發(fā)布時(shí)間：2017-07-04 23:14

  本文關(guān)鍵詞：miR-203a和miR-203b基因在食管鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及其甲基化狀態(tài)分析

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【摘要】：目的:食管癌是發(fā)生在食管粘膜上皮的惡性腫瘤,根據(jù)食管癌的組織學(xué)特點(diǎn)可分為五種類型,其中食管鱗狀細(xì)胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)在食管癌中所占比例最多,大約占90%,食管腺癌(esophageal adenocarcinoma,EA)次之,占7%左右,其他幾種類型均少見。我國(guó)是世界上食管癌發(fā)生率和病死率均較高的國(guó)家之一,同時(shí)食管癌預(yù)后特別差,晚期患者生存率極低。然而到目前為止,食管癌的發(fā)病機(jī)制尚不清楚。近年來(lái)對(duì)食管癌的發(fā)病機(jī)制已進(jìn)行廣泛研究,其中對(duì)表觀遺傳學(xué)的改變特別是mi RNAs啟動(dòng)子區(qū)高甲基化已成為研究的熱點(diǎn),本研究通過(guò)檢測(cè)mi R-203a和mi R-203b基因在食管癌細(xì)胞和食管鱗癌組織中的表達(dá)及其甲基化狀態(tài),探討mi R-203a和mi R-203b基因甲基化與食管癌發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系,從而為食管癌發(fā)病的分子機(jī)制、治療方案及其評(píng)估預(yù)后等方面提供新的理論依據(jù)。方法:1應(yīng)用實(shí)時(shí)定量RT-PCR(Quantitative real-time RT-PCR,q RT-PCR)方法檢測(cè)應(yīng)用DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶抑制劑5-氮雜-2'-脫氧胞苷(5-aza-2’-deoxycitydine,5-aza-d C)處理前后的食管癌細(xì)胞系(TE1、TE13、YES-2、ECa109和T.TN)和54例食管鱗癌組織及其相應(yīng)的癌旁組織中mi R-203a和mi R-203b基因的表達(dá)。2應(yīng)用甲基化特異性PCR(methylation specific polymerase chain reaction,MSP)方法檢測(cè)應(yīng)用5-aza-d C處理前后的食管癌細(xì)胞系和83例食管鱗癌組織及其相應(yīng)的癌旁組織中mi R-203a和mi R-203b基因的甲基化狀態(tài)。3運(yùn)用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS19.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果:1 mi R-203a基因在食管癌中的表達(dá)及甲基化1.1食管癌細(xì)胞系中mi R-203a基因的表達(dá)及甲基化狀態(tài)未經(jīng)5-aza-d C處理,五種食管癌細(xì)胞中mi R-203a基因的表達(dá)均相對(duì)較低,且呈高甲基化狀態(tài);5-aza-d C處理后,mi R-203a基因的表達(dá)均顯著升高(均P0.05),YES-2細(xì)胞中mi R-203基因甲基化程度顯著降低,其余4種食管癌細(xì)胞系中mi R-203a基因?yàn)榉羌谆癄顟B(tài)。1.2食管癌組織中mi R-203a基因的表達(dá)mi R-203a基因在食管癌和其相應(yīng)的癌旁組織的表達(dá)量分別為0.253±0.099和0.481±0.189,食管癌組織mi R-203a基因的表達(dá)量明顯低于其相應(yīng)的癌旁組織,兩者的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-14.137,P=0.000)。在食管鱗癌患者中,mi R-203a的表達(dá)與腫瘤組織的腫瘤分期和分化程度有關(guān)(P0.05),而與患者的年齡、性別和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)(P0.05)。1.3食管癌組織中mi R-203a基因甲基化狀態(tài)的研究mi R-203a基因啟動(dòng)子區(qū)在食管鱗癌組織和其相應(yīng)的癌旁組織的甲基化率分別62.7%(52/83)和7.2%(6/83)。食管鱗癌組織中mi R-203a基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化發(fā)生率明顯高于其相應(yīng)的癌旁組織(χ2=3.918,P=0.048)。mi R-203a基因在低分化鱗癌組中甲基化發(fā)生率75.0%(33/44)明顯高于中高分化鱗癌組甲基化發(fā)生率48.7%(19/39)(χ2=6.103,P=0.013);Ⅲ期和Ⅳ期mi R-203a基因啟動(dòng)子區(qū)的甲基化發(fā)生率94.1%(16/17)明顯高于Ⅰ期和Ⅱ期54.5%(36/66)(χ2=9.047,P=0.003);mi R-203a基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化發(fā)生率與患者的年齡、性別和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)(P0.05)。1.4食管癌組織中mi R-203a基因的表達(dá)、甲基化狀態(tài)及其與臨床病理資料之間的關(guān)系在mi R-203a基因啟動(dòng)子區(qū)發(fā)生甲基化的食管鱗癌組織中,其平均相對(duì)表達(dá)量為0.232±0.818,未發(fā)生甲基化的食管鱗癌組織中平均相對(duì)表達(dá)量為0.313±0.120,兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.006)。