本文關鍵詞：ICOS miR-SNP與結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展及其機制的初步研究

  更多相關文章： 結(jié)直腸癌 ICOS 單核苷酸多態(tài)性 microRNA

【摘要】：第一部分ICOS miR-SNP與結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展的相關性研究[目的]探討ICOS基因3’-UTR內(nèi)的miR-SNP與結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展的相關性。[方法]1、運用生物信息學軟件篩選出位于ICOS基因3'-UTR內(nèi)的SNP位點及可能存在的miRNA結(jié)合位點；選擇位于預測的miRNA結(jié)合位點內(nèi)的,且較小等位基因頻率(MAF)大于10%的SNP進行研究。2、收集382例結(jié)直腸癌患者及714例正常人的外周血樣本,從中提取DNA,通過高通量SNP基因分型來檢測SNP的基因型分布。3、分析不同基因型與結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展及臨床病理參數(shù)的關系。[結(jié)果]1、從SNP數(shù)據(jù)庫中找到符合條件的SNP有：rs10183087、rs4404254,rs1559931和rs4675379；能與之結(jié)合的miRNA分別有：rs10183087位點位于miR-587和miR-3180-5p的結(jié)合靶點內(nèi)；rs4404254位點位于miR-186-5p、miR-520d-5p、 miR-524-5p、miR-548b-3p、miR-1276和miR-3133的結(jié)合靶點內(nèi)；rs1559931位點位于miR-587、miR-1279和miR-3692-3p的結(jié)合靶點內(nèi)；rs4675379位點位于miR-182-3p、miR-323b-5p、miR-2117、miR-2355-3p和miR-4279的結(jié)合靶點內(nèi)。2、成功檢測到基因型分布的SNP有：rs4404254 TC, rs1559931 GA和rs4675379 GC。3、數(shù)據(jù)分析顯示,在結(jié)直腸癌患者中,rs4404254的CC型純合子所占比例明顯低于占主導地位的TT型純合子(0.8%vs 2.1%；OR=0.35),而TC雜合子(21.3%vs 27.6%；OR=0.70)和C等位基因攜帶者(22.1% vs 29.7%；OR=0.58)所占比例同樣明顯低于TT型純合子。rs1559931的AA純合子所占比例明顯低于占主導地位的GG型純合子(1.1% vs 2.2%；OR=0.46),而GA雜合子(21.0% vs 27.2%；OR=0.70)和A等位基因攜帶者(22.1% vs 29.4%；OR=0.60)所占比例明顯低于GG型純合子。與GG純合子相較,rs4675379的A等位基因攜帶者在患者組中明顯少見(18.0%vs 22.0%；OR=0.66)。ICOS miR-SNPs與結(jié)直腸癌的臨床病理參數(shù)間無相關性。[結(jié)論]SNP位點rs4404254、rs 1559931和rs4675379與結(jié)直腸癌的發(fā)生顯著相關,其C等位基因,A等位基因和C等位基因可能是結(jié)直腸癌的保護性因素。第二部分ICOS miR-SN P對ICOS表達調(diào)控機制的研究[目的]研究ICOS基因3'-UTR上的SNP位點對miRNA的調(diào)控作用。[方法]1、構(gòu)建野生型ICOS/3'-UTR/pGL3重組熒光素酶表達載體和突變型ICOS/3'-UTR/pGL3重組熒光素酶表達載體：(rs4404254 CC型、rs1559931AA型和rs4675379 CC型)。2、將構(gòu)建好的載體和各自相對應miRNA共同轉(zhuǎn)染CHO細胞,并用雙熒光素酶報告系統(tǒng)測定基因活性。3、運用統(tǒng)計學軟件分析各SNP位點對miRNA的調(diào)控作用。4、通過western blot進一步驗證miR-SN P對于miRNA的調(diào)控作用。[結(jié)果]1、rs4404254T等位基因特異性的ICOS/3'-UTR/pGL3載體的表達被miR-186-5p顯著抑制(p=0.0072)。rs1559931 G等位基因特異性的ICOS/3'-UTR/pGL3載體的表達能被niR-1279 (p=0.0026)和miR-3692-3p (p=0.0023)顯著抑制。rs4675379 C等位基因特異性的ICOS/3'-UTR/pGL3載體的表達能被,niR-323b-5p(p= 8.27×105)顯著抑制；而rs4675379 G等位基因特異性的ICOS/3'-UTR/pGL3載體的表達能被miR-2117(p=0.03)顯著抑制。[結(jié)論]ICOS基因3’-UTR內(nèi)的SNP位點rs4404254TC, rsl559931 GA 和rs4675379GC在一定程度上可通過由1niR-186-5p, miR-323b-5p, miR-1279, miR-2117 和miR-3692-3p介導的調(diào)控機制來影響ICOS分子的表達,從而改變結(jié)直腸癌的易感性。