TC, rsl559931 GA 和rs4675379GC在一定程度上可通過(guò)由1niR-186-5p, miR-323b-5p, miR-1279, miR-2117 和miR-3692-3p介導(dǎo)的調(diào)控機(jī)制來(lái)影響ICOS分子的表達(dá),從而改變結(jié)直腸癌的易感性。小結(jié)本論文主要探討了ICOS基因3’-UTR內(nèi)的miR-SNP與結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展的相關(guān)性及引起此種相關(guān)性的調(diào)控機(jī)制。研究發(fā)現(xiàn),在結(jié)直腸癌患者中,rs4404254的CC型,TC型和C等位基因攜帶者所占比例明顯偏低；rs1559931的AA型,GA型和A等位基因攜帶者所占比例明顯偏低；rs4675379的A等位基因攜帶者在患者組中明顯少見(jiàn)。故rs4404254的C等位基因,rs1559931的A等位基因和rs4675379的C等位基因可能對(duì)結(jié)直腸癌的發(fā)生起保護(hù)作用。同時(shí)通過(guò)體外功能研究發(fā)現(xiàn),rs4404254的C等位基因,rs1559931的A等位基因和rs4675379的C等位基因通過(guò)減弱miRNAs和ICOS上3'-UTR的結(jié)合力度,上調(diào)T細(xì)胞上ICOS受體的表達(dá),從而減少個(gè)體結(jié)直腸癌的發(fā)生率。這為尋找結(jié)直腸癌的遺傳病因及闡明miRSNP影響結(jié)直腸癌易感性的機(jī)制提供了新的視角。
【關(guān)鍵詞】：結(jié)直腸癌 ICOS 單核苷酸多態(tài)性 microRNA
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R735.34
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-11
• 研究背景11-16
• 一、結(jié)直腸癌(colorectal cancer,CRC)11
• 二、腫瘤微環(huán)境11
• 三、ICOS及其受體分子11-12
• 四、microRNA12
• 五、單核苷酸多態(tài)性12-13
• 六、miR-SNP13
• 參考文獻(xiàn)13-16
• 第一部分 ICOS基因3’-UTR內(nèi)的單核苷酸多態(tài)性與結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展的相關(guān)性研究16-33
• 一、試劑與材料16-18
• 二、實(shí)驗(yàn)方法18-21
• 三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果21-29
• 四、討論29-30
• 參考文獻(xiàn)30-33
• 第二部分 ICOS miR-SNP對(duì)ICOS表達(dá)調(diào)控的機(jī)制研究33-50
• 一、試劑與材料33-37
• 二、實(shí)驗(yàn)方法37-43
• 三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果43-47
• 四、討論47-48
• 參考文獻(xiàn)48-50
• 結(jié)論50-51
• 綜述51-58
• 參考文獻(xiàn)55-58
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文58-59
• 本研究所獲的基金資助59-60
• 縮寫(xiě)詞表60-61
• 致謝61

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本文編號(hào)：531489