2 mi R-203b基因在食管癌中的表達(dá)及甲基化2.1食管癌細(xì)胞系中mi R-203b基因的表達(dá)及甲基化狀態(tài)未經(jīng)5-aza-d C處理的5種食管癌細(xì)胞系中mi R-203b基因的表達(dá)均相對(duì)較低,同時(shí)表現(xiàn)為高甲基化狀態(tài);而應(yīng)用5-aza-d C處理后,mi R-203b在YES-2和T.TN細(xì)胞中的甲基化程度降低,非甲基化程度增加,其余3種食管癌細(xì)胞系中mi R-203b基因均表現(xiàn)為非甲基化狀態(tài)。2.2食管癌組織中mi R-203b基因的表達(dá)mi R-203b基因在食管癌和其相應(yīng)的癌旁組織的表達(dá)量分別為0.026±0.021和0.049±0.041,食管癌組織mi R-203b基因的表達(dá)明顯低于其相應(yīng)的癌旁組織,兩者的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=7.810,P=0.000)。在食管鱗癌患者中,mi R-203b的表達(dá)與腫瘤組織的分化程度有關(guān)(P0.05),而與患者的年齡、性別、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤組織的分期無(wú)關(guān)(P0.05)。2.3食管癌組織中mi R-203b基因甲基化狀態(tài)的研究mi R-203b基因啟動(dòng)子區(qū)在食管鱗癌組織和其相應(yīng)的癌旁組織中的甲基化率分別57.8%(48/83)和12.0%(10/83)。食管鱗癌組織中mi R-203b基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化發(fā)生率明顯高于其相應(yīng)的癌旁組織(χ2=6.673,P=0.010)。mi R-203b基因在低分化鱗癌組甲基化發(fā)生率68.2%(30/44明顯高于中高分化鱗癌組甲基化發(fā)生率46.2%(18/39)(χ2=4.114,P=0.043);mi R-203b基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化發(fā)生率與年齡、性別、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤組織分期無(wú)關(guān)(P0.05)。2.4食管癌組織中mi R-203b基因的表達(dá)、甲基化狀態(tài)及其與臨床病理資料之間的關(guān)系在mi R-203b基因啟動(dòng)子區(qū)發(fā)生甲基化的食管鱗癌組織中,其平均相對(duì)表達(dá)量是0.017±0.013,未發(fā)生甲基化的食管鱗癌組織中平均相對(duì)表達(dá)量是0.036±0.025,兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.001)。結(jié)論:1 mi R-203a和mi R-203b在食管癌細(xì)胞系中表達(dá)較低,且呈現(xiàn)為高甲基化狀態(tài),5-aza-d C能逆轉(zhuǎn)mi R-203a和mi R-203b基因的甲基化,使mi R-203a和mi R-203b恢復(fù)表達(dá),提示mi R-203a和mi R-203b基因啟動(dòng)子區(qū)異常甲基化有可能是導(dǎo)致它們?cè)谑彻馨┘?xì)胞中表達(dá)缺失的重要機(jī)制之一。2 mi R-203a和mi R-203b基因在食管鱗癌組織中的表達(dá)明顯低于其相應(yīng)的癌旁組織,提示mi R-203a和mi R-203b基因在食管鱗癌中可能主要起抑癌基因的作用。3食管鱗癌組織中mi R-203a和mi R-203b基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化情況明顯高于其相應(yīng)的癌旁組織,提示mi R-203a和mi R-203b基因甲基化可能是食管鱗癌發(fā)生的機(jī)制之一。4 mi R-203a和mi R-203b啟動(dòng)子區(qū)甲基化情況與患者年齡,性別等因素?zé)o關(guān),與分化程度等生物學(xué)行為有關(guān),提示mi R-203a和mi R-203b基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化與食管鱗癌的預(yù)后可能有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：食管鱗癌 甲基化 表達(dá) miR-203a miR-203b
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.1
【目錄】：

• 摘要4-8
• Abstract8-12
• 英文縮寫12-13
• 前言13-14
• 材料與方法14-24
• 結(jié)果24-26
• 附圖26-30
• 附表30-36
• 討論36-39
• 結(jié)論39
• 參考文獻(xiàn)39-43
• 綜述43-54
• 參考文獻(xiàn)49-54
• 致謝54-55
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷55

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 田慎之,江孝清,周緒紅;p63基因的研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué);2003年05期

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本文編號(hào)：519705