[結(jié)論]SNP位點rs4404254、rs 1559931和rs4675379與結(jié)直腸癌的發(fā)生顯著相關,其C等位基因,A等位基因和C等位基因可能是結(jié)直腸癌的保護性因素。第二部分ICOS miR-SN P對ICOS表達調(diào)控機制的研究[目的]研究ICOS基因3'-UTR上的SNP位點對miRNA的調(diào)控作用。[方法]1、構(gòu)建野生型ICOS/3'-UTR/pGL3重組熒光素酶表達載體和突變型ICOS/3'-UTR/pGL3重組熒光素酶表達載體：(rs4404254 CC型、rs1559931AA型和rs4675379 CC型)。2、將構(gòu)建好的載體和各自相對應miRNA共同轉(zhuǎn)染CHO細胞,并用雙熒光素酶報告系統(tǒng)測定基因活性。3、運用統(tǒng)計學軟件分析各SNP位點對miRNA的調(diào)控作用。4、通過western blot進一步驗證miR-SN P對于miRNA的調(diào)控作用。[結(jié)果]1、rs4404254T等位基因特異性的ICOS/3'-UTR/pGL3載體的表達被miR-186-5p顯著抑制(p=0.0072)。rs1559931 G等位基因特異性的ICOS/3'-UTR/pGL3載體的表達能被niR-1279 (p=0.0026)和miR-3692-3p (p=0.0023)顯著抑制。rs4675379 C等位基因特異性的ICOS/3'-UTR/pGL3載體的表達能被,niR-323b-5p(p= 8.27×105)顯著抑制；而rs4675379 G等位基因特異性的ICOS/3'-UTR/pGL3載體的表達能被miR-2117(p=0.03)顯著抑制。[結(jié)論]ICOS基因3’-UTR內(nèi)的SNP位點rs4404254TC, rsl559931 GA 和rs4675379GC在一定程度上可通過由1niR-186-5p, miR-323b-5p, miR-1279, miR-2117 和miR-3692-3p介導的調(diào)控機制來影響ICOS分子的表達,從而改變結(jié)直腸癌的易感性。小結(jié)本論文主要探討了ICOS基因3’-UTR內(nèi)的miR-SNP與結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展的相關性及引起此種相關性的調(diào)控機制。研究發(fā)現(xiàn),在結(jié)直腸癌患者中,rs4404254的CC型,TC型和C等位基因攜帶者所占比例明顯偏低；rs1559931的AA型,GA型和A等位基因攜帶者所占比例明顯偏低；rs4675379的A等位基因攜帶者在患者組中明顯少見。故rs4404254的C等位基因,rs1559931的A等位基因和rs4675379的C等位基因可能對結(jié)直腸癌的發(fā)生起保護作用。同時通過體外功能研究發(fā)現(xiàn),rs4404254的C等位基因,rs1559931的A等位基因和rs4675379的C等位基因通過減弱miRNAs和ICOS上3'-UTR的結(jié)合力度,上調(diào)T細胞上ICOS受體的表達,從而減少個體結(jié)直腸癌的發(fā)生率。這為尋找結(jié)直腸癌的遺傳病因及闡明miRSNP影響結(jié)直腸癌易感性的機制提供了新的視角。
【關鍵詞】：結(jié)直腸癌 ICOS 單核苷酸多態(tài)性 microRNA
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.34
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-11
• 研究背景11-16
• 一、結(jié)直腸癌(colorectal cancer,CRC)11
• 二、腫瘤微環(huán)境11
• 三、ICOS及其受體分子11-12
• 四、microRNA12
• 五、單核苷酸多態(tài)性12-13
• 六、miR-SNP13
• 參考文獻13-16
• 第一部分 ICOS基因3’-UTR內(nèi)的單核苷酸多態(tài)性與結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展的相關性研究16-33
• 一、試劑與材料16-18
• 二、實驗方法18-21
• 三、實驗結(jié)果21-29
• 四、討論29-30
• 參考文獻30-33
• 第二部分 ICOS miR-SNP對ICOS表達調(diào)控的機制研究33-50
• 一、試劑與材料33-37
• 二、實驗方法37-43
• 三、實驗結(jié)果43-47
• 四、討論47-48
• 參考文獻48-50
• 結(jié)論50-51
• 綜述51-58
• 參考文獻55-58
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表的論文58-59
• 本研究所獲的基金資助59-60
• 縮寫詞表60-61
• 致謝61

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王漢濤 ,Kraemer M.;隨訪危險因素分析:復發(fā)和非復發(fā)結(jié)直腸癌的比較[J];中國實用外科雜志;2001年12期

2 蘇森;患結(jié)直腸癌婦女后代癌癥的危險性增加[J];中國腫瘤;2001年06期

3 汪一虹;在確定的法國人群中年齡<45歲結(jié)直腸癌病人與≥45歲結(jié)直腸癌病人的比較[J];國外醫(yī)學(消化系疾病分冊);2002年01期

4 李會晨;結(jié)直腸癌解剖位置的連續(xù)性右向遷移[J];國外醫(yī)學.外科學分冊;2003年03期

5 李志霞;結(jié)直腸癌復發(fā)及轉(zhuǎn)移的綜合治療[J];中華胃腸外科雜志;2003年06期

6 何建苗,蒲永東,曹志宇,劉衛(wèi)平;老年人結(jié)直腸癌186例的外科治療[J];中華胃腸外科雜志;2003年05期

7 保紅平,方登華,高瑞崗,李奎,張雪松,劉天錫;青年人結(jié)直腸癌臨床病理分析[J];中國普外基礎與臨床雜志;2004年01期

8 章江;;監(jiān)測結(jié)直腸癌非常必要[J];國外醫(yī)學情報;2004年04期

9 郜文秀,楊艷芳,梁小波,李耀平,李佩珍;細胞粘附分子變異體在結(jié)直腸癌中的表達及預后[J];中國公共衛(wèi)生;2005年07期

10 Nozawa T. ,Enomoto T. ,Koshida Y. ,M. Kuranami,王志宇;人結(jié)直腸癌黏膜下血小板源性內(nèi)皮細胞生長因子特異性增強表達[J];世界核心醫(yī)學期刊文摘(胃腸病學分冊);2005年06期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 鄭樹;;結(jié)直腸癌預后與轉(zhuǎn)移相關因素分析[A];2005年浙江省腫瘤學術會議全國大腸癌轉(zhuǎn)移與復發(fā)的診治研討會學術論文集[C];2005年

2 鄒一峰;吳小劍;蘭平;;結(jié)直腸癌免疫治療新進展[A];第十一次全國中西醫(yī)結(jié)合大腸肛門病學術會議論文匯編[C];2006年

3 郁寶銘;;結(jié)直腸癌治療的進展及其新理念[A];2006年浙江省肛腸外科學術年會論文匯編[C];2006年

4 王錫山;;結(jié)直腸癌治療的困惑之我見[A];第九屆全國腫瘤轉(zhuǎn)移學術大會暨2011年黑龍江省醫(yī)學會腫瘤學年會報告集[C];2011年

5 秦建平;;未病思想中的結(jié)直腸癌預防[A];貴州省中西醫(yī)結(jié)合學會肛腸學會第五屆學術交流會暨新技術新進展學習班論文匯編[C];2012年

6 高文慶;陳會林;童蕾;陸松春;;老年梗阻性結(jié)直腸癌診療體會(附42例報告)[A];首屆“之江中醫(yī)藥論壇”暨浙江省中醫(yī)藥學會2011年學術年會論文集[C];2011年

7 王啟遠;周長江;高云飛;徐巖;李坤;;血管內(nèi)皮生長因子與結(jié)直腸癌[A];《中華急診醫(yī)學雜志》第八屆組稿會暨急診醫(yī)學首屆青年論壇論文匯編[C];2009年

8 巴一;;結(jié)直腸癌靶向治療進展[A];第三屆中國腫瘤內(nèi)科大會教育集暨論文集[C];2009年

9 何超;朱洪波;;結(jié)直腸癌的生物治療[A];2009年浙江省腫瘤外科學術年會暨腫瘤外科規(guī)范化診治學習班論文匯編[C];2009年

10 萬德森;;進一步提高結(jié)直腸癌療效的思考[A];2009年浙江省腫瘤學術年會暨腫瘤診治新進展學習班論文匯編[C];2009年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 中華醫(yī)學會腫瘤學分會主任委員 顧晉;分期不精確 致結(jié)直腸癌過度治療[N];健康報;2012年

2 本報記者 賈巖;跨線治療成結(jié)直腸癌最后防線[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2012年

3 本報記者 賈巖;跨線治療構(gòu)筑結(jié)直腸癌最后防線[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2012年

4 本報記者 林琳;結(jié)直腸癌：可以治愈的癌癥[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2013年

5 記者 張妍　通訊員 熊靜帆 朱品磊;深圳結(jié)直腸癌發(fā)病高于全國[N];深圳商報;2013年

6 本報記者 孫剛;預防結(jié)直腸癌：請管住嘴[N];解放日報;2013年

7 上海市中醫(yī)醫(yī)院腫瘤科 侯鳳剛 副主任醫(yī)師;中醫(yī)藥在結(jié)直腸癌治療中的作用和特色[N];上海中醫(yī)藥報;2014年

8 李華虹 孫瑜淼 記者 李麗云 實習生 陰浩;專家呼吁：結(jié)直腸癌應多學科規(guī)范化診療[N];科技日報;2014年

9 ;降低結(jié)直腸癌復發(fā)有新療法[N];人民日報;2003年

10 韓自力;新化療方案可高效治療結(jié)直腸癌[N];健康報;2007年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陳濤;MicroRNA-31/FIH-1調(diào)控關系在結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展中的作用及其機制研究[D];復旦大學;2014年

2 任翡;MYBL2基因在結(jié)直腸癌的表達及機制的初步探討[D];復旦大學;2014年

3 吳朋;結(jié)直腸癌中microRNA-615基因甲基化及其生物學特性探究[D];復旦大學;2014年

4 李澤武;MicroRNA-203靶向ZNF217基因調(diào)控結(jié)直腸癌生物學行為的研究[D];山東大學;2015年

5 徐興遠;低分子肝素對結(jié)直腸癌患者預后的影響及相關機制的研究[D];復旦大學;2014年

6 梁洪亮;miR-454在結(jié)直腸癌中的功能及其作用機制[D];山東大學;2015年

7 金鵬;MMR蛋白在雌激素致結(jié)腸癌細胞凋亡中的作用及SEPT9檢測結(jié)直腸癌的研究[D];第三軍醫(yī)大學;2015年

8 珠珠;云南省Lynch綜合征候選基因標志物研究[D];昆明醫(yī)科大學;2014年

9 周智航;SEMA3F通過下調(diào)ASCL2-CXCR4軸而抑制結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移的分子機制[D];第三軍醫(yī)大學;2015年

10 王林;MiRNA-300對結(jié)直腸癌腫瘤侵襲和增殖的影響及其調(diào)控機制的初步研究[D];第三軍醫(yī)大學;2015年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 顏斐斐;術后結(jié)直腸癌患者癌因性疲乏與影響因素的研究[D];南方醫(yī)科大學;2009年

2 李斌;結(jié)直腸癌患者就診延遲分析[D];中南大學;2009年

3 葉建杰;慈溪市結(jié)直腸癌危險因素病例對照研究[D];浙江大學;2008年

4 趙波;結(jié)直腸癌危險因素及臨床流行病學特征的調(diào)查與分析[D];廣西醫(yī)科大學;2013年

5 宋艷敏;PAQR3基因甲基化水平與結(jié)直腸癌關系的研究[D];河北大學;2015年

6 黎江;Oct4B1在結(jié)直腸癌干細胞中的表達及其與Twist的相關性研究[D];遵義醫(yī)學院;2015年

7 楊文婷;PD-L1、SIRT1在結(jié)直腸癌組織中的表達及意義[D];福建醫(yī)科大學;2015年

8 羅佳;二代測序分析散發(fā)性結(jié)直腸癌和息肉的基因突變[D];福建醫(yī)科大學;2015年

9 崔慧鵬;精氨酸琥珀酸合成酶（ASS1）高表達與結(jié)直腸癌惡性進展的相關性研究[D];中國人民解放軍醫(yī)學院;2015年

10 崔娟娟;p53和nm23在結(jié)直腸癌中的表達及其臨床意義[D];河北聯(lián)合大學;2014年

，

本文編號：531489